Name: وسيلة فعالة للحصول على خلايا Dedifferentiated الدهون (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: اكتشف طريقة فعّالة لاستزراع خلايا دهنية معاد تمييزها (DFAT) باستخدام وسط نمو محسّن. تُحسّن هذه البروتوكول جودة الخلايا وتُسرّع إنتاجها لتطبيقات الطب التجددي وهندسة الأنسجة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذا البحث جزئيا من خلال برنامج إنشاء الشركات الناشئة من البحث والتكنولوجيا المتقدمة (برنامج ستارت) من الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (ST261006IP ، TM) وبرنامج مؤسسة البحوث الاستراتيجية في الجامعات الخاصة (2014-2019) (S1411018 ، TM) من وزارة التعليم والرياضة والعلوم والتكنولوجيا.

وقد تم الحصول على عينات من الدهون تحت الجلد البشري من المرضى الذين يخضعون لجراحة في أقسام جراحة التجميل، جراحة المسالك البولية، جراحة الأطفال وجراحة العظام في مستشفى إيتاباشي جامعة نيهون (طوكيو، اليابان). المرضى أعطى موافقة خطية مطلعة، وافقت لجنة الأخلاقيات من جامعة نيهون كلية الطب الدراسة. 1. نسيج التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جلب عينات الأنسجة من غرفة العمليات إلى المختبر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل 1-2 غرام من الأنسجة الدهنية مع 5 مل من برنامج تلفزيوني (-) في درجة حرارة الغرفة (RT) مرة واحدة، في أنبوب 50 مل ثم وضع العينة في طبق من البلاستيك 10 سم. </li></ol> 2. كولاجيناز الهضم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة عينة من برنامج تلفزيوني (-)، ثم إضافة 10 مل من معقم 0.1٪ (ث / ت) حل كولاجيناز (كولاجيناز النوع الثاني) إلى الطبق الذي يحتوي على عينة الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اللحم المفروم مع النسيج المقص الجراحي لحوالي 15 دقيقة، حتى تصل إلى المهروس تتألفency. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي وقت لاحق، هضم الأنسجة المفروم في 0.1٪ (ث / ت) حل كولاجيناز عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة (60 دورة في الدقيقة) في أنبوب 50 مل مع الإثارة لطيف على شاكر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصفية العينة هضمها من خلال مرشح 100 ميكرومتر في أنبوب 50 مل. بعد ذلك، تمرير 10 مل من DCM (انظر الجدول المواد) تستكمل مع 2٪ FBS من خلال مرشح. </li></ol> عزل 3. خلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي الخلايا التي تمت تصفيتها في 100 x ج لمدة 1 دقيقة في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذه المرحلة، وإعداد 5 مل من DCM تستكمل مع 2٪ FBS في أنبوب 50 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ذلك، وضع الخلايا الدهنية العائمة باستخدام ماصة ميكرولتر 1000 وإضافة الخلايا إلى 50 مل أنبوب يحتوي المتوسطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي وقت لاحق، هز أنبوب 50 مل بلطف لمزج المتوسطة DCM مع الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم، الطرد المركزي الأنبوب في 100 x ج لمدة 1 دقيقة في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل المتوسطة في الجزء السفلي من الأنبوب باستخدام 18 G إبرة وحقنة 20 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل، إضافة 10 مل من DCM الصورةupplemented مع 2٪ FBS إلى الخلايا التي تم جمعها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط DCM مع الخلايا عن طريق هز أنبوب 50 مل بلطف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنبوب الطرد المركزي في 100 x ج لمدة 1 دقيقة في RT. </li></ol> 4. خلايا التصفيحات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 41 مل من DCM أو DMEM تستكمل مع FBS 20٪ إلى 12.5 سم قارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ذلك، باستخدام ماصة 200 ميكرولتر إضافة 40 ميكرولتر من الخلايا الدهنية إلى القارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم، تملأ القارورة مع DCM أو DMEM تستكمل مع FBS 20٪. خطوة حاسمة: عند هذه النقطة، وضمان أن الخلايا تنتشر في جميع أنحاء المتوسط. بصريا فحص خلايا منفصلة، ​​وبعد ذلك الحفاظ على قارورة على غطاء طبق بتري مستديرة للحفاظ على انها مسطحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وأخيرا، ضع قارورة داخل الحاضنة وترك الأمر دون عائق في 5٪ CO 2 حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 7 أيام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أسبوع من الحضانة، عكس القارورة والتحقق من وجود خلايا DFAT. بعد ذلك، تقييم DFAT جيل خلية الكفاءة كما هو موضح 10 منذ في هذا fibrobl نقطةوتقع خلايا مثل AST (خلايا DFAT) في مناطق مختلفة من الخلايا الدهنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تستكمل إضافة 5 مل من DCM أو DMEM مع FBS 20٪ إلى قارورة بعد إزالة خلية ثقافة المتوسط ​​السابق. السماح للخلايا DFAT لتنمو لمدة أسبوع آخر بعد تغيير المتوسطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام عداد الخلية، وحساب عدد الخلايا DFAT ولدت في ظل ظروف مختلفة الثقافة الخلية (DCM مقابل DMEM). </li></ol>

