باستخدام التصوير المقطعي الصغيرة لتقييم التنمية الورم ومتابعة الاستجابة للعلاج في نموذج الفأر من سرطان الرئة

الهدف العام من هذا الفيديو هو تحديد مزايا استخدام التصوير المقطعي المحوسب الصغير ، لتقييم تطور الورم ، والاستجابة للعلاج ، والتجارب الأخرى في نماذج الفئران لسرطان الرئة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال سرطان الرئة عند استخدام نموذج الفئران ، مثل متى تبدأ الأورام في النمو ، ومعدل النمو ، والاستجابة للتدخلات العلاجية. تمكننا هذه التقنية من تحديد التي يجب استبعادها من دراستنا ، مع اكتشاف التغيرات في الوقت الفعلي في حجم الورم.

توفر هذه التقنية الوقت والجهد ، وتقلل بشكل ملحوظ من عدد الفئران لكل مجموعة دراسة. من الماسح الضوئي Micro-CT ، قم بالوصول إلى عنصر التحكم في الكمبيوتر ، وافتح حزمة البرامج المسماة RMCT2 "ثم ابدأ دورة الإحماء. بعد ذلك ، قم بإعداد سرير عينة الماسح الضوئي ، للماوس ، عن طريق لفه بالبلاستيك.

بعد ذلك ، قم بتخدير الفأر باستخدام الأيزوفلوران وتأكد من أنه مخدر باستخدام قرصة الجلد. يكفي قرصة لطيفة من طية صغيرة من الجلد. بعد ذلك ، ضع مرهما للعيون لمنع جفاف القرنية.

الآن ضع الماوس ، الجانب الظهري لأعلى ، على سرير العينة. امسك رأس الفأر واسحب الجسم لأسفل من الأطراف السفلية لتمديد الجسم وتقويمه بشكل متماثل. بعد ذلك ، قم بتوجيه غاز التخدير إلى الغرفة ، ووضع أنبوب الغاز بجوار أنف ، لإعطاء التخدير المستمر.

ثم لف الماوس والعينة السرير بالبلاستيك ، للحفاظ على الماوس في مكانه. تأكد من أن الماوس آمن لأن أي حركة أو التواء أثناء الفحص سيؤدي إلى صور ضبابية وغير قابلة للاستخدام. الآن ، أغلق الغرفة ، واضبط النظام على 90 كيلو فولت ، و 160 ميكرو أمبير ، واضبط وقت المسح على 4.5 دقيقة.

اضبط نطاق الصورة على 24 ملم. ثم اضبط النظام في الوضع المتزامن لنبضات القلب. الآن ، قم بإنشاء مجلد جديد في قاعدة البيانات للصور الجديدة وابدأ الفحص.

بعد الانتهاء من الفحص ، حرك الماوس إلى قفص فارغ وراقبه حتى يستعيد وعيه. لا تعيدها إلى زملائها في السكن حتى يتم تعافيها تماما من التخدير. افتح ملفات صور التصوير المقطعي المحوسب التسلسلي في الصورة J.قم بالتمرير عبر جميع صور كل ماوس من الرقبة إلى البطن أو العكس.

الآن ، باستخدام عمليات مسح الفئران البرية الساذجة ، حدد كثافة المناطق المختلفة والهياكل التشريحية الطبيعية في الصدر. قم بالتمرير لأعلى إلى أحشاء البطن والحجاب الحاجز المائل للبياض ، وحدد المنطقة من خلال الصدر وحتى الرقبة. لاحظ معالم قفص الصدر العظمي ، القص والفقرات والأضلاع.

بعد ذلك، حدد القلب في مقدمة الصدر، والأوعية الدموية الرئيسية بالقرب من القلب وفي المنصف تجويف القصبة الهوائية عبارة عن دائرة مظلمة صغيرة على مستوى الرقبة وأعلى الصدر ، والتي تتشعب إلى القصبات الهوائية الرئيسية اليمنى واليسرى ، ثم تستمر في التفرع إلى قصبات هوائية أصغر وأصغر. لاحظ أن كل قصبات هوائية ترتبط ارتباطا وثيقا باثنين أو ثلاثة أوعية دموية.

الآن ، ابدأ في فحص فحوصات فئران DT غير المستحثة وحدد وجود أي تشوهات. استبعد من التجربة أي فئران ذات ظلال رئوية غير طبيعية قبل الحث ، مثل العقيدات أو الفقاعات الانتفاخ الرئوي. في هذه التجربة ، استخدم الفئران التي لديها فحوصات رئوية طبيعية يمكن أن تنتج أورام ناتجة عن FGF9.

للحث على الأورام ، قم بتوفير الدوكسيسيكلين في طعامها بمعدل 200 جزء في المليون. بعد 10 أسابيع ، قم بإجراء فحص مجسم ثان لهذه الفئران لتأكيد تطور عقيدات الورم في رئتيها. ثم قسم الفئران إلى مجموعتين.

قم بتطبيق مانع FGFR ، AZD4547 ، لمجموعة واحدة عبر أنبوب المعدة. افعل ذلك لمدة 6 أيام في الأسبوع على مدار 10 أسابيع. أعط المجموعة الأخرى دواء وهميا.

