Name: قياس معدل الأيض في ذبابة الفاكهة باستخدام قياس التنفس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 31 s
Description: تعلم قياس معدل الأيض النسبي في ذبابة الفاكهة D. melanogaster باستخدام مقياس التنفس لإنتاج ثاني أكسيد الكربون. تتيح هذه الطريقة مقارنة معدلات الأيض بين المجموعات التجريبية والضابطة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نود أن نشكر جمعية ماكس بلانك لتمويل أبحاثنا.

<html> 1. إعداد قياس التنفس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع 1،000 ميكرولتر ماصة مع شفرة حلاقة للسماح بإدخال الشعرية micropipette 50 ميكرولتر، في محاولة للحصول على طرف ماصة كما مستقيم ممكن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطعة من المادة العازلة في ماصة ودفعها لأسفل في تلميح ماصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة كمية صغيرة من ثاني أكسيد الكربون 2 ماصة واحتوائه من قبل القطعة الثانية من الرغوة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق الغراء في المكان الذي يتم إدراج micropipette في تلميح ماصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك بين عشية وضحاها مقياس التنفس للسماح للالغراء لتجف. ويرد التخطيطي لمقياس التنفس في الشكل 1A. </li></ol> 2. إعداد غرفة القياس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحل غرفة عن طريق خلط الماء مع يوزين في نسبة من شأنها أن تؤدي في التلوين مرئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب الحل يوزين / الماء إلى الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية أحد جانبي الغرفة مع مقياس سنتيمتر. </li></ol>معشوقة = &quot;jove_title&quot;&gt; 3. وضع الذباب في قياس التنفس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمية قياس التنفس الفردية مع علامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الذباب باستخدام طريقة بديلة لثاني 2 وتضع 3-5 الذباب من النمط الجيني المطلوب داخل كل مقياس التنفس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم قياس التنفس بإحكام في أعلى باستخدام المعجون دائنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسمح الذباب للتعافي من التخدير لحوالي 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مقياس التنفس واحد دون الذباب، والتي سيتم استخدامها كعنصر التحكم في الغلاف الجوي. </li></ol> 4. المسرحية التجربة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شنق قياس التنفس في غرفة عن طريق ربط 1.5 مل إيبندورف حامل أنبوب مفتوح على أعلى وأسفل في الجزء العلوي من القاعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج قياس التنفس مع طرف micropipette إلى أسفل داخل غرفة السماح للتلميح إلى يغرق في حل الملونة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الفازلين بين الغطاء غطاء وغرفة لتوفير العزلة أقوى من درجة الحرارة والضغط fluctuations. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الغطاء والسماح للنظام للتوازن لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التقاط صورة من الغرفة والتأكد من أن مستوى السائل داخل كل micropipette مرئيا وذلك هو المقياس (انظر المثال هو موضح في الشكل 1B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1-2 ساعة، التقاط صورة أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم الانتهاء من التجربة، وإزالة الذباب من قياس التنفس وتزن إذا رغبت أو نقلها إلى القارورة إذا لزم الأمر أبعد من ذلك. </li></ol> 5. تحليل النتائج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اكتسبت المفتوحة الصور باستخدام برنامج ImageJ 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقياس في كل صورة، ضبط التحجيم بكسل في البرنامج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس المسافة (Δd) أن السائل سافر من بقعة إشارة العزم في الصور التي التقطت في بداية (D1) ونهاية التجربة (D2). ويرد مثال التخطيطي في الشكل 1C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب كمية إنتاج CO 2 (ميكرولتر / ساعة / ذبابة) مع الصيغة: </li></ol><img alt="الشكل 1" fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51681/51681eq1.jpg" /> R = نصف قطر أنبوب micropipette في سم Δd = المسافة انتقلت السائل حتى في micropipette من عينات اختبار قياس بالسنتيمتر انتقلت Δc = المسافة السائل حتى في micropipette من العينة السيطرة السلبية (بدون الذباب) n = عدد من الذباب المستخدمة ح = ساعات