<ol><li>Lanzoni, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+clinical+programs+of+stem+cell+therapies+for+liver+and+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: clinical programs of stem cell therapies for liver and pancreas.</a> Stem Cells. 31 (10), 2047-2060 (2013).</li>
<li>de Girolamo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%3A+a+new+%22cells+as+drugs%22+paradigm.+Efficacy+and+critical+aspects+in+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Pharm.+Des%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem/stromal cells: a new "cells as drugs" paradigm. Efficacy and critical aspects in cell therapy.</a> Curr. Pharm. Des. 19 (13), 2459-2473 (2013).</li>
<li>Lindroos, B., Suuronen, R., Miettinen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+adipose+stem+cells+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell.+Rev%22%5BJournal%5D)">The potential of adipose stem cells in regenerative medicine.</a> Stem Cell. Rev. 7 (2), 269-291 (2011).</li>
<li>Yan, J., Tie, G., Xu, T. Y., Cecchini, K., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+as+a+treatment+for+peripheral+arterial+disease%3A+current+status+and+potential+impact+of+type+II+diabetes+on+their+therapeutic+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell.+Rev%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells as a treatment for peripheral arterial disease: current status and potential impact of type II diabetes on their therapeutic efficacy.</a> Stem Cell. Rev. 9 (3), 360-372 (2013).</li>
<li>Ringden, O., Keating, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+as+treatment+for+chronic+GVHD%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells as treatment for chronic GVHD.</a> Bone Marrow Transplant. 46 (2), 163-164 (2011).</li>
<li>Matsumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+adipocyte-derived+dedifferentiated+fat+cells+exhibit+multilineage+potential%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mature adipocyte-derived dedifferentiated fat cells exhibit multilineage potential.</a> J. Cell. Physiol. 215 (1), 210-222 (2008).</li>
<li>Lessard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+adipose+stem+cells+through+dedifferentiation+of+mature+adipocytes+in+ceiling+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of human adipose stem cells through dedifferentiation of mature adipocytes in ceiling cultures.</a> J. Vis. Exp. (97), (2015).</li>
<li>Lessard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+dedifferentiating+human+mature+adipocytes+from+the+visceral+and+subcutaneous+fat+compartments%3A+fibroblast-activation+protein+alpha+and+dipeptidyl+peptidase+4+as+major+components+of+matrix+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of dedifferentiating human mature adipocytes from the visceral and subcutaneous fat compartments: fibroblast-activation protein alpha and dipeptidyl peptidase 4 as major components of matrix remodeling.</a> PLoS One. 10 (3), 0122065(2015).</li>
<li>Peng, X., et al. Phenotypic and Functional Properties of Porcine Dedifferentiated Fat Cells during the Long-Term Culture In Vitro. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPeng%2C+X+%22Biomed.+Res.+Int%22">Biomed. Res. Int</a>. 2015, 673651(2015).</li>
<li>Kono, S., Kazama, T., Kano, K., Harada, K., Uechi, M., Matsumoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+functional+properties+of+feline+dedifferentiated+fat+cells+and+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and functional properties of feline dedifferentiated fat cells and adipose-derived stem cells.</a> Vet. J. 199 (1), 88-96 (2014).</li>
<li>Bellin, M., Marchetto, M. C., Gage, F. H., Mummery, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+the+new+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: the new patient.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13 (11), 713-726 (2012).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