تابع التغييرات في الظلال العقدية عن طريق إجراء فحص ثالث بعد أربعة إلى خمسة أسابيع من العلاج. في وقت لاحق ، في نهاية العلاج الكامل لمدة 10 أسابيع ، قم بإجراء فحص رابع. بعد ذلك ، حدد التغيرات الديناميكية في عقيدات الورم ، استجابة للعلاج ، من خلال مقارنة المواضع المتشابهة داخل صور المسح التسلسلي في نقاط زمنية مختلفة.

ابحث عن مظهر أو اختفاء أي ظلال غير طبيعية. يعد التوجيه الصحيح إلى نفس الموضع التشريحي أمرا بالغ الأهمية لتفسير النتائج. استخدم المعالم التشريحية التي يسهل التعرف عليها داخل الصدر، مثل القصبة الهوائية وتشعبها والشعب الهوائية الرئيسية اليمنى واليسرى والشريان الأورطي والأوعية الدموية الكبيرة والحجاب الحاجز.

بسبب إمالة الجسم ، تعتبر العظام معالم أقل فائدة. بعد القتل الرحيم للفأر والوصول إلى رقبته ورئتيه ، قم بقطع القلب والغدة الصعترية. أدخل ملقطا خلف القصبة الهوائية لفصلها عن المريء.

بعد ذلك ، قم بتقطيع القصبة الهوائية باستخدام قنية G24 ، وقم بتأمين القنية عن طريق عقد خياطة موضوعة حول طرف القصبة الهوائية. الآن ، قم بتضخيم الرئة وإصلاحها باستخدام مثلج بارد 4٪ PFA عبر القنية بعمود 25 سم. بعد ذلك ، افصل القنية وشد العقدة على القصبة الهوائية لمنع تسرب PFA.

الآن ، قم بقطع القصبة الهوائية العلوية ، بما في ذلك ارتباطها بالحنجرة. وأثناء سحب القصبة الهوائية من خيط الخياطة ، قم بتشريح القصبة الهوائية والرئتين من جميع المرفقات. ثم قم بإزالة القصبة الهوائية مع الرئتين في بلان.

ضع المناديل في أنبوب سعة 15 مل يحتوي على 5 مل من درجة حرارة الغرفة 4٪ PFA. اترك الرئتين في PFA طوال الليل لاختراق الأنسجة وتثبيتها بالكامل. ثم قم بمعالجة الأنسجة كالمعتاد.

في الفحص المسبق لفئران DT التي تتراوح أعمارها بين 8 و 12 أسبوعا لهذه الدراسة ، أظهر حوالي نصفها تشوهات في الرئة في فحص التصوير المقطعي المحوسب المجهري ، مما يجعلها غير مناسبة للإدراج. بالنسبة للدراسة ، تم تنشيط تحريض الورم لمدة 10 أسابيع ، تلاه العلاج. أظهرت الفئران التي أعطيت مثبط FGFR ، AZD4547 ، لمدة 10 أسابيع اختفاء أو انخفاضا في حجم العقيدات التي كانت مرئية في فحوصات ما قبل العلاج.

من ناحية أخرى ، لم تظهر الفئران الضابطة التي أعطيت الدواء الوهمي إما أي تغيير ، أو زيادة في حجم العقيدات ، و / أو ظهور عقيدات جديدة. يؤكد التقييم النسيجي لنقطة النهاية للرئتين دقة النتائج التي تم التوصل إليها باستخدام الفحص المقطعي المحوسب المجهري. الفئران التي حكم عليها بأنها رئتين صافتين بالفعل ، لديها أنسجة الرئة الطبيعية.

في حين أن الفئران التي أظهرت تشوهات ، أظهرت تغيرات نسيجية مختلفة بما في ذلك الفقاعات والعقيدات. بعد 10-12 أسبوعا من الحث باستخدام الدوكسيسيكلين ، لوحظت عقيدات متعددة من السرطان الغدي ، ذات الأحجام والمواقف المتغيرة ، في جميع. أظهر العلاج اللاحق مع 10-12 أسبوعا من حاصرات FGFR عقيدات أقل وأصغر.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام Micro-CT لتقييم تطور الورم في رئة الفأر. ومتابعة أي تغييرات في هذه الأورام ، استجابة للإجراءات التجريبية المختلفة. بمجرد بدء تشغيل الماوس ، يمكن إجراء عمليات المسح في أقل من 10 دقائق لكل ماوس.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إبقاء الفأر تحت التخدير العميق ، ولفه بإحكام في سرير العينة لتقليل الحركة أثناء الفحص. بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال سرطان الرئة والخلايا الجذعية السرطانية لاستكشاف مدى تطور الورم ، والانحدار التقدمي ، وإعداد التجارب المختلفة. لا تنس أن العمل باستخدام الأشعة السينية يمكن أن يكون خطيرا.

في إجراءات تشغيل الماكينة القياسية يجب دائما اتخاذ أثناء إجراء هذا الإجراء.