أدوات لدراسة دور HMGB1 البروتين المعماري في تجهيز اللولب تشويه، والحمض النووي الخاصة بالموقع Interstrand Crosslinks

الهدف العام من تجارب الترسيب المناعي للكروماتين المعدل والالتفاف الفائق للحمض النووي هو دراسة الارتباط والتعديلات الطوبولوجية اللاحقة التي تسببها البروتينات المعمارية على تلف الحمض النووي الخاص بالموقع الناجم عن عوامل العلاج الكيميائي أو المسرطنة في الخلايا البشرية. ستسمح لنا هذه المنهجية بمعالجة الأسئلة الرئيسية حول تلف الحمض النووي وإصلاحه ، مما يسهل اكتشاف أهداف دوائية جديدة لعلاج السرطان. تسمح لنا تقنيتنا بتوجيه تلف الحمض النووي الخاص بالموقع ، وتسهل تقييم عمليات إصلاح الحمض النووي الحرجة ذات الصلة بالسرطان البشري.

للبدء ، قبل 24 ساعة من التعدي ، لوحة 400 ، 000 خلية ثدييات لكل طبق 60 ملم في DMEM مكملة بنسبة 10٪ FBS بدون مضادات حيوية. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون بين عشية وضحاها. في أنبوب سفلي دائري سعة 14 مليلتر ، امزج 30 ميكرولترا من عامل الإرسال بدرجة حرارة الغرفة مع 500 ميكرولتر من وسط النمو 1X الذي تم تسخينه إلى 37 درجة مئوية.