الخلايا الشحمية الناضجة التي تخضع لها فقد التمايز في المختبر، وهي عملية تعرف باسم الثقافة السقف، قد العودة إلى النمط الظاهري أكثر بدائية واكتساب قدرات التكاثري. ويشار إلى هذه الخلايا إلى خلايا الدهون كما dedifferentiated (DFAT). تم تقييم إمكانات multilineage تمايز الخلايا DFAT. التدفق الخلوي وكشف تحليل وتحليل التعبير الجيني أن الخلايا DFAT كانت متجانسة إلى حد كبير بالمقارنة مع مخولا لصيانة طائرات (6). في الواقع، والوضع مستضد على سطح الخلية من خلايا DFA...

العلاج بالخلايا وهندسة الأنسجة هي المواضيع الساخنة في مجال الطب التجديدي 1-5. في حين أن هذه الطرائق العلاجية على وعود كبيرة، العديد من القضايا الفنية تعرقل حاليا استخدام السريري. في هذا الصدد، كما هو الحال في توليد خلايا الجذع، يجب على جميع العلاجات هندسة الأنسجة تنتج خلايا خالية من transductions الجين الخارجية من أجل الحفاظ على سلامة المرضى. وفقا لذلك، كنا المجموعة الأولى لإنتاج خلايا DFAT الإنسان 6 بنجاح. وقد تبنت عدة مجموعات بحثية أخرى منذ أسلوبنا على توليد خلايا DFAT من أصل الثدييات 7-9، إلقاء مزيد من الضوء على فائدة نموذجنا. على مدى العديد من الدراسات، وجدنا أن نوعية البيئة زراعة الخلايا يمكن تعديلها عن طريق ضبط محتوى المتوسطة الخلية. وقد أدى هذا الاكتشاف إلى زيادة في معدل النجاح من إنتاج خلايا DFAT وتحسنت نوعية الخلية؛ كل من العوامل الحاسمة فيتوليد كفاءة الخلايا للتجارب السريرية في المستقبل. في هذا الصدد، وتحسين DFAT الثقافة المتوسطة (DCM، وسيلة مماثلة لالجذعية الوسيطة المتوسطة الخلية، والتي تحتوي على الانسولين المؤتلف البشري، الزلال في الدم، وحمض-L الجلوتاميك، والعديد من الأحماض الدهنية، والكولسترول) وطريقة لتوليد الخلايا DFAT و وقد وضعت انتشار (للمزيد من المعلومات عن محتويات DCM متاحة عند الطلب). تم إنشاء استخدام هذا الأسلوب جودة عالية خلايا DFAT مع القدرة على التمايز إلى عدة أنواع الخلايا بما في ذلك مكون الشحم، عظمية، والخلايا المولدة للغضروف. وإجمالا، هذا البروتوكول زراعة الخلايا التحقق من صحة يحسن نوعية الخلايا DFAT وقد تكون مفيدة للغاية لتعزيز التطبيقات السريرية لعلاج الخلايا وهندسة الأنسجة.

