المساريقي الليمفاوية القناة مقنى نموذج الفأر: بالتطبيق على تقييم المعوية اللمفاوي النقل المخدرات

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقييم معدل ومدى انتقال الدهون والأدوية إلى الجهاز اللمفاوي المعوي بعد إيصالها معوياً. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق عزل القناة اللمفاوية المساريقية وقسطرتها لجمع اللمف. وفي الخطوة الثانية، يتم قسطرة الاثني عشر لتمكين التسريب إلى الأمعاء، ثم قسطرة الشريان السباتي لتمكين جمع عينات الدم.

في الخطوة النهائية، يتم إعطاء المعالجة التجريبية في الاثني عشر، ثم يتم جمع اللمف والدم لقياس مستويات الدهون أو الدواء الجهازية. وفي نهاية المطاف، يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم الامتصاص الكلي والنقل اللمفاوي المعوي للدهون والأدوية بعد الإعطاء المعوي. وتتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية في أنها تسمح بقسطرة القناة اللمفاوية المساريقية مباشرة وجمع اللمف طوال الفترة التجريبية.

يتيح ذلك تقدير الكتلة الإجمالية للمواد التي تتدفق إلى اللمف المساريقي ومن خلاله. وعلى الرغم من أن هذا النموذج يُمكّن من التقييم الحي (in vivo) لنقل الأدوية والدهون، إلا أنه يمكن استخدامه أيضاً لقياس النقل اللمفاوي المعوي لأي عامل ذي أهمية، بالإضافة إلى قياس التغير في النقل اللمفاوي لهذه العوامل استجابةً للتحديات المختلفة أو الحالات المرضية.

يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمراً بالغ الأهمية نظراً لأن كانيولية القناة اللمفاوية المساريقية عملية معقدة وصعبة بسبب صغر حجم القناة وهشاشتها في الحيوانات الصائمة. ستقوم زميلتي وعضو هيئة التدريس هنا في جامعة موناش، الدكتورة Natalie cus، وباحث ما بعد الدكتوراه الأقدم في المجموعة، الدكتورة LJ Hugh، باستعراض هذا الإجراء. في اليوم السابق للجراحة، يتم قص الكانيولات إلى الأطوال المناسبة واستخدام شفرة جراحية معقمة لعمل شطب عند طرف كل قطعة من الأنابيب. بعد ذلك، ولتحضير الكانيولا داخل الاثني عشر، يتم ثني الكانيولا على شكل حلقة فوق نفسها ثم تسخين الكانيولا لإنشاء نقطة تثبيت في الأنبوب.

في يوم الجراحة، يتم حلاقة الفراء من الجانب الأيمن من البطن والرقبة ومنطقة الترقوة اليسرى لجرذ بالغ تحت التخدير، ثم تُنظف المناطق الجراحية تعقيمياً بثلاث عمليات فرك متتالية بمحلول البوفيدون يود والإيثانول 70% لتركيب قثطرة في القناة اللمفاوية. يُوضع الحيوان بحيث يكون جانبه الأيمن للأعلى، وتُستخدم شفرة مشرط معقمة لفتح الطبقة العليا من جدار العضلة البطنية عبر شق مستقيم بطول 4 cm يمتد من الناتئ الخنجري إلى الخاصرة اليمنى على بعد 2 cm تقريباً تحت الحافة الضلعية. تُسحب الأمعاء الدقيقة تحت جدار البطن الأيسر، وتُستخدم قطعتان إلى ثلاث قطع من الشاش المعقم المشبع بالمحلول الملحي الطبيعي لتثبيتها في مكانها.

بعد ذلك، قم بتجسير الجرذ فوق محقنة بلاستيكية سعة 10 milliliter توضع أفقيًا تحت ظهر الحيوان عند مستوى الكلية اليمنى. وللمساعدة في رؤية القناة اللمفاوية المساريقية، حدد موقع القناة اللمفاوية المساريقية العلوية، التي يبلغ قطرها حوالي 0.5 إلى 1 millimeter، وتكون عمودية على الكلية اليمنى، ومباشرة في الجهة المنقارية وموازية للشريان المساريقي النابض ذو اللون الأحمر الداكن. لاحظ أنه في الجرذان غير الصائمة كما هو موضح هنا، تكون القناة اللمفاوية المساريقية العلوية بيضاء ومعتمة ويسهل رؤيتها مقارنة بالجرذان المصابة.

