Name: تشريح اليرقات الزرد الغدد التناسلية الأنسجة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: تعلم تشريح الأنسجة التناسلية من يرقات سمك الزرد لدراسة التمايز الجنسي على المستوى الجزيئي. يتيح هذا البروتوكول عزل الأنسجة من عمر 17 يومًا بعد الإخصاب لتحليل الخصائص الخلوية والجزيئية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر C تشانغ لرعاية الأسماك. وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية (31171074، 31371099 و31571067 لGP) ومشروع المواهب بوجيانج (09PJ1401900 لGP).

تمت الموافقة على التجارب الزرد من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدم جامعة فودان. وأثيرت الزرد ولدت وفقا للاجراءات المتبعة 20. 1. الاستعدادات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زراعة 17 DPF و 25 DPF الزرد اليرقات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 2 ذكور و 2 إناث الزرد الكبار (صحية، 3-6 أشهر من العمر، والمختبرات أب سترين) إلى خزان المعبر في وقت متأخر بعد الظهر قبل يوم العبور. فصل الذكور والإناث مع الجدار. في صباح اليوم التالي، وتجديد خزان المياه وإزالة الحاجز للسماح لهم للتزاوج. جمع البيض في 100 ملم أطباق بتري 1-2 ساعة بعد الإخصاب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> والحفاظ على حوالي 40 الأجنة في لوحة 100 ملم مع 40 مل الجنين المتوسطة (EM) في 28.5 درجة مئوية خلال فترة النمو المبكر (4 أيام) وتحديث EM مرتين في اليوم. نقل اليرقات إلى 1 الدبابات L (40 اليرقات إلى 300 مل من الماء النظام) وتغذية مع الدوارات الحية (العرض الكامل، مرتين في اليوم) بعد 5 DPF.تغذية الأرتيميا العيش بدلا من اتباع نظام غذائي حيدة الخلية والروتيفر بعد 10 DPF. نقل الأسماك إلى تعميم-إعادة نظام المياه في 14 DPF 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع الزرد اليرقات في نظام المياه تعميم إعادة حتى 17 DPF أو 25 DPF. ضمان دورة الخفيفة / مظلمة هو 14/10 ساعة ودرجة الحموضة قيمة المياه النظام حوالي 7.2. قياس طول الجسم من 17 DPF (5،5-6،8 مم) و 25 DPF (8-11 ملم) يرقات 22. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 2٪ لوحات أجار للتشريح. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 4 ز أجار إلى 200 مل من الماء المعقم. تسخين الخليط في فرن الميكروويف حتى يتحول شفافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبريد حل أجار لمدة 15 دقيقة، ثم سكبه في 60 مم أطباق بتري (حوالي 1/3 حجم لوحة). تخزين لوحات أجار طدت في 4 درجات مئوية. </li></ol></li></ol> 2. بروتوكول 1: تشريح الأنسجة الغدد التناسلية بين 17 و 25 يرقات DPF <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الثلج المجروش في خزان لتخدير 17 يرقات DPF. نقلاليرقات تخدير إلى 100 ملم المبردة طبق بيتري مع حل 30 مل البرد رينغر. الحفاظ على الأسماك المحتضنة في حل رينغر مبردة لمدة 15 دقيقة على الأقل لتخدير كامل اليرقات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل اليرقات إلى لوحة آغار precooled مع ملعقة صغيرة من البلاستيك. غمر جسم السمكة بالكامل في 10 مل المبردة حل قارع الأجراس ووضع برفق على جانبها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هل العمليات التالية تحت مجال الرؤية من 25X المجهر ستيريو. المشبك جذع السمك مع ملاقط لتحقيق الاستقرار. مزق البطن طوليا من فتحة الشرج إلى القلب مع زوج آخر من الملقط. إزالة بلطف الجلد والعضلات على جانب واحد من الجسم لكشف الأعضاء الداخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كتلة من أجهزة بطني إلى المثانة السباحة بعناية. تجنب إتلاف الغدد التناسلية تعلق على المثانة السباحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الاتصال بين المثانة السباحة والجسم الأمامي. سحب المثانة السباحة بأكملها والأنسجة الغدد التناسلية بلطف. ملاحظة: في معظم الحالاتالصورة، أنسجة الغدد التناسلية في 17 DPF تحتوي المحيطة الأنسجة الطلائية وprotonephridium. لا ينفصلون بسهولة عن بعضها البعض، ولكن في 25 DPF يمكن فصلها بسهولة. توصيل الغدد التناسلية أيضا إلى فتحة الشرج. وهناك تقاطع مع الغدد التناسلية اليسار واليمين متصلة مع بعضها البعض في فتحة الشرج تكون مرئية بشكل واضح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملاقط لفصل بعناية أنسجة الغدد التناسلية من المثانة السباحة وتنظيف الأنسجة الدهنية المحيطة بها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على الفور نقل أنسجة الغدد التناسلية معزولة إلى prechilled 1.5 مل أنبوب الطرد المركزي التي تحتوي على حل 200 ميكرولتر رينغر. الحفاظ على أنبوب على الجليد حتى يتم فصل جميع أنسجة الغدد التناسلية من