<ol><li>Van Voorhies, W. A., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+the+%26%2334%3Brate+of+living%26%2334%3B+model%3A+further+evidence+that+longevity+and+metabolic+rate+are+not+inversely+correlated+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Testing the &#34;rate of living&#34; model: further evidence that longevity and metabolic rate are not inversely correlated in Drosophila melanogaster.</a> J Appl Physiol. 97, 1915-1922 (2004).</li>
<li>Ross, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-specific+decrease+in+aerobic+efficiency+associated+with+increase+in+oxygen+free+radical+production+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Age-specific decrease in aerobic efficiency associated with increase in oxygen free radical production in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 1477-1480 (2000).</li>
<li>van Voorhies, W. A., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selected+contribution%3A+long-lived+Drosophila+melanogaster.+lines+exhibit+normal+metabolic+rates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Selected contribution: long-lived Drosophila melanogaster. lines exhibit normal metabolic rates.</a> J Appl Physiol. 95, 2605-2613 (2003).</li>
<li>Hulbert, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+rate+is+not+reduced+by+dietary-restriction+or+by+lowered+insulin%2FIGF-1+signalling+and+is+not+correlated+with+individual+lifespan+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Metabolic rate is not reduced by dietary-restriction or by lowered insulin/IGF-1 signalling and is not correlated with individual lifespan in Drosophila melanogaster.</a> Experimental Gerontology. 39, 1137-1143 (2004).</li>
<li>Ueno, T., Tomita, J., Kume, S., Kume, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+modulates+metabolic+rate+and+temperature+sensitivity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Dopamine modulates metabolic rate and temperature sensitivity in Drosophila melanogaster.</a> PLoS ONE. 7, (2012).</li>
<li>Takeuchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+temperature+preferences+and+energy+homeostasis+in+dystroglycan+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Changes in temperature preferences and energy homeostasis in dystroglycan mutants.</a> Science. 323, 1740-1743 (2009).</li>
<li>Kucherenko, M. M., Marrone, A. K., Rishko, V. M., Magliarelli Hde, F., Shcherbata, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+and+muscular+dystrophy%3A+a+genetic+screen+for+dystroglycan+and+dystrophin+interactors+in+Drosophila.+identifies+cellular+stress+response+components%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Stress and muscular dystrophy: a genetic screen for dystroglycan and dystrophin interactors in Drosophila. identifies cellular stress response components.</a> Developmental Biology. 352, 228-242 (2011).</li>
<li>Marrone, A. K., Kucherenko, M. M., Wiek, R., Gopfert, M. C., Shcherbata, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperthermic+seizures+and+aberrant+cellular+homeostasis+in+Drosophila+dystrophic.+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Hyperthermic seizures and aberrant cellular homeostasis in Drosophila dystrophic. muscles.</a> Scientific Reports. 1, 47 (2011).</li>
<li>Khazaeli, A. A., Van Voorhies, W., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+and+metabolism+in+Drosophila+melanogaster%3A+genetic+correlations+between+life+span+and+age-specific+metabolic+rate+in+populations+artificially+selected+for+long+life%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Longevity and metabolism in Drosophila melanogaster: genetic correlations between life span and age-specific metabolic rate in populations artificially selected for long life.</a> Genetics. 169, 231-242 (2005).</li>
<li>Elia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Energy+equivalents+of+CO2+and+their+importance+in+assessing+energy+expenditure+when+using+tracer+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Energy equivalents of CO2 and their importance in assessing energy expenditure when using tracer techniques.</a> The American Journal of Physiology. 260, (1991).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9, 676-682 (2012).</li>
<li>Bharucha, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epicurean+fly%3A+using+Drosophila+melanogaster.+to+study+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">The epicurean fly: using Drosophila melanogaster. to study metabolism.</a> Pediatric Research. 65, 132-137 (2009).</li>
<li>Rajan, A., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+flies+and+men%3A+insights+on+organismal+metabolism+from+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biology%22%5BJournal%5D)">Of flies and men: insights on organismal metabolism from fruit flies.</a> BMC Biology. 11, 38 (2013).</li>
</ol>

ليس لدينا شيء في الكشف عنها.

في هذا البروتوكول، ونحن تصف طريقة غير مكلفة ويمكن الاعتماد عليها لقياس ثاني أكسيد الكربون 2 الإنتاج في الذباب. وجدنا أن هذه التجربة هي سهلة وسريعة لإجراء ويولد بيانات قابلة للتكرار وهذا هو في اتفاق مع دراسات أخرى 1، 6، 9. بروتوكول المذكورة هنا يمكن تعديلها بسهولة لتناسب الميزانية المتاحة ومواد أي المختبر. بناء مقياس التنفس كل فرد يمكن تكييفها طالما بقيت في غرفة محكمة الإغلاق. ومع ذلك، فإن أطول، أرق بال micropipettes تقديم المزيد من الدقة على مدى أقصر منها. اس...