بعد ذلك، مرر زوجاً من الملاقط المستقيمة عبر طبقة الدهون العجانية عند الحافة السفلية للكلية اليمنى، وبشكل موازٍ للقناة اللمفاوية المساريقية العلوية، وعبر طبقات النسيج الضام الموجودة أسفل الوريد الأجوف مباشرة. ثم باستخدام طرف الملاقط، اسحب كانيولا اللمف عبر طبقة الدهون العجانية بحيث تكون إحدى نهايتيها مجاورة للقناة اللمفاوية المساريقية مباشرة، والنهاية الأخرى خارج جسم الحيوان عند مستوى الكلية اليمنى. بعد ذلك، وباستخدام مجهر جراحي وملاقط دقيقة، قم بعزل القناة اللمفاوية المساريقية من خلال طبقات النسيج الضام والدهني التي تغطيها عن طريق التشريح الكليل، بدءاً من الطرف السفلي مع توخي الحذر لعدم إتلاف القناة اللمفاوية بمجرد عزل القناة.

استخدم طرف ملقط دقيق لعمل ثقب صغير في القناة اللمفاوية. بعد التأكد من أن القنية اللمفاوية ممتلئة تماماً بمحلول مضاد للتخثر وخالية من الفجوات الهوائية، استخدم ملقطاً صغيراً لإدخال القنية اللمفاوية لمسافة تتراوح بين 2 إلى 4 ملم تقريباً داخل القناة اللمفاوية المساريقية عبر الثقب. إذا نجحت عملية القنطرة، سيُلاحظ تدفق تدريجي للمنضحة اللمفاوية المعوية من الطرف الجامع الحر للقنية.

عند حدوث ذلك، ضع قطرة صغيرة من غراء السيانوأكريليت فوق فتحة الدخول إلى القناة اللمفاوية لتثبيت القنية، مع الحرص على عدم سد الوعاء بكمية زائدة من الغراء. لقنوة الاثني عشر، حدد أولاً النسيج باعتباره الجزء الوردي الفاتح من الأمعاء الدقيقة، حيث يكشف السحب اللطيف نحو الأسفل عن المعدة. بعد ذلك، استخدم إبرة معقمة بقياس 23 gauge لإحداث ثقب صغير في الاثني عشر عند البواب، على بعد سنتيمترين تقريبًا أسفل نقطة التقاء المعدة والاثني عشر.

بعد ذلك، أدخل الطرف المعقوف على شكل حرف js لقثطرة الاثني عشر من خلال الثقب وثبت القثطرة في مكانها باستخدام قطرة من غراء Sano acrylate. ثم استخدم الغرز لإغلاق شق جدار العضلة البطنية. ويمكن إجراء قثطرة الشريان السباتي قبل أو بعد قثطرة القناة اللمفاوية المساريقية. ونحن نفضل عادةً قثطرة الشريان السباتي قبل قثطرة القناة اللمفاوية، وذلك لتقليل احتمالية إزاحة القثطرة اللمفاوية عند تحريك الحيوان. ولقثطرة الشريان السباتي، قم أولاً بتحديد علامة على قثطرة الشريان السباتي على بُعد 2.5 centimeters من الطرف المائل لتحديد جزء الأنبوب الذي سيتم إدخاله في الشريان.

بعد ذلك، قم بتوصيل الطرف غير المشطوف من الكانيولا بإبرة مقاس 25 متصلة بمحقنة مملوءة بمحلول مضاد للتخثر، ثم املأ الكانيولا بالمحلول مع التأكد من عدم وجود أي فقاعات هوائية. بعد ذلك، قم بإجراء شق طولي بطول 1 إلى 1.5 سنتيمتر عبر طبقة الجلد فوق الجانب الأيسر من الرغامي في المستوى السهمي، ثم استخدم ملاقط ذات طرف غير مدبب لتشريح النسيج الضام تحت الجلد وكشف عضلات الرقبة المزدوجة الكامنة. قم بإزاحة عضلات الرقبة للكشف عن الشريان السباتي الأيسر النابض الموجود على عمق سنتيمتر واحد تقريباً تحت سطح الجلد.

بعد ذلك، قم بتنظيف النسيج الضام الذي يغطي الشريان عن طريق التشريح غير الحاد، واستخدم ملاقط أنسجة غير حادة لعزل جزء من الشريان بطول سنتيمتر واحد تقريبًا. بعد ذلك، استخدم ملاقط دقيقة الطرف لتمرير غرزتين من الحرير أسفل الشريان السباتي، مع وضعهما عند كل طرف من طرفي جزء الشريان المعزول. ثم قم بربط الغرزة الأبعد عن قلب الجرذ والترقوة، وضع زوجًا من الملاقط المستقيمة دقيقة الطرف أسفل الشريان السباتي لسد تدفق الدم عبر الشريان.