اليرقات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الغدد التناسلية من 25 يرقات DPF كما هو موضح في الخطوات 2،1-2،7. </li></ol> 3. بروتوكول 2: تحليل التعبير الجيني في أنسجة الغدد التناسلية المعزولة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخراج الحمض النووي الريبي مجموع من أنسجة الغدد التناسلية اليرقات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل أنسجة الغدد التناسلية معزولة إلى ريبونوكلياز خالية الجديد 1.5 مل أنبوب وإزالة حل رينغر. إضافة 100 ميكرولتر حل تحلل. وهي lysed دوامة حتى الأنسجة تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ الإجراء مجموع استخراج الحمض النووي الريبي وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10/01 حجم 10X الدناز أنا العازلة و 1 ميكرولتر من الدناز الأول لهذا الحل RNA وتخلط بلطف. احتضان لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10/01 حجم الدناز تعطيل كاشف إلى حل RNA. احتضان لمدة 10 دقيقة في 70 ° C. قياس تركيز الحمض النووي الريبي مجموع باستخدام مقياس الطيف الضوئي. تخزين في درجة حرارة -20 درجة مئوية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء التوليف [كدنا حبلا أولا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام بنسبة ضئيلة (DT) -linker التمهيدي لأداء أول حبلا التوليف [كدنا بعد بروتوكول تصنيع. إضافة 1-2 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي لإجمالي حجم رد الفعل إلى 20 ميكرولتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان محلول التفاعل لمدة 90 دقيقة في 45 ° C. إنهاء رد فعل عن طريق التسخين عند 70 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 ميكرولتر ريبونوكلياز H إلى [كدنا ذلكlution لإزالة RNA المتبقية. المزيج بلطف وأجهزة الطرد المركزي لمدة 10 ق في ~ 13000 ز س. احتضان لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية. إضافة 20 ميكرولتر المياه مجانا نوكلياز. تخزين في -70 ° C. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء الفلورسنت PCR الكمي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء QPCR على نظام cycler على مع صبغة الفلورسنت. استخدام الظروف الدراجات PCR التالية: 35 دورة في 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، TM-5 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، 68 درجة مئوية لمدة 30 ثانية. استخدام تسلسل التمهيدي على النحو التالي: AMH (إعادة توجيه: GTGGATGGCAGCAGTACGAC، مراجعة: GCGGAGAGGTGGAAGAGAGAATG)، cyp19a1a (إعادة توجيه: GTCCTGTTGTCTCCTACTGTCG، مراجعة: CATTTGAGTTGAATATGATGCCCTG)، nanos3 (إعادة توجيه: GCTCGGTGTACGCCAAATCAACAT، مراجعة: CCAAGTGAAAACACAACACCAGTGC)، الأوعية (إعادة توجيه: ATCGCATAGGAAGAACTGGACGCT، مراجعة: CCAAGTGAAAACACAACACCAGTGC) و β-الأكتين (إعادة توجيه: AGTGCGACGTGGACATCCGTA، مراجعة: GCACTTCCTGTGGACGATGGA) 19. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Wilson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wild+sex+in+zebrafish%3A+loss+of+the+natural+sex+determinant+in+domesticated+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Wild sex in zebrafish: loss of the natural sex determinant in domesticated strains.</a> Genetics. 198 (3), 1291-1308 (2014).</li>
<li>Liew, W. C., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+sex%3A+a+complicated+affair%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics%22%5BJournal%5D)">Zebrafish sex: a complicated affair.</a> Genomics. 13 (2), 172-187 (2014).</li>
<li>Orban, L., Sreenivasan, R., Olsson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+and+winding+roads%3A+Testis+differentiation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Long and winding roads: Testis differentiation in zebrafish.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 312 (1-2), 35-41 (2009).</li>
<li>Blaser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transition+from+non-motile+behaviour+to+directed+migration+during+early+PGC+development+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish.</a> J. Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).</li>
<li>Wang, X. G., Orban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-M%C3%BCllerian+hormone+and+11+%CE%B2-hydroxylase+show+reciprocal+expression+to+that+of+aromatase+in+the+transforming+gonad+of+zebrafish+males%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dynam%22%5BJournal%5D)">Anti-Müllerian hormone and 11 β-hydroxylase show reciprocal expression to that of aromatase in the transforming gonad of zebrafish males.</a> Dev. Dynam. 236 (5), 1329-1338 (2007).</li>
