تقييم فعالية سرطان المخدرات توعية في المختبر و في فيفو

الهدف العام من التجربة التالية هو تقييم فعالية التحسس بأدوية السرطان عن طريق قياس التغيرات في عملية التمثيل الغذائي للخلايا في المختبر والتردد النقيلي في الجسم الحي. يتم تحقيق ذلك عن طريق نقل الخلايا السرطانية أولا في المختبر مع جزيئات مضادة للمعنى لإسقاط الهدف محل الاهتمام. بعد ذلك ، يتم طلاء الخلايا المنقولة على رقائق المستشعر الحيوي وتحميلها في نظام قياس التمثيل الغذائي لتعداد التغيرات في التحمض والتنفس والالتصاق أثناء العلاج بالعقاقير.

بشكل منفصل ، يتم معالجة الخلايا المنقولة بدواء وحقنها في الدورة الدموية الوريدية لجنين الدجاج من أجل تقييم التأثيرات على التردد النقيلي. تظهر النتائج حساسية أدوية السرطان كما يتضح من التغيرات في عملية التمثيل الغذائي للخلايا والتردد النقيلي. تعمل هذه التقنية على توسيع تطوير علاج السرطان لأنها تسمح بالتقييم المتزامن للمعايير التي لا يتم أخذها في الاعتبار دائما أثناء الاختبار قبل السريري التقليدي لأهداف الأدوية أو المركبات.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لأهداف الأدوية الجديدة المشاركة في إصلاح الحمض النووي ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على التحقق من صحة الهدف في أنظمة أخرى مثل التحكم في دورة الخلية. بعد نقل الخلايا السرطانية باستخدام قليل النوكليوتيدات المضادة للمعنى ، وفقا لبروتوكول النص في بيئة معقمة ، استخدم 400 ميكرولتر من PBS لغسل ست رقائق مستشعر حيوي بعناية لتعقيم الرقائق ، قم بإزالة PBS وإضافة 400 ميكرولتر من 70٪ من الإيثانول المحتضن لمدة 20 دقيقة قبل استخدام PBS لغسل الرقائق ثلاث مرات. ضع ثلاث رقائق في أطباق ثقافة معقمة ، وتحمل علامة التحكم والهدف محل الاهتمام ، وقم بتسمية أنبوبين سعة 50 مليلتر بطريقة مماثلة.

بعد ذلك ، استخدم PBS لغسل الخلايا المنقولة قبل إضافة حجم مناسب قدره 0.25٪ تريبسين EDTA ، وانتظر حتى تنفصل الطبقة الأحادية وانقل تعليق الخلية إلى الأنبوب المناسب. بعد عد الخلايا ، اضبط مستوى الصوت للوصول إلى تركيز نهائي يبلغ 6.0 في 10 إلى الخلايا الخامسة لكل مليلتر إما عن طريق إضافة وسيط أو تركيز الخلايا. تحضير مجموعة واحدة في كل مرة ، أضف 250 ميكرولترا من محلول الخلية إلى كل شريحة مستشعر حيوي.

ضع الأطباق المعقمة التي تحتوي على الرقائق داخل غرفة الرطوبة لمنع التبخر واحتضانها طوال الليل لإجراء قياسات التمثيل الغذائي باتباع المخطط التجريبي المفصل في ملصق البروتوكول النصي 1450 مليلتر أنابيب وإضافة 50 مل من النمو ، متوسط بالإضافة إلى 0.2٪ FBS وواحد × بنسلين وستربتومايسين. أو ملاحظة. ضع ستة أنابيب في نظام قياس التمثيل الغذائي ، ورف الأنبوب ستة في آخر والأنبوب المتبقي في رف أنبوب ثالث يحتوي أيضا على أنابيب مع سيسبلاتين. استخدم غشاءا منفذا للهواء لإغلاق أول رفين لمنع التبخر.

بعد ذلك ، قم بإعداد حجم مناسب من ستة ميكرومولار سيسبلاتين في وسط مع 0.2٪ FBS و XPS واحد. استغناء عن الحجم المطلوب من الوسط إلى أربعة أنابيب 50 ملليلتر مسمى ، وضعها مرة أخرى في الفتحات الأربع لرف أنبوب قياس التمثيل الغذائي الثالث. استخدم غشاء نفاذية للهواء لإغلاق الأنابيب.

قم بتسمية ستة أنابيب سعة 50 مليلتر وأضف 20 مليلترا لكل محلول 0.1٪ Triton X في الوسط ، سيضع محلول Triton X أي خلايا متبقية ويوفر قيمة صفرية لكل شريحة. ضع الأنابيب في رف أنبوب رابع وأغلقها. ثم قم بتحميل الرقائق في الوحدات الحيوية.