<table><tbody><tr><td>CSTI303-MSC medium&nbsp;</td><td>CSTI</td><td>87-671</td><td>يتم تعريف هذا الوسيط على أنه DCM في النص</td></tr><tr><td>PBS (-)</td> <td>Wako</td><td>166-23555</td><td>لا يحتوي على Mg2 + و Ca2 + </td></tr><tr><td>DMEM medium</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني</td><td>سيجما</td><td>172012</td><td></td></tr><tr><td>الكولاجيناز النوع الثاني</td><td>مقص</td><td></td> سيجما C-6885 <td></td></tr><tr><td></td><td>تاكاساجو الصناعة الطبية المحدودة</td><td>TKZ-F2194-1</td><td></td></tr><tr><td>شاكر</td><td>TAITEC</td><td>Bioshaker V.BR-36</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Cell Strainer 100 & mu ؛ م الأصفر</td><td>كورنينج علوم الحياة&nbsp;</td><td>DL 352360</td><td></td></tr><tr><td>فالكون 12.5 سم &sup2 ؛ قارورة ثقافة الخلايا ذات الرقبة المستطيلة مع غطاء برغي أزرق التهوية</td><td>CORNING LIFE SCIENCES&nbsp;</td><td>353107</td><td></td></tr><tr><td>18 جرام إبرة</td><td>NIPRO</td><td>02-002</td><td></td></tr><tr><td>20 مل حقنة&nbsp;</td><td>نيبرو</td><td>08-753</td><td></td></tr><tr><td>Z سلسلة كولتر كاونتر</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>383550</td><td></td></tr></tbody></table>

وسيلة فعالة للحصول على خلايا dedifferentiated الدهون

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

هندسة الأنسجة والعلاج بالخلايا على وعود كبيرة سريريا. في هذا الصدد، وخلايا متعددة القدرات، مثل الخلايا الجذعية الوسيطة (اللجان الدائمة)، ويمكن استخدام العلاجي، في المستقبل القريب، لاستعادة وظيفة لأعضاء تالفة. ومع ذلك، العديد من القضايا الفنية، بما في ذلك إجراء الغازية للغاية من عزل اللجان الدائمة وعدم الكفاءة المحيطة التضخيم، وتعيق حاليا استخدام السريرية المحتملة لهذه الطرائق العلاجية. هنا، ونحن نقدم طريقة فعالة للغاية لتوليد الخلايا الدهنية dedifferentiated (DFAT)، وخلايا لجنة السلامة البحرية الشبيهة. ومن المثير للاهتمام، وخلايا DFAT يمكن التفريق إلى عدة أنواع الخلايا بما في ذلك مكون الشحم، عظمية، والخلايا المولدة للغضروف. على الرغم من أن مجموعات أخرى قد قدمت سابقا أساليب مختلفة لتوليد خلايا DFAT من الأنسجة الدهنية ناضجة، يسمح لدينا وسيلة لنا لإنتاج خلايا DFAT أكثر كفاءة. وفي هذا الصدد، علينا أن نبرهن على ثقافة DFAT المتوسطة (DCM)، تستكمل مع 20٪ FBS،هو أكثر فعالية في توليد خلايا DFAT من DMEM، على أن تستكمل مع FBS 20٪. بالإضافة إلى ذلك، فإن الخلايا DFAT التي تنتجها طريقة لدينا ثقافة الخلية يمكن redifferentiated إلى عدة أنواع الأنسجة. على هذا النحو، وقدم نموذجا مثيرة جدا للاهتمام ومفيدة للدراسة فقد التمايز الأنسجة.

<html> في هذه الدراسة، تم تحسين طريقة وأدوات لتوليد الخلايا DFAT (الشكل 1). لدينا وسيلة تسمح لنا لتوليد خلايا DFAT باستخدام كل DCM والمتوسطة DMEM تحتوي على 20٪ FBS (الشكل 2A). على هذا النحو، قارنا كفاءة DCM وDMEM في توليد خلايا DFAT. في هذا الصدد، وتعزيز DCM خلية DFAT انتشار من قبل ثلاث مرات بالمقارنة مع DMEM، بغض النظر عن عدد الخلايا الشحمية (الشكل 2A وباء). باستخدام 20٪ أيضا يعزز ...