<li>Siegfried, K. R., Nüsslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ+line+control+of+female+sex+determination+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Germ line control of female sex determination in zebrafish.</a> Dev. Biol. 324 (2), 277-287 (2008).</li>
<li>Uchida, D., Yamashita, M., Kitano, T., Iguchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+apoptosis+during+the+transition+from+ovary-like+tissue+to+testes+during+sex+differentiation+of+juvenile+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Oocyte apoptosis during the transition from ovary-like tissue to testes during sex differentiation of juvenile zebrafish.</a> J. Exp. Biol. 205 (Pt 6), 711-718 (2002).</li>
<li>Groh, K. J., Schönenberger, R., Eggen, R. I. L., Segner, H., Suter, M. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+protein+expression+in+zebrafish+during+gonad+differentiation+by+targeted+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Gen.+Comp.+Endocr%22%5BJournal%5D)">Analysis of protein expression in zebrafish during gonad differentiation by targeted proteomics.</a> Gen. Comp. Endocr. 193, 210-220 (2013).</li>
<li>Siegfried, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+search+of+determinants%3A+gene+expression+during+gonadal+sex+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Fish+Biol%22%5BJournal%5D)">In search of determinants: gene expression during gonadal sex differentiation.</a> J. Fish Biol. 76 (8), 1879-1902 (2010).</li>
<li>Small, C. M., Carney, G. E., Mo, Q., Vannucci, M., Jones, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microarray+analysis+of+sex-+and+gonad-biased+gene+expression+in+the+zebrafish%3A+evidence+for+masculinization+of+the+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">A microarray analysis of sex- and gonad-biased gene expression in the zebrafish: evidence for masculinization of the transcriptome.</a> BMC Genomics. 10, 579(2009).</li>
<li>Chiang, E. F., Yan, Y. L., Guiguen, Y., Postlethwait, J., Chung, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11264405">Two Cyp19 (P450 aromatase) genes on duplicated zebrafish chromosomes are expressed in ovary or brain.</a> Mol. Biol. Evol. 18 (4), 542-550 (2001).</li>
<li>Kishida, M., Callard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+cytochrome+P450+aromatase+isoforms+in+zebrafish+%28Danio+rerio%29+brain+and+ovary+are+differentially+programmed+and+estrogen+regulated+during+early+development%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Distinct cytochrome P450 aromatase isoforms in zebrafish (Danio rerio) brain and ovary are differentially programmed and estrogen regulated during early development.</a> Endocrinology. 142 (2), 740-750 (2001).</li>
<li>Rodríguez-Marí, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+expression+pattern+of+zebrafish+anti-M%C3%BCllerian+hormone+%28amh%29+relative+to+sox9a%2C+sox9b%2C+and+cyp19a1a%2C+during+gonad+development%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Expr.Patterns%22%5BJournal%5D)">Characterization and expression pattern of zebrafish anti-Müllerian hormone (amh) relative to sox9a, sox9b, and cyp19a1a, during gonad development.</a> Gene Expr.Patterns. 5 (5), 655-667 (2005).</li>
<li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+a+vas%3A%3AEGFP+transgene+in+primordial+germ+cells+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Expression of a vas::EGFP transgene in primordial germ cells of the zebrafish.</a> Mech Dev. 116 (1-2), 141-150 (2002).</li>
<li>Krovel, A. V., Olsen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphic+expression+pattern+of+a+splice+variant+of+zebrafish+vasa+during+gonadal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphic expression pattern of a splice variant of zebrafish vasa during gonadal development.</a> Dev. Biol. 271 (1), 190-197 (2004).</li>