دورة البيوكيميائية كريب يولد ATP من خلال الأكسدة من خلات المستمدة من الكربوهيدرات والدهون والبروتينات وإنتاج ثاني أكسيد الكربون 2. في ذبابة الفاكهة، ويرتبط O 2 مدخلات مباشرة مع CO 2 الناتج ويعكس مستوى التمثيل الغذائي 1. وبالتالي، فقد استخدمت بنجاح قياس CO 2 الناتج في الدراسات المتعلقة بالشيخوخة والتمثيل الغذائي 2-5. هنا مختبرنا وتعديل الاجهزة التجريبية المصممة مسبقا، مما يتيح قياس ثاني أكسيد الكربون 2 في إنتاج ما يصل إلى ثمانية عشر عينات دون الحاجة إلى أي معدات متخصصة. الآخرين، ونحن قد استخدمت سابقا هذه الطريقة لإظهار الفروق في معدلات الأيض في الذباب التي تعاني من نقص في البروتين العضلي ضمور المرتبطة بها، Dystroglycan (المديرية العامة) 6-8. O 2 تستخدم لالأيض المؤكسدة يتم تحويلها إلى CO 2، الذي طرد في حاوية نفايات في الجهاز التنفسي. والإنشاءاتيوصف نشوئها قياس التنفس المصنوعة يدويا التي تسمح لتحديد معدل استهلاك O 2. يتم وضع الذباب في حاوية مغلقة مع المادة التي تمتص ثاني أكسيد الكربون طرد 2، والقضاء بكفاءة من المرحلة الغازية. ويتم قياس التغير في حجم الغاز (الضغط انخفض) عن تشريد السائل في الزجاج الشعرية التي تعلق على مقياس التنفس مغلقة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة مع الآخرين هو التكلفة. وقد تقاس الدراسات السابقة CO 2 الانتاج بمقدار ذبابة الفاكهة باستخدام محللات الغاز وأنظمة قياس التنفس تقدما من الناحية التقنية 1،9. على الرغم من المعدات أكثر تعقيدا، وحساسية الطريقة الموصوفة هنا يشبه القيم ذكرت (الجدول 1). بالإضافة إلى ذلك، قد استخدمت العديد من المجموعات الأخرى من الاختلافات هذه التقنية لتحديد معدلات التمثيل الغذائي النسبي في ذبابة الفاكهة 4-6. لذلك، هذا الاختبار يمكن استخدامها لتوليد reliabجنيه، والبيانات ذات الصلة استنساخه لذبابة الفاكهة الأيض دون شراء المعدات المتخصصة التي يمكن أن تكون في أي مختبر الإعداد، ويمكن استخدامها لأغراض تعليمية. بشكل عام، تقنيات مقبولة لتحديد التمثيل الغذائي للكائن الحي هو قياس CO 2 تنتج، وO 2 المستهلكة، أو كليهما 3،4،9. رغم ذلك، فإنه يمكن الافتراض أن ما يعادل واحد من O 2 يولد ما يعادل واحد من ثاني أكسيد الكربون 2، ونسبة دقيقة من CO 2 إنشاؤها تعتمد على الركيزة الأيض تستخدم 10. وبالتالي، لتحديد بدقة معدل الأيض في وحدات الطاقة فمن الضروري قياس كل من O 2 CO 2 المستهلكة والمنتجة. ونتيجة لهذا، فإن الطريقة الموصوفة هنا هو ذات الصلة على وجه التحديد لمقارنة الاختلافات في CO 2 الإنتاج بين الحيوانات وليس قيمة مطلقة. أسلوبنا يدمج متعددة الحيوان CO 2 الإنتاج على مدى فترة من تيمه (1-2 ساعة) وبالتالي إرجاع متوسط ​​النشاط الحيوانات. إذا كان هناك سبب للاعتقاد بأن حيوانات التجارب هي أقل نشاطا من الحيوانات سيطرة القياس يمكن أن تعكس مستويات مختلفة من النشاط وليس بالضرورة عملية التمثيل الغذائي.

