المساريقي الليمفاوية القناة مقنى نموذج الفأر: بالتطبيق على تقييم المعوية اللمفاوي النقل المخدرات

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم معدل ومدى نقل الدهون والأدوية إلى الجهاز اللمفاوي المعوي بعد الولادة المعوية. يتم تحقيق ذلك عن طريق عزل القناة الليمفاوية المساريقية أولا وتعبئتها لجمع الليمفاوية. في الخطوة الثانية ، يتم قنية الاثني عشر لتمكين التسريب في الأمعاء ، ثم يتم قنية الشريان السباتي لتمكين جمع عينات الدم.

في الخطوة الأخيرة ، يتم تسليم العلاج التجريبي إلى الاثني عشر ويتم جمع الليمفاوية والدم لقياس مستويات الدهون أو الدواء الجهازية. في النهاية ، يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم الامتصاص الكلي والنقل اللمفاوي المعوي للدهون والأدوية بعد الولادة المعوية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بقنية القناة الليمفاوية المساريقية مباشرة وجمع الليمفاوية عبر الفترة التجريبية بأكملها.

هذا يسمح بتقدير المادة الضخمة المطلقة التي تتدفق إلى الليمفاوية المساريقية وعبرها. في الجسم الحي ، على الرغم من أن هذا النموذج يتيح التقييم في الجسم الحي لنقل الأدوية والدهون. يمكن استخدامه أيضا لقياس النقل اللمفاوي المعوي لأي عامل ذي أهمية ، وكذلك التغيير في النقل اللمفاوي لهذه العوامل استجابة للتحديات المختلفة أو الحالات المرضية.

العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية لأن قنية القناة الليمفاوية المساريقية معقدة وصعبة بسبب حقيقة أن القناة صغيرة وهشة وفي الصائمة. الشفافية سيكون إثبات الإجراء زميلي وزميلي عضو هيئة التدريس هنا في جامعة موناش ، الدكتورة ناتالي كوس ، وباحث ما بعد الدكتوراه الأول في المجموعة ، الدكتور LJ Hugh ، في اليوم السابق للجراحة ، قم بقص القنيات إلى الأطوال المناسبة واستخدم شفرة جراحية معقمة لعمل شطبة عند طرف كل قطعة من الأنبوب. بعد ذلك ، لتحضير القنية داخل الاثني عشر ، قم بلف القنية مرة أخرى على نفسها ثم قم بتسخين القنية لإنشاء نقطة ربط في الأنبوب.

في يوم الجراحة ، احلق الفراء من الجانب الأيمن من البطن والرقبة ومناطق الترقوة اليسرى لفأر بالغ مخدر ، ثم نظف المناطق الجراحية بشكل معقم باستخدام ثلاثة محلول متتالي من بوفيدون يود و 70٪ مقشر إيثانول لقية القناة الليمفاوية. ضع بحيث يكون جانبه الأيمن متجها لأعلى واستخدم شفرة مشرط معقمة لفتح الطبقة العليا من جدار عضلة البطن بشق مستقيم يبلغ طوله أربعة سنتيمترات يمتد من عملية الخنجري إلى الجانب الأيمن على بعد سنتيمترين تقريبا تحت الهامش الساحلي. اسحب الأمعاء الدقيقة تحت جدار البطن الأيسر واستخدم قطعتين إلى ثلاث قطع من الشاش المعقم المشبع بمحلول ملحي عادي لإبقائها في مكانها.

ثم قم بجسر الجرذ فوق حقنة بلاستيكية سعة 10 ملليلتر موضوعة أفقيا تحت ظهر على مستوى الكلية اليمنى. للمساعدة في تصور القناة الليمفاوية المساريقية ، حدد موقع القناة الليمفاوية المساريقية العلوية ، التي يبلغ قطرها حوالي 0.5 إلى ملليمتر واحد ، عموديا على الكلية اليمنى ، وعلى الفور منقارية وموازية للشريان المساريقي النابض الأحمر الداكن. لاحظ أنه في الفئران غير الصائمة كما هو موضح هنا ، تكون القناة الليمفاوية المساريقية العلوية بيضاء وغير شفافة وأسهل في التصور من الفئران المصابة.

