تطوير وصيانة للورم المريض قبل السريرية المستمدة طعم أجنبي نموذج للتحقيق في رواية مكافحة السرطان العلاج

الهدف العام من إجراء الطعم الجيني للورم المشتق من المريض تحت الجلد هو دراسة فعالية العلاجات الجديدة ، واكتشاف المؤشرات الحيوية التنبؤية ، والمسارات المقاومة للأدوية في الأورام. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الأورام حول ما إذا كان دواء معين يظهر نشاطا ضد نوع معين من الورم. تتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية في أن أجهزة Xenographs المشتقة من المريض تحافظ على عدم التجانس الجزيئي والجيني والنسيجي النموذجي للأورام الأصلية ، مما يجعل النموذج أكثر صلة سريريا.

سيوضح الإجراء ستايسي باجبي ، مساعد باحث محترف وفني بيطري معتمد من مختبرنا. بعد جمع واحد إلى ملليلترين من الدم في أنبوب فصل خلايا الدم الذي يحتوي على سترات الصوديوم ، قم بالطرد المركزي للعينات ونقل طبقة الخلايا أحادية النواة في الدم المحيطي إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر. املأ الأنبوب إلى الأعلى ب PBS المعقم.

ثم قم بتدوير الخلايا مرة أخرى. يتبعه غسل سريع بملليلتر واحد من PBS ، مع الحرص على عدم إزعاج حبيبات PMBC. بعد ذلك ، استخدم ماصة لنقل البلازما من أنبوب تجميع خلايا الدم إلى قارورة مبردة معقمة سعة 1.5 مليلتر ، وقم بتخزين البلازما وحبيبات PBMC عند سالب 80 درجة مئوية.

انقل أنسجة الورم البشري إلى منشأة في كوب معقم يحتوي على وسط كامل وضع الكوب في غطاء تدفق رقائقي. في أسرع وقت ممكن ، بعد الحصاد ، انقل الأنسجة إلى طبق تقطيع بلاستيكي معقم بكمية صغيرة من وسط الاسترجاع. بعد ذلك ، باستخدام مقص صغير معقم بالأوتوكلاف وملقط ، قم بتقطيع الأنسجة إلى قطع ثلاثة في ثلاثة مليلتر تقريبا وضع 10 إلى 12 قطعة في أنبوب طرد مركزي دقيق معقم سعة 1.5 مليلتر يحتوي على 300 ميكرولتر من محلول خليط البروتين الجيلاتيني على الجليد للزرع.

للتخزين المجمد السريع ، انقل العدد المناسب من قطع الورم إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد سعة 1.5 مليلتر وضع القارورة في عامل النيتروجين السائل. ثم ضعه في فريزر 80 درجة مئوية تحت الصفر. للتثبيت الرسمي وتضمين البارافين ، ضع ثلاث قطع صغيرة من الورم في كوب فورمالين 10 مليلتر 10٪ لمدة 24 ساعة.

بعد معالجة الأنسجة إلى كتل مدمجة في البارافين ، انقل أي قطع من الأنسجة المتبقية إلى أنبوب مبرد. بعد ذلك ، أضف ملليلتر واحد من الوسط الكامل المكمل بنسبة 10٪ DMSO إلى الأنسجة وقم بتخزين الأنابيب على الجليد حتى يمكن نقلها إلى حاوية تجميد كحول الأيزوبروبيل. وضع تلك الحاوية في فريزر 80 درجة مئوية تحت الصفر.

لحقن أنسجة الورم ، قم بتحميل قطع الورم المخزنة في محلول خليط البروتين الجيلاتيني في مبازل قياس 12 معقمة ، مع الحرص على إدخال كل قطعة ورم بالكامل في المبزل. بعد ذلك ، تأكد من عدم الاستجابة لقرص إصبع القدم في فأر رياضي عاري عمره ستة إلى ثمانية أسابيع وانقل الماوس إلى حقل نظيف في غطاء تدفق رقائقي معقم. توصيل الورم F0 تحت الجلد إلى منطقة الرقبة الظهرية وإلى كل جانب من جوانب الفأر ، متبوعا بإعطاء تحت الجلد من التسكين البعيد إلى أحد مواقع الجناح لحقن الورم.