<li>Tzung, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+depletion+of+primordial+germ+cells+in+zebrafish+promotes+testis+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Early depletion of primordial germ cells in zebrafish promotes testis formation.</a> Stem Cell Reports. 4 (1), 61-73 (2015).</li>
<li>Hsiao, C., Tsai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+zebrafish+with+fluorescent+germ+cell%3A+a+useful+tool+to+visualize+germ+cell+proliferation+and+juvenile+hermaphroditism+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgenic zebrafish with fluorescent germ cell: a useful tool to visualize germ cell proliferation and juvenile hermaphroditism in vivo.</a> Dev. Biol. 262 (2), 313-323 (2003).</li>
<li>Jorgensen, A., Nielsen, J. E., Morthorst, J. E., Bjerregaard, P., Leffers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection+of+gonads+from+juvenile+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection of gonads from juvenile zebrafish.</a> Reprod Biol Endocrinol. 7, 97(2009).</li>
<li>Chen, S., Zhang, H., Wang, F., Zhang, W., Peng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((nr0b1+%28DAX1%29+mutation+in+zebrafish+causes+female-to-male+sex+reversal+through+abnormal+gonadal+proliferation+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">nr0b1 (DAX1) mutation in zebrafish causes female-to-male sex reversal through abnormal gonadal proliferation and differentiation.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 433, 105-116 (2016).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%3A+A+Guide+for+The+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The Zebrafish Book: A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio)</a>. , Eugene: University of Oregon Press. University of Oregon. (2000).</li>
<li>Liew, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polygenic+sex+determination+system+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Polygenic sex determination system in zebrafish.</a> PLoS One. 7 (4), e34397(2012).</li>
<li>Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+table+of+postembryonic+zebrafish+development%3A+staging+by+externally+visible+anatomy+of+the+living+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish.</a> Dev Dyn. 238 (12), 2975-3015 (2009).</li>
<li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+Organs+from+the+Adult+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of Organs from the Adult Zebrafish.</a> J. Vis Exp. (37), (2010).</li>
<li>Arnaout, R., Reischauer, S., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+Adult+Zebrafish+Hearts+for+High-throughput+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications.</a> J. Vis Exp. (94), (2014).</li>
<li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+the+Adult+Zebrafish+Kidney%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of the Adult Zebrafish Kidney.</a> J. Vis Exp. (54), (2011).</li>
<li>Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+vasa+homologue+RNA+is+localized+to+the+cleavage+planes+of+2-+and+4-cell-stage+embryos+and+is+expressed+in+the+primordial+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells.</a> Development. 124 (16), 3157-3165 (1997).</li>
<li>Braat, A. K., Speksnijder, J. E., Zivkovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ+line+development+in+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Germ line development in fishes.</a> Int. J. Dev. Biol. 43 (7), 745-760 (1999).</li>
<li>Huang, H. Y., Ketting, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+zebrafish+gonads+for+RNA+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of zebrafish gonads for RNA isolation.</a> Methods Mol Biol. 1093, 183-194 (2014).</li>
</ol>

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

أصبح الزرد نموذج قوي ويستخدم على نطاق واسع في مجال التنمية والبحوث المتعلقة بالمرض. وقد الطرق لعزل الأجهزة في الزرد الكبار مثل المخ والقلب والغدد التناسلية، والكلى، وموثقة جيدا 23 و 24 و 25. نظرا لصغر حجم وإعادة الديناميكية للأنسجة الغدد التناسلية في الزرد اليرقات، والعزلة من أنسجة الغدد التناسلية هي مهمة صعبة. الدراسات السابقة استخدمت كلها تشريح الأنسجة الجذع أو الأوعية المعدلة وراثيا: ا...