بعد ذلك ، مرر زوجا من الملقط المستقيم عبر فراش الدهون العجانية في الهامش السفلي للكلية اليمنى الموازية للقناة الليمفاوية المساريقية العلوية ومن خلال طبقات النسيج الضام أسفل الوريد الأجوف مباشرة. ثم باستخدام طرف الملقط ، اسحب القنية الليمفاوية من خلال سرير الدهون perren مع أحد طرفيه المجاور مباشرة للقناة الليمفاوية المساريقية والآخر خارج على مستوى الكلية اليمنى. ثم باستخدام المجهر الجراحي والملقط المجوهري ، قم بعزلها في القناة الليمفاوية المساريقية من خلال الطبقات المغطاة من الأنسجة الضامة والدهنية عن طريق التشريح الحاد بدءا من الطرف السفلي مع الحرص على عدم إتلاف القناة الليمفاوية عند عزل القناة.

استخدم طرف الملقط الناعم لعمل ثقب صغير في القناة الليمفاوية. بعد التأكد من أن القنية الليمفاوية مملوءة بالكامل بمحلول مضاد للتخثر وعدم وجود فجوات هوائية ، استخدم زوجا صغيرا من الملقط لإدخال القنية الليمفاوية حوالي ملليمترين إلى أربعة ملليمترات داخل القناة الليمفاوية المساريقية عبر البزل. إذا نجحت القنية ، ملاحظة تدفق تدريجي للليمفاوية المعوية من نهاية التجميع الحرة للقنية.

عندما يحدث هذا ، ضع قطرة صغيرة من غراء سيانواكريليت فوق فتحة المدخل في القناة الليمفاوية لتأمين القنية ، مع الحرص على عدم انسداد الوعاء بالغراء الزائد لقنية الاثني عشر. أولا ، حدد موقع الأنسجة حيث يكشف الجزء الوردي الفاتح من الأمعاء الدقيقة مع سحب لطيف لأسفل عن المعدة. ثم استخدم إبرة معقمة عيار 23 لإحداث ثقب صغير في الاثني عشر عند البواب، على بعد سنتيمترين تقريبا من تقاطع المعدة والاثني عشر.

بعد ذلك ، أدخل طرف الخطاف على شكل js من قنية الاثني عشر من خلال الثقب وقم بتأمين القنية في مكانها بقطرة من غراء سانو أكريليت. ثم استخدم الغرز لإغلاق شق جدار عضلة البطن ويمكن إجراء قنية الشريان السباتي قبل أو بعد قنية القناة الليمفاوية المساريقية. نفضل عادة قنية الشريان السباتي قبل قنية القناة الليمفاوية ، وذلك لتقليل احتمالية إزاحة القنية الليمفاوية عند تحريك لتقنبية الشريان السباتي ، أولا ، ضع علامة على قنية الشريان السباتي على بعد 2.5 سم من الطرف المائل لتحديد جزء الأنبوب الذي سيتم إدخاله في الشريان.

ثم قم بتوصيل الطرف غير المشطوف للقنية بإبرة قياس 25 متصلة بحقنة مملوءة بمحلول مضاد للتخثر واملأ القنية بالمحلول ، مع التأكد من عدم وجود فجوات هوائية. بعد ذلك ، قم بعمل شق طولي من واحد إلى 1.5 سم من خلال طبقة الجلد فوق يسار القصبة الهوائية في المستوى السهمي ، ثم استخدم ملقطا غير حاد لتشريح النسيج الضام تحت الجلد وفضح عضلات الرقبة المزدوجة الأساسية. اسحب عضلات الرقبة للكشف عن الشريان السباتي الأيسر النابض الموجود على بعد سنتيمتر واحد تقريبا تحت سطح الجلد.

ثم نظف النسيج الضام المغطى من الشريان عن طريق التشريح الحاد واستخدم ملقط الأنسجة الحادة لعزل جزء تقريبي من سنتيمترا واحدا من الشريان. بعد ذلك ، استخدم ملقطا رفيعا لخيوط خيوط حريرية أسفل الشريان السباتي ، ووضعها في كل طرف من قسم الشريان المعزول. ثم اربط الخيط الأبعد عن قلب الجرذ والترقوة ، وضع زوجا من الملقط المستقيم ذو الأطراف الدقيقة تحت الشريان السباتي لمنع تدفق الدم عبر الشريان.