<table><tbody><tr><td>BlauBrand IntraMark 50 & micro; ل الماصات الدقيقة</td><td>VWR</td><td>612-1413</td><td></td></tr><tr><td>الصودا الجير</td><td>واكو</td><td>CDN6847</td><td></td></tr><tr><td>Eosine &nbsp ؛</td><td>سيجما</td><td>031M4359</td><td>يمكن استخدام أي صبغة يمكن أن تخلق تلوينا مرئيا للسائل</td></tr><tr><td>غرفة تطوير الطبقة الرقيقة Chromatorgaphy (TLC)</td><td>VWR</td><td>21432-761</td><td>أي غرفة زجاجية شفافة يمكن إغلاقها بالغطاء</td></tr><tr><td>مخدر ، Lull-A-Fly Kit</td><td>Flinn</td><td>FB1438</td><td></td></tr><tr><td>Power Gel Glue</td><td>Pritt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 مل نصائح ماصة</td><td>أي</td><td></td><td></td></tr><tr><td>رغوة</td><td>أي</td><td></td><td></td></tr><tr><td>معجون Plaesticine أي</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>مشرط أي ملاقط</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>أي</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

قياس معدل الأيض في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; باستخدام قياس التنفس

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

الاضطرابات الأيضية هي مشكلة متكررة تؤثر على صحة الإنسان. وبالتالي، فهم الآليات التي تنظم عملية التمثيل الغذائي هي مهمة علمية حاسمة. المرض يسبب العديد من الجينات في البشر لها نديد ذبابة، مما يجعل ذبابة الفاكهة نموذجا جيدا لدراسة مسارات الإشارات المشاركة في تطوير اضطرابات مختلفة. بالإضافة إلى ذلك، فإن قابلية الإستطراق من ذبابة الفاكهة يبسط شاشات الجينية للمساعدة في تحديد الأهداف العلاجية الرواية التي قد تنظم عملية التمثيل الغذائي. من أجل أداء هذه الشاشة طريقة بسيطة وسريعة لتحديد التغيرات في التمثيل الغذائي للدولة من الذباب هو ضروري. بشكل عام، وإنتاج ثاني أكسيد الكربون هو مؤشر جيد للأكسدة الركيزة والطاقة النفقات وتوفير المعلومات حول حالة الأيض. في هذا البروتوكول ونحن نقدم طريقة بسيطة لقياس CO 2 الناتج من الذباب. هذه التقنية يمكن أن يحتمل أن تكون مساعدة في تحديد الاضطرابات الوراثية التي تؤثر على معدل الأيض.

من أجل إظهار أن أسلوب حساس قمنا بقياس CO 2 الإنتاج من النوع البري (ولاية أوريغون R) الذباب الذكور في 18، 25، و 29 درجة مئوية والذباب متحولة عن المديرية العامة. وأثيرت الذباب عند 25 درجة مئوية ومن ثم تحولت إلى درجة حرارة تجريبية لمدة 5 أيام قبل القياس. كما هو متوقع لهذا النوع ectothermic، تنتج كمية من ثاني أكسيد الكربون 2 زيادة مع درجة الحرارة (الشكل 2). قمنا في الماضي أظهرت أن اتباع نظام غذائي السكر الحر يقلل من معدل التمثيل...

الاضطرابات الأيضية هي من بين واحدة من الأمراض الأكثر شيوعا لدى البشر. نموذج كائن لين العريكة وراثيا D. ويمكن استخدام البطن لتحديد الجينات الرواية التي تنظم عملية التمثيل الغذائي. وتصف هذه الورقة طريقة بسيطة نسبيا والتي تسمح بدراسة معدل الأيض في الذباب عن طريق قياس إنتاجها CO 2.