قم بتحميل الاثنين من الحامل في حامل الكواكب ، ثم ابدأ التجربة. بعد تحضير أجنة الدجاج كما هو مشار إليه في بروتوكول النص في اليوم الثاني من تعداء الخلايا ، قسم مجموعات التحكم والمصالح المستهدفة إلى قارورتين للمركبة واثنتين للسيسبلاتين. استنشق الوسط واستخدم إما ثلاثة ملليلتر من الطازج أو المتوسط أو المتوسط مع ستة ميكرومولار سيسبلاتين للتجديد.

تحتضن القوارير لمدة ست ساعات. بعد الحضانة ، قم بشفط الوسط ، ثم اغسل الخلايا وقم بتحريضها ، وانقل تعليق الخلية إلى أربعة أنابيب سعة 15 ملليلتر ذات علامات مناسبة قبل الدوران واستخدام PBS لغسل ثلاث مرات إعادة تعليق الخلايا وبعد العد ، استخدم PBS للتخفيف أو الطرد المركزي لتركيز الخلايا إلى تركيز نهائي 1.0 في 10 إلى الخلايا السادسة لكل مليلتر.

انقل تعليق الخلية إلى خمسة أنابيب ملليلتر مصنفة للحقن وضعها على الجليد. بعد ذلك ، ضع جانبا 24 جنينا من الدجاج عمرها 9 أيام للحقن تحت مجهر استريو وباستخدام إبرة زجاجية متصلة بأنبوب مرن متصل بحقنة سعة ملليلتر واحد بحركة نابضة بطيئة. حقن 1.0 مرات 10 إلى الخلايا الخامسة بحجم 100 ميكرولتر في الدورة الدموية الوريدية للغشاء المدعو أو الكاميرا باستخدام مسحة ناعمة.

ربت برفق على موقع الحقن لوقف تدفق الدم وامتصاص أي انسكاب دوراني. قم بتسمية كل حاوية جنين بشكل مناسب بعد كل حقنة تحت المجهر الفلوري. تأكد من وجود وتوزيع الخلايا الفلورية في الأوعية الدموية للكامة.

لاحظ أي أجنة يظهر فيها عدد الخلايا السرطانية منخفضا أو يكون التوزيع ضعيفا. أخيرا ، ضع أجنة الدجاج في غرفة رطوبة واحتضانها لمدة سبعة إلى تسعة أيام قبل تعداد البؤر النقيلية كما هو موضح في بروتوكول النص كما هو موضح هنا بعد 24 ساعة من الإنسان ، أ 5 49 خلية سرطان الرئة التي عولجت ب BRCA اثنين تستهدف SO و cisplatin أظهرت انخفاضا مبكرا لا رجعة فيه في التنفس مقارنة بالخلايا التي تلقت التحكم في SO و cisplatin وحدها. بدأ الانخفاض بنسبة 39٪ مقارنة بالخلايا المعالجة بالتحكم قبل حوالي 10 ساعات من انخفاض يمكن اكتشافه في التصاق الخلايا ، مما يشير إلى أنه حدث بشكل مستقل عن التغيرات في عدد الخلايا وأنه قد يكون حدثا تكوينيا يسبق موت الخلية كما هو موضح هنا.

لم يلاحظ أي اختلاف في التحمض خلال التجربة التي استمرت 72 ساعة مما يشير إلى أن علاج BRCA two a و SO و cisplatin كان له تأثير ضئيل أو معدوم على استقلاب الجلوكوز. في هذه التجربة ، تم علاج 5 49 خلية سرطان الرئة البشرية بتحكم في SO أو BRCA two A SO في وجود أو عدم وجود سيسبلاتين وحقنها في الدورة الدموية الوريدية للكام. بعد تسعة أيام ، أظهرت الخلايا المعالجة ب BRCA two a SO و cisplatin ترددا أقل بنسبة 77٪ من البؤر النقيلية مقارنة بالخلايا التي عولجت بالتحكم في SO و cisplatin أو BRCA two A SSO وحدها مما يشير إلى أن علاج BRCA two و SO و cisplatin لديه القدرة على تقليل أو منع العبء النقيلي لدى المرضى الذين يعانون من أورام صلبة.

بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أكثر تقليدية مثل تكاثر الخلايا والمقايسات ودراسات الطعم الطبيعي في الجسم الحي من أجل استكشاف المزيد من مساهمة هدف معين في تعزيز حساسية الدواء.