يتم فقدان المحدد الإناث رئيسيا في كروموسوم الزرد البرية 4 أو تعديلها في الزرد المستأنسة (أي سلالات مختبر المشتركة) 1. بدلا من ذلك، لديهم نظام تحديد الجنس عديدة الجينات يرافقه العوامل البيئية مثل درجة الحرارة ونقص الأكسجين، وتوافر الغذاء والكثافة السكانية. ليست مفهومة تماما آليات تفصيلية للتنمية الجنس الزرد. أسئلة أساسية مثل عندما يحدث تحديد الجنس الزرد، ما إشارة تحديد الجنس الابتدائية (ق) هو / هي، والجينات التي تنظم الخطوة الأولى من التحول الغدد التناسلية لا يزال يتعين الإجابة 2 و 3. في عملية التنمية الجنس الزرد، وقد تم الاعتراف عدة مراحل مهمة. في مرحلة مبكرة من التنمية، بدءا من 4 HPF (آخر ساعة الإخصاب) البدائية الجرثومية خلايا (بغتش) الخضوع لمواصفات، والهجرة إلى التلال الأعضاء التناسلية وتكاثر. أرقام PGC والتفاعلات المتبادلة بين الخلايا الجرثومية والخلايا الجسدية مهمة لالغدد التناسلية التمايز 4. في 13 DPF (أيام آخر الإخصاب)، والغدد التناسلية هي في مرحلة غير متمايزة. بنسبة 17 DPF، الغدد التناسلية تتطور إلى المبايض ثنائية محتملة في كل من الإناث والذكور في المستقبل. الانتقال التي تعتمد على الخلايا من المبيض إلى الخصية يبدأ في 21-25 DPF وقد يستمر لعدة أسابيع. بنسبة 35 DPF، وقد تم تحديد جنس الغدد التناسلية وإنتاج الأمشاج مصنفة حسب الجنس جار في كلا المبيضين والخصيتين 5 و 6 و 7. حتى الآن، وقد اقترحت الجينات وآليات تحديد الجنس مرشح متنوعة. وقد عزل البروتينات وتحليل transcriptomic العديد من الجينات مع التعبير ديمبرافيك جنسيا، وقد استخدمت هذه الجينات لدراسة التمايز بين الجنسين في الزرد 8، </sup&gt; 9 و 10. على سبيل المثال، في الزرد اليرقات، ويتم التعبير عن الجين cyp19a1a تحديدا في المبيض ولكن ليس في الخصية 11 و 12. وبالإضافة إلى ذلك، يتم التعبير عن الجينات AMH ضعيفة في خلايا بصيلات المحببة المبيض، ولكن بقوة في الخصية خلايا سيرتولي 13. في المقابل، أعرب الجينات الأوعية مستمر في الخلايا الجرثومية كل من الزرد الإناث والذكور، مما يجعل من الغدد التناسلية علامة مناسبة 14 و 15. بحثت العلاقة بين مستويات التعبير الجيني الغدد التناسلية أمر بالغ الأهمية لفهم الآلية الجزيئية لتحديد الجنس والتمايز خصوصا في مرحلة المبيض ثنائية إمكانيات 3 و 9. ومع ذلك، فإن صغر حجم الزرد اليرقات والغدد التناسلية صغيرة في المقابل تعقيد عزل gonadaالأنسجة ل لمزيد من التحليل الجزيئي. الدراسات السابقة المستخدمة تشريح منطقة الجذع بأكملها بين الغطاء الخيشومي والمسام الشرج 16. هذا التحضير، على الرغم من أن تحتوي على الغدد التناسلية، ويتكون من الأنسجة والأعضاء متعددة. بدلا من ذلك، والحيوانات المعدلة وراثيا مع التعبير GFP-الغدد التناسلية معين مثل