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

الهدف من هذا الإجراء هو تحديد معدلات الأيض النسبية للذباب عن طريق قياس إنتاجه من ثاني أكسيد الكربون. يتم تحقيق ذلك أولاً بوضع الذباب في مقاييس بارومتر تنفسية (respir barometers) مجهزة خصيصاً. بعد ذلك، يتم إدخال مقاييس بارومتر التنفس التي تحتوي على الذباب في غرفة كروماتوغرافيا بحيث تلامس محلولاً مائياً ملوناً.بمرور الوقت، ينتقل السائل إلى جهاز قياس التنفس نتيجة انخفاض الضغط الناجم عن إزالة ثاني أكسيد الكربون المطرود من البيئة الغازية قبل وبعد العملية. وتُستخدم صور التجربة لحساب كمية ثاني أكسيد الكربون الناتج بناءً على أبعاد الشعيرة في جهاز قياس التنفس. وفي النهاية، ستسمح البيانات التي تم الحصول عليها في هذا المقايسة بمقارنة معدلات الأيض النسبية بين الذباب التجريبي وذباب المجموعة الضابطة.للبدء، قم بقص طرف ماصة سعة 1000 ميكرولتر باستخدام شفرة حلاقة بحيث يكون القص مستوياً قدر الإمكان، ثم أدخل الماصة الدقيقة في طرف الماصة سعة 1000 ميكرولتر. بعد ذلك، ضع قطعة من الإسفنج داخل الماصة واضغطها لأسفل. ثم أضف كمية صغيرة من الصودا الجيرية وثبتها بقطعة ثانية من الإسفنج.ضع الغراء في نقطة إدخال الماصة الدقيقة في طرف الماصة واتركه ليجف طوال الليل. قم بتحضير محلول الغرفة عن طريق خلط الماء مع الإيوسين بنسبة 1 إلى 5، مما سيؤدي إلى تلوين مرئي. بعد ذلك، صب محلول الإيوسين والماء في الغرفة.بعد ذلك، قم بتحديد الجانب الرأسي للحجرة بمقياس السنتيمتر والجانب الأفقي بملصقات جهاز قياس التنفس. قم بتجهيز مقاييس التنفس عن طريق تسميتها بشكل فردي باستخدام قلم تحديد. إذا كنت تقوم بتحليل عدة أنماط جينية، فلا تنسَ تدوين رقم جهاز قياس التنفس والنمط الجيني المقابل له.بعد ذلك، قم بتثبيت الذباب باستخدام لوح معدني مبرد مسبقاً، وضع من ثلاث إلى خمس ذبابات من النمط الجيني المطلوب. داخل كل جهاز قياس تنفس، أحكم غلق مقاييس الضغط التنفسي من الأعلى باستخدام معجون البلاستيسين، واترك الذباب ليتعافى من التخدير لمدة 15 دقيقة. قم بتجهيز جهاز قياس تنفس واحد بدون ذباب لاستخدامه كعينة ضابطة للغلاف الجوي.بعد ذلك، قم بتثبيت حامل أنابيب "إينور" سعة 1.5 ملليلتر. افتح الجانبين في الجزء العلوي من الغرفة وعلّق مقاييس التنفس البارومترية داخل الغرفة مع غمر الأطراف في المحلول الملون. أضف الفازلين بين غطاء السدادة والغرفة لتوفير عزل أقوى من تقلبات درجة الحرارة والضغط.بعد ذلك، أغلق الغطاء واترك النظام ليصل إلى حالة التوازن لمدة 15 دقيقة. ثم التقط صورة للحجرة، مع التأكد من أن مستوى السائل داخل كل ماصة ميكرونية والمقياس يظهران في الإطار. وبعد مرور ساعة إلى ساعتين، التقط صورة أخرى لبدء التحليل.افتح الصور التي تم الحصول عليها باستخدام برنامج Image J. بعد ذلك، قم بضبط مقياس البكسل (pixel scaling) في البرنامج. وباستخدام كل صورة كمرجع، قم بقياس المسافة أو delta D، التي قطعها السائل من نقطة مرجعية محددة في الصور التي تم التقاطها في بداية التجربة ونهايتها.أخيراً، احسب كمية ثاني أكسيد الكربون الناتجة. وباستخدام هذه الطريقة، لوحظ أن إنتاج ثاني أكسيد الكربون في الذباب يرتبط إيجابياً بدرجة حرارة السكن. وتتعارض هذه النتائج مع طفرات District Li Ccan أو DG التي شهدت زيادة كبيرة في إنتاج ثاني أكسيد الكربون مقارنة بـذباب النوع البري.تتيح الطريقة الموصوفة أعلاه التحديد الأولي للطفرات الجينية في الذباب التي يمكن أن تؤدي إلى تغيرات في عملية التمثيل الغذائي.

measurement-of-metabolic-rate-in-drosophila-using-respirometry

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

تصف هذه الورقة طريقة لقياس أكسدة الوقود في ذبابة الفاكهة السوداء التي يتم فيها تغذية كميات ضئيلة من ركائز التمثيل الغذائي المحددة ذات العلامات الإشعاعية للذبابة. يتم جمع وقياس الزفير ذو التصنيف الراديويCO2 الناتج عن أكسدة الوقود.

قياس إنتاج ثاني أكسيد الكربون من رديولبلد ركائز في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

ويرد في هذه الورقة، طريقة لقياس استهلاك الأوكسجين باستخدام ريسبيروميتري عالية الدقة في ثوراكسيس بيرميبيليزيد من المورفولوجية. هذا الأسلوب يتطلب مقداراً قليلاً من الأنسجة مقارنة بتقنية عزل المتقدرية الكلاسيكية وما تحقق من النتائج ذات صلة أكثر فسيولوجيا.

