احتياطات السلامة وإجراءات التشغيل في (A) مختبر BSL-4: 2. الممارسات العامة

الهدف العام من هذا الإجراء هو إظهار الممارسات الآمنة عند العمل في مختبر بدلة السلامة البيولوجية من المستوى 4 باستخدام مقايسة البلاك كمثال. يوضح هذا الإجراء التعديلات اللازمة لإجراء اختبار البلاك القياسي في بيئة السلامة البيولوجية من المستوى 4. أشرح الإجراء معي مع تريسي بورديت ، فني من مرفق البحوث المتكاملة.

عند الانتهاء من قائمة التحقق اليومية للأنظمة الداخلية ، قم بتنظيف خزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانية عن طريق رش الجزء الداخلي ، بما في ذلك الوشاح ، بمحلول مطهر الأمونيوم الرباعي المزدوج بنسبة 5٪. بعد ذلك ، امسح الخزانة بالمناشف الورقية ، وتأكد من ترك زجاجة الرش التي تحتوي على محلول مطهر داخل الخزانة لرش الأيدي التي ترتدي القفازات أثناء وبعد الانتهاء من الفحص. رش محلول الإيثانول بنسبة 70٪ داخل الخزانة والوشاح لإزالة محلول المطهر اللزج.

قم بإعداد حاوية نفايات لخزانة السلامة الحيوية. تأكد من أن التركيز النهائي لمحلول مطهر الأمونيوم الرباعي المزدوج في حاوية النفايات لا يقل عن 5٪ مع مراعاة أي سائل إضافي يتم إضافته. ضع حاوية النفايات التي تحتوي على محلول مطهر للأمونيوم الرباعي المزدوج بنسبة 5٪ داخل خزانة السلامة الحيوية من الفئة الثانية.

قم بأداء جميع الأعمال بالقرب من المركز الداخلي لخزانة السلامة الحيوية من الفئة الثانية قدر الإمكان. تم تصميم المركز الداخلي ليكون الموقف الأكثر عاطفية لحماية النفس. قم بإزالة 50 ميكرولترا من عينة الفيروس والسيطرة على الفيروس وضعها في 450 ميكرولترا من وسط النسر المعدل من Dulbecco مع مصل بقري الجنين بنسبة 2٪ في آبار التخفيف.

تابع إجراء التخفيفات التسلسلية بقدر الحاجة. امزج عينات الفيروس خمس مرات على الأقل باستخدام أطراف ماصة لتغيير طرف الماصة بعد كل تخفيف. امزج ببطء لتقليل توليد فقاعة الهواء في العينات.

عند الانتهاء ، ضع آبار التخفيف جانبا. عند التخلص من الأطراف ، اشطف كل طرف بمحلول مطهر من دلو النفايات لتطهير الجزء الداخلي والخارج من الطرف قبل طرد الطرف في دلو النفايات. قم بإزالة معظم الوسائط من آبار ستة ألواح لزراعة خلايا الآبار.

أضف 100 ميكرولتر من العينة الصحيحة إلى البئر المناسب للألواح المسماة مسبقا في نسختين. عند الانتهاء ، قم برش اليدين القفازات بمحلول مطهر. استخدم منشفة ورقية مبللة بمحلول مطهر لمسح الجزء الخارجي من جميع الأطباق قبل وضع الأطباق في الحاضنة يدويا.

هز الصفائح بحركة الشكل 8 لضمان التشتت المناسب للعينة فوق الخلايا كل 15 دقيقة لمدة ساعة واحدة. أضف ملليلترين من خليط التراكب إلى كل بئر وصخور مرة أخرى بحركة الشكل 8 للتوزيع المتساوي للتراكب في جميع أنحاء سطح البئر. اغمر جميع النفايات تماما في محلول مطهر بنسبة 5٪ في دلو النفايات لمدة تلامس لا تقل عن 10 دقائق.

رش الجزء الداخلي والخارجي من دلو النفايات داخل خزانة السلامة الحيوية من الفئة الثانية ، والسطح الخارجي للمعدات ، والأيدي التي ترتدي القفازات بمحلول مطهر بنسبة 5٪. دع المحلول يبقى في دلو النفايات وعلى الأسطح الأخرى لمدة 10 دقائق. ثم قم بإزالة العناصر من خزانة السلامة الحيوية واصطحبها إلى الحوض.

ضع الماصة المستخدمة في صينية ماصة للتعقيم. ضعف محتويات دلو النفايات في مصفاة في الحوض. ثم أحضر حاوية نفايات بيولوجية مبطنة بكيس أحمر إلى الحوض ، وقم بتفريغ محتويات المصفاة في كيس المخاطر البيولوجية الأحمر.