لقد قمنا بتعديل شروط توليد خلايا DFAT ونقدم هنا معلومات تتعلق باستخدام وسيط نمو محسن لإنتاج هذه الخلايا.

وسيلة فعالة للحصول على خلايا Dedifferentiated الدهون

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

يكمن الهدف العام من طريقة زراعة الخلايا المبتكرة هذه في إنتاج خلايا دهنية منزوعة التمايز بكفاءة أكبر. وقد تساعد طريقتنا الباحثين العاملين في مجال الطب التجديدي على الإجابة عن أسئلة جوهرية حول العمليات المتعددة المشاركة في إنتاج الخلايا الدهنية والعظمية والغضروفية. وبما أن الميزة الأساسية لبروتوكول زراعة الخلايا الخاص بنا تتمثل في تحسين جودة خلايا DEFAT، فقد يتم تطبيقه في المستقبل القريب لتعزيز التطبيقات الحالية في العلاج الخلوي وهندسة الأنسجة.بعد نقل عينة الدهون تحت الجلد الخاصة بالمريض من غرفة العمليات إلى المختبر، قم بوزن النسيج ووضع عينة من النسيج الدهني تتراوح كتلتها بين 1 إلى 2 جرام في أنبوب سعة 15 ملليلتر. بعد ذلك، اغسل العينة باستخدام 5 ملليلتر من PBS ثم انقل العينة إلى طبق بلاستيكي بقطر 10 سنتيمتر. قم بإزالة PBS.ثم أضف 10 milliliters من الكولاجيناز المعقم بتركيز 0.1%weight per volume إلى الطبق الذي يحتوي على العينة. بعد ذلك، استخدم مقصاً جراحياً لفرم النسيج حتى يصل إلى قوام مهروس. انقل النسيج المفروم ومحلول الكولاجيناز إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 milliliter وقم بالهضم عند 37 degrees Celsius لمدة 30 minutes، مع الرج بسرعة 60 RPM.بعد عملية الهضم، قم بترشيح العينة المهضومة عبر مرشح بمقاس 100 micron في أنبوب جديد سعة 15 milliliter. بعد ذلك، مرر 10 milliliters من وسط زراعة DEFAT المكمل بـ 2%FBS عبر المرشح. ولفصل الخلايا الدهنية عن معلق الخلايا، قم أولاً بطرد الخلايا المرشحة مركزياً عند 100 ×g لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة.أثناء عملية الطرد المركزي، قم بتحضير 5 mL من وسط DCM المضاف إليه 2% FBS في أنبوبة سعة 15 mL. بعد ذلك، استخدم ماصة سعة 1000 µL لسحب الخلايا الدهنية الطافية من أنبوبة الطرد المركزي وإضافة الخلايا إلى أنبوبة سعة 15 mL تحتوي على الوسط. رُج الأنبوبة برفق لخلط وسط DCM مع الخلايا.بعد ذلك، قم بطرد الأنبوب مركزياً عند 100 ×g لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة. وبعد عملية الطرد المركزي، استخدم إبرة قياس 18 ومحقنة سعة 20 milliliter لإزالة الوسط الموجود في قاع الأنبوب. ثم أضف 10 milliliters من DCM المدعم بنسبة 2%FBS إلى الخلايا واخلط عن طريق رج الأنبوب برفق.قم بطرد الخلايا مركزياً مرة أخرى عند 100 ×g لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة. لبدء عملية الزرع، أضف 41 milliliters من وسط DCM أو DMEM المكمل بـ 20%FBS إلى دورق سعة 12.5 centimeter. بعد ذلك، استخدم ماصة سعة 200 microliter لسحب 40 microliters من الخلايا الدهنية وإضافتها إلى الدورق.ثم املأ القارورة بـ DCM أو DMEM مضافاً إليه 20%FBS. ومن الضروري أن تتوزع الخلايا في جميع أنحاء الوسط. ضع القارورة على غطاء طبق بتري مستدير للحفاظ عليها في وضع مسطح.أخيرًا، ضع الدورق داخل حاضنة مضبوطة على 5% carbon dioxide و37 degrees Celsius واتركه دون تحريك لمدة سبعة أيام. وبعد أسبوع من الحضن، اقلب الدورق وافحص وجود خلايا دهنية غير متمايزة. بعد ذلك، اسحب الوسط الغذائي ثم أضف خمسة milliliters من DCM أو DMEM المكمل بـ 20%FBS إلى الدورق.اترك خلايا DEFAT تنمو لمدة أسبوع آخر بعد تغيير الوسط الغذائي. وبعد مرور أسبوع، استخدم عداد الخلايا لحساب عدد خلايا DEFAT الناتجة في ظل ظروف زراعة خلوية متنوعة. تُظهر هذه الصورة مستعمرات خلايا DEFAT بعد 14 يوماً من الزراعة في DMEM.تظهر هنا خلايا DEFAT بعد 14 يوماً من الزرع في وسط DCM. وفي كل حالة، يمثل شريط المقياس 200 microns. تم قياس تكاثر خلايا DEFAT باستخدام عداد الخلايا، ومقارنة كفاءة كل من DCM وDMEM في إنتاج خلايا DEFAT.كما يتضح هنا، لوحظ تعزيز في تكاثر الخلايا عند استخدام DCM. وفي هذه التجربة، تم استزراع خلايا DEFAT البشرية، التي تم إنتاجها باستخدام DCM، لمدة ثلاثة أسابيع في أوساط تحفيز مناسبة لتقييم قدرات إعادة التمايز والتمايز لخلايا DEFAT. وأظهرت الخلايا قدرة على التمايز العظمي من خلال صبغ الفوسفاتاز القلوي والصبغ بـ Alizarin Red S. وأخيراً، تم إثبات القدرة على التمايز الدهني باستخدام صبغة Oil Red O.من المهم للغاية ضمان تنفيذ عمليتي الكولاجيناز مع الترسيب وعزل الخلايا الدهنية بأقصى درجات العناية من أجل إنتاج خلايا DEFAT عالية الجودة بنجاح. ومن خلال هذه الجهود، تهدف طريقة استزراع الخلايا المعتمدة لدينا إلى تسهيل جهود البحث الحالية والمستقبلية في مجالات البيولوجيا التنموية والطب التجديدي.