الأوعية: استخدمت EGFP لعزل الأنسجة الغدد التناسلية عن طريق مضان خلية تنشيط الفرز (FACS) والقبض على الليزر الجزئي تشريح 17 و 18. لكن تطبيقها على نطاق واسع محدودة. هنا، نحن تصف إجراء بسيط لعزل الأنسجة الغدد التناسلية من الزرد اليرقات في 17 DPF و 25 DPF. نحن لشرح موقف الغدد التناسلية فيما يتعلق الأجهزة الأخرى وعزل الغدد التناسلية سليمة شكليا من الأنسجة المحيطة بها. علينا مواصلة تظهر الجينات الغدد التناسلية معين مثل الأوعية وcyp19a1a يتم التعبير عنها بشكل كبير في الغدد التناسلية معزولة مقارنة مع الأنسجة جذع من خلال PCR الكمي (QPCR) التحليل. يسمح هذا البروتوكول تحديد الهوية، والعزلة، وتنقية RNA والتضخيم من جينات معينة الغدد التناسلية من الزرد اليرقات، وبالتالي تمكين التحليل الجزيئي لاحق من أنسجة الغدد التناسلية (19).

<table><tbody><tr><td>طبق زراعة الخلايا 100 مم</td><td>430167 كورنينج</td><td></td><td>لحضانة الأجنة</td></tr><tr><td>20x EM</td><td></td><td></td><td>للحصول على 1 لتر مطلوب: أضف 17.5 جم كلوريد الصوديوم و 0.75 جم كلوريد كلوريد و 2.9 جم كلوريد الكالسيوم & # 183 ؛ 2ح2O; ثم أضف 0.41 جم KH2PO4 ، 0.412 جم Na2HPO4 اللامائي و 4.9 جم MgSO4&# 183 ؛ 7حاء2O.</td></tr><tr><td>1x EM</td><td></td><td></td><td>مخفف 20x EM في الماء المقطر</td></tr><tr><td>AGAROSE G-10</td><td>Gene</td><td>121985</td><td>لتحضير ألواح أجار 2٪</td></tr><tr><td>كاشف Trizol</td><td>Invitrogen</td><td>15596-026</td><td>لعزل الحمض النووي الريبي</td></tr><tr><td>عداد الزجاج</td><td>شين بو</td><td>250 مل</td><td>لتحضير ألواح أجار 2٪</td></tr><tr><td>فرن ميكروويف</td><td>ميديا</td><td>M1-211A</td><td>لتسخين AGAR</td></tr><tr><td>ملاقط DUMONT # 5INOX</td><td>أداة الدقة العالمية</td><td>500341</td><td>لتشريح</td></tr><tr><td>المجهر المجسم</td><td>Motic</td><td>SMZ168</td><td>لتشريح</td></tr><tr><td>معدات المياه النقية</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ringer ' محلول</td><td></td><td></td><td>s للحصول على 1 لتر مطلوبة: أضف 6.78 جم كلوريد الصوديوم ، 0.22 جم كلوريد كلوريد ، 0.26 جم كلوريد المكالس < > 2 < / فرعي > و 1.19 جم هيبيس ؛ ثم املأ إلى 1 لتر ؛ اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.2. تعقيم عن طريق الترشيح واحتفظ بها في حاوية من البولي كربونات شفافة معقمة.