تقييم الجدوى من الدهون الإنسان الحقن في الفئران عارية مع مايكرو-التصوير المقطعي

الهدف العام من هذا الإجراء هو وصف نموذج الفأر الذي يستخدم التصوير المقطعي المحوسب الصغير لمقارنة الاحتفاظ بالحجم بين تقنيات تأجيل إعداد الكسب غير المشروع للدهون وتسليمها. يتم تحقيق ذلك عن طريق المعالجة الأولى لشفط الدهون البشرية للحصول على الدهون جاهزة للتطعيم. الخطوة الثانية هي وضع ترقيع الدهون في فروة رأس الفئران الصعترية الصعبة

بعد ذلك ، يتم تحليل بقاء الكسب غير المشروع الدهني أسبوعيا بواسطة الفئران بالأشعة المقطعية ، وإعادة بناء الصور ، وتحديد الاحتفاظ بالحجم. الخطوة الأخيرة هي تخطيط طعم الدهون في نهاية ثمانية أسابيع ومقارنتها بالوزن والأنسجة. في النهاية ، يتم استخدام التصوير المقطعي المحوسب الصغير والأنسجة لإظهار الاختلافات في جودة طعم الدهون والبقاء على قيد الحياة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل وزن الطعوم الدهنية ، هي أنها تسمح بتصور حجم الكسب غير المشروع الدهني وقياسه بشكل موضوعي في نقاط زمنية متعددة بعد التطعيم الأولي دون الحاجة إلى التضحية بحيوان الدراسة. خطرت لنا فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما بدأنا في استخدام التصوير المقطعي المحوسب الصغير لتحليل عيوب calva. الآثار المترتبة على هذه التقنية هي أنها تقدم نموذجا جراحيا لجميع الدراسات التي تقيم طعم الدهون والاحتفاظ بها وقابليتها للحياة.

بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأن احتواء الطعم الدهني في الموضع الصحيح فوق فروة الرأس أمر صعب. يعد العرض المرئي لهذه التقنية أمرا بالغ الأهمية حيث يصعب تعلم خطوات التطعيم وإعادة البناء نظرا لوجود العديد من المراحل التي يمكن أن يؤدي فيها انحراف بسيط في التقنية إلى تغيير النتيجة. باستخدام إجراء كولمان ، احصل على الأنسجة الدهنية البشرية من مناطق البطن والخاصرة والفخذ للمريضات الأصحاء اللواتي يخضعن لعملية شفط الدهون الاختيارية.

لمعالجة شفط الدهون للتطعيم ، ابدأ بالسماح للدهون بالاستقرار لمدة 30 دقيقة. عادة ما يستقر شفط ليبو في ثلاث طبقات مع الزيت في الأعلى والدهون في المنتصف والدم في الأسفل. قم بالشفط والتخلص من طبقة الزيت العليا متبوعة بطبقة الدم السفلية.

لإزالة أي سائل منتفخ متبقي أو بقايا خلية ، قم بالطرد المركزي للدهون لمدة خمس دقائق عند 350 جيجا وأربع درجات مئوية. بعد الطرد المركزي ، قم بشفط طبقة الدم السفلية وتستمر طبقة الزيت العليا. لحساب كمية الدهون اللازمة للتطعيم كما هو موضح في بروتوكول النص ، لإجراء تطعيم الدهون ، احصل على قرص مضغوط متماثل الزيجوت الأنثوي واحد من الفئران العارية.

بالنسبة للدراسة التجريبية ، اختر الفئران التي تتراوح أعمارها بين ثمانية إلى 12 أسبوعا للحث على التخدير. ضع الماوس في صندوق ضربة قاضية يحتوي على 2.5٪ من خليط أكسجين الفلور بمعدل لترين في الدقيقة لمدة 10 دقائق تقريبا عندما يتباطأ معدل تنفس الفأر. تأكد من التخدير الكافي بضغطة إصبع القدم.

ضع مرهم ترطيب بيطري للعيون على كلتا عيني الفأر وضع أنف الفأر في مخروط الأنف ، مما يوفر خليط أكسجين الفلور ISO بنسبة 2.5٪ بمعدل لتر إلى لترين في الدقيقة. بعد ذلك ، قم بإعداد حقل معقم تحت الماوس. ثم تعقيم فروة الرأس باستخدام 2.5٪ بوفيدون اليود ، متبوعا بمحلول الإيثانول بنسبة 70٪.

كرر التعقيم مرتين أخريين. تحميل احتياطي حقنة قفل إغراء واحد مليلتر مع مليلتر واحد من الدهون التي تم موازنتها مع درجة حرارة الغرفة. قم بتوصيل قنية تطعيم الدهون بطول 14 سمات بنهاية المحقنة.

قم بتجهيز النظام عن طريق الضغط على مكبس المحقنة حتى يبقى ما بين 200 و 400 ميكرولتر من الدهون في المحقنة. أثناء الضغط على مكبس المحقنة ، تأكد من أن القنية ممتلئة بالكامل بالدهون من خلال مراقبة خروج الدهون من ثقب القنية البعيدة باستخدام ملقط دقيق. ارفع الجلد الظهري في خط الوسط الذي يغطي معظم جوانب الجمجمة.

قم بعمل قطع 1.5 ملم في الجلد باستخدام مقص ناعم. ضع خياطة نايلون بستة أوه في منتصف القطع والتي سيتم استخدامها لاحقا لتجميع حواف الجرح معا. بعد إجراء التطعيم ، لا تربط الخياطة.