قياس استهلاك الأوكسجين المتقدرية في ألياف بيرميبيليزيد من المورفولوجية استخدام كميات ضئيلة من الأنسجة

يمكن أن يستحث التناوب ممارسة القياس الكمي النظام (ريكس) ممارسة في melanogaster المورفولوجية من خلال التناوب أثناء قياس مقدار نشاط يقوم به الحيوانات في وقت واحد. هنا، يقدم تفاصيل عن كيفية قياس مستويات النشاط الحيوانات تعاني من العلاجات ممارسة التناوب REQS. باستخدام بروتوكول نقطة...

قياس "مستويات ممارسة" في المورفولوجية melanogaster تدوير ممارسة القياس الكمي النظام (ريكس) باستخدام

نقدم بروتوكولا لقياس استهلاك الأوكسجين وتحمض خارج الخلية في العقول melanogaster المورفولوجية اليرقات والكبار. ويستخدم هو محلل ايضية مع بروتوكولا مدروسا والأمثل. القيود الأنسجة الدقيقة هي عنصر حاسم لهذا البروتوكول وصممت وأنشئت خصيصا لاستخدامها في هذا التحليل.

التحليل الأيضي اليرقات melanogaster المورفولوجية و "العقول الكبار"

قياس التنفس بقياس الكولوم مثالي لقياس معدل الأيض للكائنات الحية الدقيقة. عند تكييفه مع ذبابة الفاكهة الميلانية في الدراسة الحالية ، كان استهلاك O2 المقاس ضمن النطاق الذي تم الإبلاغ عنه للنوع البري D. melanogaster من خلال الدراسات السابقة. كان استهلاك O2 لكل ذبابة بواسطة طفرات CASK ، وهي أصغر حجما وأقل نشاطا ، أقل بكثير من النوع البري.

قياس استهلاك O2 في ذبابة الفاكهة الميلانية باستخدام قياس التنفس المجهري بقياس الكولوم

نقدم هنا بروتوكول قياس التنفس عالي الدقة لتحليل الطاقة الحيوية في ذباب الفاكهة الطافر PINK1B9-null. تستخدم الطريقة بروتوكول الركيزة - فك التوصيل - المثبط - المعايرة (SUIT).

تحليل وظيفة الميتوكوندريا في ذبابة الفاكهة الميلانوجاستر PINK1B9-null الطافرة باستخدام قياس التنفس عالي الدقة

في هذه المقالة الفيديو ، ونحن تصف طريقة جديدة تسمح للبناء التدرجات الرائحة مع هندستها مستقر وتحت السيطرة. باختصار نحن لتوضيح كيف يمكن استخدام هذه التدرجات للكشف عن العيوب الشمية (خشام الكامل والجزئي) ، ودراسة ملامح أكثر مكرا من السلوك الكيميائي.

عالية الدقة قياس سلوك رائحة يحركها يرقات ذبابة الفاكهة في

ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا هو كائن نموذج قوية لاستكشاف الأساس الجزيئي للتنظيم طول العمر. وهذا البروتوكول مناقشة الخطوات المتبعة في توليد استنساخه، على أساس السكان قياس طول العمر وكذلك المزالق المحتملة وكيفية تجنبها.

قياس عمر في<em&gt; ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا</em

قياس معدل الترشيح الكبيبي (GFR) هو المعيار الذهبي لتقييم وظائف الكلى. هنا نحن تصف طريقة الإنتاجية العالية التي تسمح بتحديد GFR في الفئران واعية باستخدام حقنة واحدة بلعة، وتحديد فلوريسئين ثيوسيانات (FITC)، حبوب في البلازما وحساب GFR بواسطة نموذج الاضمحلال الأسي على مرحلتين.

وهناك طريقة عالية الإنتاجية لقياس معدل الترشيح الكبيبي في الفئران وإدراكا

نحن هنا تصف طريقة لقياس سريع ودقيق للأداء الطيران في ذبابة الفاكهة، مما يتيح الفرز الفائق الإنتاجية.

لتحسين طريقة لقياس دقة وسرعة الأداء في الطيران<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

تعلم قياس معدل الأيض النسبي في ذبابة الفاكهة D. melanogaster باستخدام مقياس التنفس لإنتاج ثاني أكسيد الكربون. تتيح هذه الطريقة مقارنة معدلات الأيض بين المجموعات التجريبية والضابطة.

قياس معدل الأيض في

استكشف المزيد من الفيديوهات