الآن باستخدام مقص القزحية ذات الطرف الناعم ، قم بعمل شق صغير على السطح العلوي للشريان حوالي ثلث الطريق لأسفل من أعلى المنطقة المعزولة. أدخل طرف القنية في الشريان باستخدام ملقط طرف منحني. بمجرد إدخالها ، قم بإزالة ملقط الطرف الناعم المستقيم ، مما يؤدي إلى انسداد تدفق الدم ودفع القنية 2.5 سم إلى الشريان باستخدام زوجين من الملقط.

أحدهما لتثبيت القنية داخل الشريان لمنع تسرب الدم للخلف والآخر لإدخال القنية. ثم استخدم مشبك شريان صغير لتثبيت القنية داخل الشريان. حقن محلول مضاد للتخثر في القنية ، متبوعا بسحب كمية صغيرة من الدم لتأكيد سالكية الأنبوب.

ثم اغسل القنية بمحلول مضاد للتخثر وأغلق النهاية باستخدام لهب ولاعة. أخيرا ، استخدم الغرز لربط القنية في مكانها وإزالة مشبك الشريان. ثم قم بتأمين خياطة ثالثة حول الشريان والقنية ، وتقصير طول الغرز حول الشريان وأغلق جرح الرقبة بمزيد من الغرز بعد فترة التعافي ، وغرس تركيبة ذات أهمية في عبر قنية الاثني عشر.

كما هو موضح في الرسم البياني بعد إعطاء النموذج ، المخدرات الحلال المحبة للدهون ، كان متوسط معدل التدفق الليمفاوي للفئران المقلية بنجاح بين 0.4 إلى 1.3 مل في الساعة. في بعض ، كان معدل التدفق الليمفاوي أقل قليلا خلال أول ساعة إلى ثلاث ساعات بعد القنية قبل زيادة ظاهرة شائعة الملاحظة بعد القنية الليمفاوية الناجحة في الفئران المقلية دون جدوى. ومع ذلك ، يظل معدل التدفق أقل بكثير من ذلك الذي شوهد في التجارب الناجحة طوال فترة التجميع.

وبالمثل ، في هذه التجارب التمثيلية ، كان النقل اللمفاوي التراكمي للدهون الثلاثية وRIN الحلال أقل بكثير في التي تم تقسيمها دون جدوى. بينما في المجموعات التي تم تقويتها بنجاح ، كان متوسط النقل التراكمي للحلالان 15.1٪ من الجرعة وكان النقل التراكمي للدهون الثلاثية 61 ملليغرام على مدى 10 ساعات. في تجربة نقل الدهون التمثيلية هذه ، كانت نسبة جرعة الدهون الخارجية المنقولة في الليمفاوية 54٪ لم تكن هذه القيم مختلفة بشكل كبير عن تلك التي لوحظت سابقا.

لصيغة مماثلة ، فإن معدل نقل كل من الدهون الثلاثية والأدوية إلى القمم الليمفاوية ، وعدد قليل يتبع إعطاء الدهون والأدوية ، ثم يعود إلى مستويات خط الأساس. كما هو الحال في تجارب نقل الدهون اللمفاوية والأدوية النموذجية والأمعاء. يعكس معدل نقل الدواء في الليمفاوية خلال كل فترة زمنية هذا المشهد لنقل الدهون الثلاثية أثناء نقل الدواء إلى الليمفاوية.

بالاشتراك مع البروتينات الدهنية الغنية بالدهون الثلاثية بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال القنية في غضون 30 دقيقة إذا لم تتم مواجهة أي صعوبات. بعد هذا الإجراء ، يمكن عزل المكونات الموجودة داخل الليمفاوية المجمعة واستخدامها في تجارب إضافية مثل إعادة التسريب للحيوانات المتلقية لتقييم وظيفتها أو التمثيل الغذائي أو التخليص أو أنماط التخلص منها بشكل مباشر. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لتقنيات عزل وقنية القناة الليمفاوية المساريقية والشريان السباتي والاثني عشر.

باستخدام هذه التقنيات ، يجب أن تكون قادرا على تقييم نقل كل من الأدوية والدهون وعوامل أخرى من الأمعاء عبر وإلى الليمفاوية المساريقية في الجسم الحي.