an-efficient-method-to-obtain-dedifferentiated-fat-cells

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

قد تمثل الخلايا الشحمية الناضجة مصدرا وفيرا للخلايا الجذعية من خلال عدم التمايز ، مما يؤدي إلى مجموعة متجانسة من الخلايا الشبيهة بالخلايا الليفية. يستخدم هضم الكولاجيناز لعزل الخلايا الشحمية الناضجة عن الدهون البشرية. الهدف من بروتوكولنا هو الحصول على خلايا دهنية متعددة القدرات وغير متمايزة من الخلايا الشحمية البشرية الناضجة.

جيل من الخلايا الجذعية الدهنية لجسم الإنسان من خلال فقد التمايز من الناضجة الخلايا الشحمية في الثقافات السقف

التفريق بين adipocytes أبيض وبيج من الأنسجة الدهنية والأوعية الدموية موروث يحمل إمكانات لتحسين التمثيل الغذائي في السمنة. يصف لنا البروتوكولات CD34 + CD31 + عزل الخلية البطانية من الدهون البشرية والتوسع اللاحق في المختبر ، والتمايز في adipocytes بيج وأبيض. وتناقش عدة تطبيقات المتلقين للمعلومات.

العزلة والتوسع وتحريض أديبوجينيك CD34 + CD31 + خلايا بطانية من الأنسجة الدهنية تحت الجلد وأومينتال البشرية

وقد الأنسجة الدهنية البيضاء (وات) أوجه القصور الهامة في نماذجها الثقافة الأولية الحالية، التي تعوق التنمية الدوائية والدراسات الأيضية. نقدم هنا، بروتوكولا لإنتاج نظام ميكروفيسيولوجيكال الدهنية بوات يقحم بين الأوراق من الخلايا اللحمية. يوفر هذا بناء منصة مستقرة وقابلة للتكيف للابتدائي وات الثقافة.