ثم ضع الماوس مرة أخرى في قفصه مع المراقبة حتى يتعافى تماما. راقب نمو وصحة الفئران المزروعة بالزينوغراف مرة واحدة على الأقل في الأسبوع ، وتسجيل أحجام الورم وتوليد الورم وتاريخ حقن الورم وصحة الفئران في نظام تتبع مناسب. عندما يصل حجم الورم إلى حوالي 1،500 إلى 2،000 ملليمتر مكعب ، استخدم مقصا ملقطا وملقطا لاستئصال الورم وتمرير الورم F1 إلى الجيل التالي من خمسة ، كما هو موضح للتو ، مع الحرص على جمع الفورمالين المجمد السريع وعينات الورم القابلة للحياة كما هو موضح لكل ورم.

عندما تظهر الفئران المتبقية من مجموعة الورم F0 أورام بحجم 1،500 إلى 2،000 ملليمتر مكعب تقريبا ، اجمع هذه الأورام كما هو موضح للتو لجمعها. عند الوصول إلى مرحلة جيل الورم F15 ، استخدم الجيل الأول من قطع الورم القابلة للحياة المتوفرة في تخزين النيتروجين السائل للسلسلة التالية من حقن الورم. عندما يكون الورم المطلوب كبيرا جدا ، من 1 ، 500 إلى 2 ، 000 ملليمتر مكعب ، اتبع الإجراءات المذكورة أعلاه لجمع الورم لتوسيعه إلى الكمية المطلوبة من الفئران.

جرعة الفئران مع الدواء ووزنها وقياسها مرتين في الأسبوع. قم بتقسيم الفئران عشوائيا إلى مجموعات علاجية تحتوي على 10 أورام لكل مجموعة ، ومتوسط حجم الورم الجماعي من 100 إلى 300 ملليمتر مكعب ضمن عدد قليل من الانحرافات المعيارية عن بعضها البعض. ثم قم بفرز الفئران إلى مجموعات مناسبة للعلاج.

التهجين الفلوري ثنائي اللون في الموقع للإنسان والفأر الذي تم اصطياده أحد الحمض النووي أن الخلايا اللحمية البشرية في الورم F0 يتم استبدالها بخلايا لحمة الفأر في ورم F1. في حين أن كل عامل نمو خلايا الكبد المشتق من الإنسان في الجيل F0 يتم استبداله بعامل نمو خلايا الكبد الفأرية في جيل F1 ، يتكون عامل نمو البطانية الوعائية من كل من بروتين الإنسان والفأر في جيل F1. علاج الأجيال المختلفة من نفس الورم لا يغير استجابة العلاج.

مع مقاومة أو حساسية الورم يبدو وكأنه سلالة ورم بدلا من توليد الورم المحدد. علاوة على ذلك ، فإن تواتر الطفرات في هذه الجينات المتحولة بشكل شائع مشابه جدا بين أطلس جينوم السرطان وبنك زينوغراف الورم المشتق من مريض القولون والمستقيم. مما يشير إلى أن الطفرات الشائعة التي لوحظت في مرضى القولون والمستقيم ممثلة بشكل جيد في نموذج زراعة القولون والمستقيم المشتق من مريض القولون والمستقيم.

بمجرد إتقانها ، يمكن إكمال هذه التقنية في غضون ساعة إلى ساعتين ، إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن يكون لديك فريق سريري متماسك لتحديد مرضى السرطان والحصول على موافقتهم ولإزالة أنسجة الورم وتجسيدها. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى ، مثل التحقيق في المركبات المضادة للسرطان كعوامل مفردة أو مركبة ، للإجابة على أسئلة إضافية حول جدوى هذه الاستراتيجيات للمرضى الذين يعانون من نوع معين من الورم.

بعد تطويرها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الأورام لاستكشاف علاجات السرطان الجديدة ، وعدم تجانس الورم ، وآليات مقاومة العلاج ، وبيولوجيا الخلايا الجذعية السرطانية ، والتفاعلات اللحمية للورم. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تطوير والحفاظ على نموذج xenograph للورم المشتق من المريض لتقييم علاجات السرطان الجديدة.