الآن، وباستخدام مقص قزحية دقيق الرأس، قم بعمل شق صغير على السطح العلوي للشريان على مسافة تعادل تقريباً ثلث المسافة من أعلى المنطقة المعزولة. أدخل طرف القُنَيّة في الشريان باستخدام ملقط ذي رأس منحني. وبمجرد إدخالها، قم بإزالة الملقط المستقيم دقيق الرأس، مما يؤدي إلى سد تدفق الدم، ثم قم بدفع القُنَيّة مسافة 2.5 centimeters داخل الشريان باستخدام زوجين من الملاقط.

يُمسك شخص بالقنية داخل الشريان لمنع تسرب الدم للخلف، بينما يقوم الشخص الآخر بإدخال القنية. بعد ذلك، يُستخدم مشبك شرياني صغير لتثبيت القنية داخل الشريان. يتم حقن محلول مضاد للتخثر في القنية، يليه سحب كمية صغيرة من الدم للتأكد من نفاذية الأنابيب.

بعد ذلك، قم بغسل القنية بمحلول مضاد للتخثر وأغلق طرفها باستخدام لهب ولاعة. وأخيراً، استخدم الغرز لتثبيت القنية في مكانها ثم أزل ملقط الشريان. بعد ذلك، قم بتثبيت غرزة ثالثة حول الشريان والقنية، وقم بتقصير طول الغرز حول الشريان، ثم أغلق جرح الرقبة بمزيد من الغرز بعد فترة التعافي، ثم احقن التركيبة المراد دراستها في الحيوان عبر قنية الاثني عشر.

كما هو موضح في الرسم البياني، بعد إعطاء الدواء المحب للدهون halal fanene، تراوح متوسط معدل تدفق اللمف للفئران التي تمت عملية تقنويتها بنجاح بين 0.4 إلى 1.3 milliliters per hour. في بعض الحيوانات، كان معدل تدفق اللمف أقل قليلاً خلال الساعات الثلاث الأولى التي تلت عملية التقنوية قبل أن يزداد، وهي ظاهرة ملحوظة عادةً بعد نجاح تقنوية اللمف، أما في الفئران التي لم تنجح عملية تقنويتها، فإن معدل التدفق يظل أقل بكثير مما لوحظ في التجارب الناجحة طوال فترة الجمع.

وبالمثل، في هذه التجارب التمثيلية، كان النقل اللمفاوي التراكمي للدهون الثلاثية وRIN الحلال أقل بكثير في الحيوانات التي فشلت فيها عملية القسطرة. بينما في المجموعات التي نجحت فيها القسطرة، بلغ متوسط النقل التراكمي للحلال 15.1% من الجرعة، وكان النقل التراكمي للدهون الثلاثية 61 milligrams على مدار 10 hours. وفي تجربة نقل الدهون التمثيلية هذه، بلغت نسبة جرعة الدهون الخارجية المشعة التي تم نقلها في اللمف 54% ولم تكن هذه القيم مختلفة بشكل معنوي عن تلك التي لوحظت سابقاً.

بالنسبة لتركيبة مماثلة، يصل معدل انتقال كل من الثلاثي غليسريد والأدوية إلى اللمف إلى ذروته بعد فترة وجيزة من إعطاء الدهون والدواء، ثم يعود إلى مستوياته الأساسية. وكما هو معتاد في تجارب انتقال الدهون والأدوية عبر اللمف المعوي، فإن معدل انتقال الدواء في اللمف خلال كل فترة زمنية يعكس المشهد الخاص بانتقال الثلاثي غليسريد، حيث يتم نقل الدواء إلى اللمف.

بالارتباط مع البروتينات الدهنية الغنية بالدهون الثلاثية، وبمجرد إتقان هذه العملية، يمكن إتمام عملية القسطرة في غضون 30 دقيقة في حال عدم مواجهة أي صعوبات. وعقب هذا الإجراء، يمكن عزل المكونات الموجودة في اللمف الذي تم جمعه واستخدامها في تجارب إضافية، مثل إعادة حقنها في الحيوانات المستقبلة لتقييم وظيفتها، أو استقلابها، أو تصفيتها، أو أنماط توزيعها بشكل مباشر. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد للتقنيات المستخدمة لعزل وقسطرة القناة اللمفاوية المساريقية، والشريان السباتي، والاثني عشر.

باستخدام هذه التقنيات، يجب أن تكون قادرًا على تقييم نقل كل من الأدوية والدهون والعوامل الأخرى من الأمعاء عبر ومن ثم إلى اللمف المساريقي في Viva.