منصة ميكروفيسيولوجيك للدهون البشرية: تقع في الأنسجة الدهنية البيضاء

يصف هذا البروتوكول النهج التقني لعزل المجموعات الفرعية للخلايا اللحمية الدهنية والالتهابية الليفية من مستودعات الأنسجة الدهنية البيضاء داخل البطن (WAT) عن طريق فرز الخلايا المنشطة بالفلورة أو فصل الخرزة المغناطيسية المناعية.

عزل المجموعات الفرعية للخلايا اللحمية الأديبوجينية والليفية الالتهابية من مستودعات الفئران الدهنية داخل البطن

نحن نقدم طريقة بسيطة لعزل الخلايا الدهنية الصالحة للحياة للغاية من منصات الدهون الظهارية الماوس باستخدام فرز الخلايا المنشطة الفلوريس.

إعداد الخلايا الدهنية بروجينيتور من ماوس Epididymal الأنسجة الدهنية

يسمح البروتوكول بتوليد مجموعة من الخلايا الشحمية النقية من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات (iPSCs). يستخدم حمض الريتينويك للتمييز بين الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات إلى خلايا جذعية وسيطة (MSCs) تستخدم لإنتاج الخلايا الشحمية. بعد ذلك ، يتم استخدام نهج الفرز على أساس تلطيخ النيل الأحمر للحصول على الخلايا الشحمية النقية.

تمايز قوي ل iPSCs البشرية إلى مجموعة نقية من الخلايا الشحمية لدراسة الاضطرابات المرتبطة بالخلايا الشحمية

يصف هذا البروتوكول العزل شبه الآلي للجزء الوعائي اللحمي (SVF) من الأنسجة الدهنية للفئران للحصول على الخلايا الدهنية وتحقيق تمايز الخلايا الشحمية في المختبر. استخدام مفكك الأنسجة لهضم كولاجيناز يقلل من التباين التجريبي ويزيد من التكاثر.

عزل شبه آلي للجزء الوعائي اللحمي من الأنسجة الدهنية البيضاء باستخدام مفكك الأنسجة

يحدد هذا البروتوكول عزل الأسلاف الليفية العضلية الهيكلية والقلبية (FAPs) من الفأر الشوكي (Acomys) عن طريق التفكك الأنزيمي وفرز الخلايا المنشطة بالتألق. يمكن توسيع FAPs التي تم الحصول عليها من هذا البروتوكول بشكل فعال وتمييزها إلى الخلايا الليفية العضلية والخلايا الشحمية.

عزل السلف الليفي الأديبوجيني والتوسع والتمايز عن نموذج الفأر الشوكي

هنا ، نقدم بروتوكولا يمكنه تحويل الأنسجة الدهنية الذاتية إلى مواد دهنية مختلفة ذات خصائص ووظائف فيزيائية كيميائية مختلفة.

تجزئة الأنسجة الدهنية المبتكرة لتحويل الدهون إلى مكونات متخصصة

هنا، نقدم طريقة معيارية لعزل الخلايا الجذعية والخلايا الدهنية المشتقة من الدهون بكفاءة، تتميز بانخفاض &gt;90٪ في وقت المعالجة، وحيوية عالية للخلايا، وتوافق واسع.

العزل الفعال للخلايا الجذعية المشتقة من الدهون والخلايا الدهنية من نسيج الدهون الخنازيري

اكتشف طريقة فعّالة لاستزراع خلايا دهنية معاد تمييزها (DFAT) باستخدام وسط نمو محسّن. تُحسّن هذه البروتوكول جودة الخلايا وتُسرّع إنتاجها لتطبيقات الطب التجددي وهندسة الأنسجة.

وسيلة فعالة للحصول على خلايا Dedifferentiated الدهون

استكشف المزيد من الفيديوهات