</td></tr><tr><td>نقل الماصة</td><td>Samco</td><td>202 ، 204</td><td></td></tr><tr><td>حمام معدني</td><td>QiLinbeier</td><td></td><td>نموذج GL-150</td></tr><tr><td>مجهر</td><td>Leica &nbsp ؛</td><td>M205 FA</td><td></td></tr><tr><td>لجهاز الطرد المركزي</td> للتصوير الضوئي <td>Eppendorf</td><td>5417R</td><td></td></tr><tr><td>طقم عزل الحمض النووي الريبي ذو المقياس</td><td>الصغير Ambion</td><td>AM1931</td><td>لعزل الحمض النووي الريبي من أنسجة الغدد التناسلية</td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Sigma</td><td>AMPD1-1KT</td><td>لهضم الحمض النووي في محلول الحمض النووي الريبي</td></tr><tr><td>RevertAid First Strand cDNA Synthesis</td><td>Kit Thermo Scientific</td><td>#K1631</td><td>لتخليق الحمض النووي (كدنا) الأول</td></tr><tr><td>Rnase H</td><td>Thermo Scientific</td><td>#EN0202</td><td>لهضم الحمض النووي الريبي المتبقي في محلول (كدنا</td></tr>).<tr><td>SYBR Green Realtime PCR Master Mix</td><td>TOYOBO</td><td>QPK-201</td><td>هذا المنتج عبارة عن مزيج رئيسي 2x قائم على البوليميراز DNA Taq ل PCR في الوقت الفعلي و &nbsp قابل للتطبيق على فحص الإقحام باستخدام SYBR Green I.</td></tr><tr><td>مقياس الطيف</td> الضوئي <td>Ne Drop</td><td>OD-2000 +</td> <td>قياس تركيز إجمالي الحمض النووي الريبي</td></tr><tr><td>Mastercycler</td><td>Eppendorf</td><td>AG 22331</td><td>توصيف التعبير الجيني</td> في هامبورغ</tr></tbody></table>

تشريح اليرقات الزرد الغدد التناسلية الأنسجة

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

وعلى الرغم من الزرد البرية امتلاك / ZW نظام تحديد الجنس ZZ، فقد الزرد المستأنسة كروموسوم الجنس. وهي تستخدم نظام تحديد الجنس عديدة الجينات، حيث وزعت عدة جينات في جميع أنحاء الجينوم تحدد بشكل جماعي هويات جنس الأسماك الفردية. حاليا، فإن الجينات المسؤولة عن تنظيم تطوير الغدد التناسلية وكيفية عملها يبقى بعيد المنال. عادة، عزل الأنسجة الغدد التناسلية هي الخطوة الأولى لدراسة العمليات التنموية الجنس. هنا، نقدم إجراء لعزل الأنسجة الغدد التناسلية من 17 DPF (أيام آخر الإخصاب) و 25 يرقات DPF الزرد. الأنسجة الغدد التناسلية معزولة ويمكن الاطلاع في وقت لاحق من قبل التشكل والتعبير الجيني التنميط.

تم إجراء تشريح الغدد التناسلية على أب سترين الزرد اليرقات. ويبين الشكل 1 أنسجة الغدد التناسلية نموذجية من الزرد اليرقات في 17 DPF و 25 DPF. أولا، يتم قطع الجلد والعضلات من جانب واحد من البطن لكشف الأعضاء الداخلية. بعد إزالة كتلة من الأعضاء الداخلية، والمثانة السباحة جنبا إلى جنب مع الغدد التناسلية تبقى في الجذع. كان يعلق على الغدد التناسلية إلى الجانب البطني من المثانة السباحة (السهم في الشكل <stro...

هنا، نقدم بروتوكول لعزل الأنسجة الغدد التناسلية من الزرد اليرقات، التي من شأنها تسهيل التحقيقات في التفرقة بين جنس الزرد والصيانة.