ضع كيس الخطر البيولوجي على صينية الأوتوكلاف على عربة. أغلق أكياس الأوتوكلاف بشكل غير محكم بشريط يسمح للبخار بدخول الكيس. وقم بتسمية أحد أشرطة الأوتوكلاف بالأحرف الأولى من اسمه والتاريخ.

قم بإزالة القضيب المعدني المثقوب من الأوتوكلاف وافتح الجزء العلوي. ضع قارورة مؤشر بيولوجية تحتوي على جراثيم Geobacillus stearothermophilus في القضيب المعدني لتكون بمثابة فحص لإكمال دورة التعقيم بالأوتوكلاف بنجاح. ضع صينية الأوتوكلاف المملوءة بالنفايات في الأوتوكلاف.

ابدأ الأوتوكلاف وتحقق من بدء الدورة. ستشير شاشة تشغيل الأوتوكلاف إلى الوقت المتبقي لهذا التشغيل. بعد اكتمال فترة الحضانة المطلوبة ، قم بإزالة ألواح فحص البلاك بعناية من الحاضنة وضعها في خزانة السلامة الحيوية النظيفة من الفئة الثانية يدويا.

قم بشفط المواد المتوسطة وتراكبها بماصة وقم بتوزيعها في حاوية محلول المطهر. استبدل الوسط بمزيج من الفورمالين المحايد 10٪ والبنفسجي الكريستالي 0.8٪ لتعطيل الفيروس لمدة 30 دقيقة. بعد التعطيل ، قم بإزالة خليط الفورمالين / البنفسج البلوري المحايد بعناية وضعه في حاوية نفايات منفصلة لتحييدها قبل التخلص منها.

في الحوض ، اشطف الأطباق لإزالة البقع الزائدة ثم ضع الأطباق في صينية حتى تجف تماما. استخدم صندوقا ضوئيا لعد اللوحات. سجل جميع الأعداد ، واحسب عيار الفيروسات من المعادلة القياسية.

لإزالة العينات المعطلة من مختبر BSL-4 ، ضع الأنابيب أو الألواح في كيس مانع للتسرب الحراري. رش الكيس من الداخل بمحلول مطهر أو مثبت بنسبة 5٪ لتطهير داخل الكيس والجزء الخارجي من أنابيب العينة. ثم قم بإغلاق الكيس بالحرارة.

ضع هذه الحقيبة في كيس آخر باتباع نفس الإجراء. أغلق الحقيبة الثانية بالحرارة وضع الأكياس ذات الإغلاق المزدوج في خزان غمس يحتوي على محلول مطهر بنسبة 5٪ لمدة 10 دقائق على الأقل ، لتطهير الجزء الخارجي من الأكياس. املأ دفتر سجل خزان الغمر داخل المختبر عن طريق تحديد عدد وحجم الأنابيب ، والحجم في الأنابيب ، واستخدم العامل طريقة التعطيل المستخدمة ، والغرفة التي سيتم نقل العينات إليها.

يعد اتباع الإجراءات المناسبة داخل مختبر السلامة البيولوجية من المستوى 4 أمرا بالغ الأهمية لضمان الانتهاء الآمن والفعال من المقايسات. من خلال الرجوع إلى قائمة المراجعة الداخلية اليومية المكتملة ، يضمن موظفو المختبر أن المعدات تعمل بكامل طاقتها. يتم تخفيف عينة الفيروس بشكل متسلسل للحصول على صفائح تحتوي على 30 إلى 300 لوحة لكل بئر ولتحديد عيار الفيروس.

يؤثر عدد من العوامل على تكوين اللويحات بما في ذلك استحاء الفيروس لتقنية تلقيح خطوط الخلايا المضيفة ، وشروط نمو الفيروس ، ونطاق التخفيف المناسب ، واختيار التراكب. يتم تطهير النفايات المتولدة في خزانة السلامة الحيوية أثناء الإجراء مرتين. يتم تطهير النفايات بشكل صحيح مرة واحدة قبل إزالتها من خزانة السلامة الحيوية.

بعد ذلك ، يتم تعقيم النفايات قبل مغادرة بيئة السلامة البيولوجية من المستوى 4 للحيوان. باتباع هذه الإجراءات ، لم يتم تسجيل أي عدوى مكتسبة من المختبر أثناء أبحاث السلامة البيولوجية من المستوى 4 في مرفق البحوث المتكاملة في فريدريك. يمكن إجراء هذه التقنية في غضون ثلاث إلى أربع ساعات اعتمادا على عدد العينات إذا تم تنفيذ التقنية بشكل صحيح.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، تذكر إجراء التخفيفات بشكل صحيح ، عد اللويحات وفقا لذلك ، والامتثال لجميع احتياطات السلامة ، لضمان تجربة آمنة وناجحة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد للقيود المادية التي تفرضها بدلات الضغط الإيجابي ، والوقت الإضافي المطلوب لإكمال اختبار اللوحة القياسية.