ثم قم بإنشاء جيب تحت الجلد فوق الجمجمة عن طريق إدخال القنية من خلال شق الجلد وتمرير القنية ذهابا وإيابا بنمط على شكل مروحة فوق الجمجمة لتحرير أي مرفقات للنسيج الضام بالجلد المغطى بمجرد إنشاء الجيب ، ضع القنية في خط الوسط للفأر مباشرة فوق الجمجمة حتى يقع الطرف في جانب الثيراموس من الجيب ، والتي يجب أن تكون خلف خط مرسوم بين العينين. قم بحقن الدهون ببطء بطريقة رجعية ، مع دفع المكبس أثناء سحب القنية للخلف. باستخدام الملقط ، اجمع حواف الجرح معا وارفعها لمنع تسرب أي دهون من الجيب.

اربط الخيط الذي تم وضعه مسبقا ، مع التأكد من أن العقدة الأولى تقع برفق على الجلد. اربط ثلاث عقدة مربعة أخرى واقطع الخيط بذيل ثلاثة ملليمترات. أخرج الماوس من التخدير واستمر في التعافي كما هو مفصل في بروتوكول النص.

قبل إجراء الفحص الأول ، قم بمعايرة التصوير المسبب للتصوير باستخدام شبح التصوير الذي يميز بين الهواء والماء وكثافة العظام. بعد المعايرة. ضع أربعة فئران في الماسح الضوئي في الوضع البطني مع وجود فأرين في الأعلى واثنان في الأسفل.

ضعه على سرير مسح. تم إنشاؤه مسبقا من 60 محاقن ملليلتر لتثبيت جسم الماوس و 10 محاقن مليلتر كمخاريط أنف. تأكد من خلال صورة استكشافية أنه سيتم تصوير جمجمة الفأر بالكامل من الأنف إلى فقرة عنق الرحم الأولى ومن أعلى الجمجمة إلى قاعدة الجمجمة.

تابع الفحص كما هو مفصل في بروتوكول النص. افتح الصور المعاد بناؤها باستخدام برنامج تحليل التصوير المقطعي المحوسب الصغير الذي يسمح بإنشاء مناطق ذات أهمية أو عائد استثمار عن طريق تحديد voxels باستخدام عتبات شدة البكسل. ابدأ بتحميل صور التصوير المقطعي المحوسب المعاد بناؤها في مناظر ثنائية الأبعاد ، إكليلية ، محورية وسهمية.

باستخدام الشريحة المحورية كدليل ، انتقل إلى الشريحة السهمية التي تتوافق مع الجانب الموجود في أقصى اليسار من طعم الدهون. حدد عتبة علوية وسفلية لكثافة البكسل تلتقط جميع الفوكسل المقابلة للطعم الدهني ، ولكن هذا يستثني الأنسجة والعظام المحيطة. حدد عائد الاستثمار في العرض السهمي الذي يتوافق مع طعم الدهون.

باستخدام عتبات شدة البكسل المحددة مسبقا ، كرر هذا الإجراء كل شريحة سهمية خامسة تتنقل حتى يتم الوصول إلى الجانب الأقصى الأيمن من الكسب غير المشروع. بعد ذلك ، استيفاء voxels المحددة من جميع عائد الاستثمار ثنائي الأبعاد في سجل عائد استثمار ثلاثي الأبعاد واحد مدمج حجم عائد الاستثمار المحسوب بواسطة البرنامج. اعرض السطح المتساوي ثلاثي الأبعاد لتصور الحجم النهائي لكسب الطعم الدهني.

في التحليل اللاحق ، تأكد من الحفاظ على الحد الأقصى لكثافة البكسل والحد الأدنى لقيم العتبة مثل تلك المستخدمة في تحليل خط الأساس بعد فحص الفئران للأسبوع الثامن. قتل الفئران كما هو موضح في بروتوكول النص. ضع الماوس في مجال الجراحة باستخدام مقص بضع الوتر ، وافتح الجيب بعناية ومرفقات الجلد المغطى والأنسجة الضامة من الطعم الدهني.

في هذه المرحلة ، قد يساعد استئصال رقعة من الجلد الظهري المغطى للمساعدة في استخراج الكسب غير المشروع. ابق قريبا من الكسب غير المشروع قدر الإمكان عند الاستئصال لتقليل النسيج الضام المأخوذ من الكسب غير المشروع بعد استئصال الطعوم. قم بقياس الكتلة على مقياس ممزق بدقة لا تقل عن 0.01 جرام.

انخفض حجم ترقيع الدهون تدريجيا على مدار الدراسة مما أدى إلى متوسط بقاء 62.2٪ بحلول الأسبوع الثامن. عند الانتهاء من فحص الأسبوع الثامن ، تم استخراج كل طعم دهني في قطعة واحدة. تم استخدام اختبار مجموع رتبة كوكسين WIL لمقارنة الفرق بين قياسات حجم الكسب غير المشروع للدهون التي تم الحصول عليها إما بواسطة التصوير المقطعي المحوسب أو المحسوبة من الكتلة الفيزيائية.

لم يتم العثور على فرق كبير بين هاتين الطريقتين. بمجرد إتقانها ، يمكن تنفيذ هذه التقنية في غضون ساعتين لكل جلسة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. عند محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إجراء العمليات الجراحية وإعادة البناء بنفس الطريقة في كل مرة تتبع هذا الإجراء.

يمكن إجراء طرق أخرى مثل التلوين المناعي و Q-R-T-P-C-R للإجابة على أسئلة إضافية مثل كيفية تأثر الأوعية الدموية والتعبير الجيني بطرق التطعيم المختلفة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية معالجة شفط الدهون لتطعيم الطعوم بالأشعة المقطعية المتسلسلة في الجسم الحي ، وتقييم بقاء الكسب غير المشروع وتخطيط الطعوم لأنسجة الوزن ، والتحليل المستقبلي بعد تطويره. مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الجراحة التجميلية لاستكشاف تطعيم الدهون في نموذج النسخ المتطابق.