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل الأنسجة الغدية من يرقات zebrafish وتحليل الخصائص الجزيئية للأنسجة المعزولة. يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال التطور الجنسي لأسماك zebrafish، مثل الحفظ التطوري للجينات في تنظيم تطور الغدد التناسلية والأسس الجزيئية للتطور الجنسي لدى zebrafish. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي إمكانية تشريح الأنسجة الغدية من يرقات zebrafish في وقت مبكر يصل إلى 17 يوماً بعد الإخصاب لدراسة الحالة الخلوية والبيولوجيا الجزيئية.بشكل عام، سيواجه الأشخاص المبتدئون في هذه الطريقة صعوبة بسبب الحجم الصغير وإعادة التشكيل الديناميكي للأنسجة التناسلية في يرقات سمك الزيبرفيش. للتحضير لتشريح المناسل، انقل ذكرين وأنثيين بالغين من سمك الزيبرفيش إلى كل جانب من حوض تزاوج مقسم. وفي صباح اليوم التالي، قم بتجديد مياه الحوض وإزالة الحاجز لبدء عملية التزاوج.بعد ساعة إلى ساعتين من الإخصاب، اجمع وانقل حوالي أربعين بيضة إلى طبق سعة 100 مليمتر يحتوي على 40 مليلتر من وسط الأجنة، أو EM. حضّن الأجنة عند درجة حرارة 28.5 درجة مئوية لمدة أربعة أيام، مع تجديد الـ EM مرتين يومياً. بعد انتهاء فترة التحضين، انقل اليرقات إلى خزانات سعة لتر واحد. بعد مرور خمسة أيام على الإخصاب، أو DPF، قم بتغذية الأسماك على الدوارات الحية.عندما تصل اليرقات إلى 10 DPF، قم بتغذية الأسماك على روبيان الملاح الحي. ثم، عند 14 DPF، انقل الأسماك إلى نظام مياه إعادة تدوير. قم بتربية يرقات سمك الزبرا حتى 17 أو 25 DPF.ثم قم بقياس طول جسم اليرقات عند اليوم 17 و25 بعد الإخصاب (DPF). قم بتحضير أطباق آجار بتركيز 2% للتشريح عن طريق إضافة 4 جرام من الآجار إلى 200 ملليلتر من الماء المعقم. سخّن الخليط في الميكروويف حتى يصبح شفافاً.برد الآجار لمدة 15 دقيقة، ثم صبه في أطباق بتري بقطر 60 مليمتر. تُخزن أطباق الآجار المتصلبة عند درجة حرارة 4 °C. ولتخدير اليرقات في اليوم 17 من مرحلة ما بعد الإخصاب (DPF)، أضف الثلج المجروش إلى الحوض.انقل اليرقات التي خضعت للتخدير إلى طبق بتري مبرد بقطر 100 millimeter يحتوي على 30 milliliters من محلول Ringer's البارد. قم بتحضين الأسماك في محلول Ringer's المبرد لمدة 15 minutes على الأقل لضمان تخدير اليرقات بشكل كامل. وباستخدام ملعقة بلاستيكية، انقل اليرقات إلى طبق آغار مبرد مسبقاً.اغمر جسم السمكة بالكامل في عشرة ملليلترات من محلول رينجر (Ringer's Solution) المبرد، وضعها برفق على جانبها. وباستخدام المجهر التشريحي (stereomicroscope)، وبقوة تكبير 25x، استخدم ملقطاً لتثبيت جذع السمكة. بعد ذلك، وباستخدام زوج آخر من الملاقط، قم بشق البطن طولياً من فتحة الشرج وصولاً إلى القلب.بعد ذلك، قم بإزالة الجلد والعضلات من أحد جانبي الجسم برفق للكشف عن الأعضاء الداخلية. ثم، قم بإزالة الأعضاء الضخمة الموجودة في الناحية البطنية من مثانة العوم بعناية. تجنب إتلاف الغدة التناسلية الملتصقة بمثانة العوم.اقطع الاتصال بين مثانة العوم وتجويف الجسم. بعد ذلك، اسحب مثانة العوم بأكملها والأنسجة التناسلية بعناية. باستخدام الملقط، افصل الأنسجة التناسلية عن مثانة العوم بحذر.وقم بتنظيف الأنسجة الدهنية المحيطة. انقل فوراً أنسجة المناسل المعزولة إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 milliliters مبرد مسبقاً، يحتوي على 200 microliters من محلول رينجر (Ringer's Solution). احتفظ بالأنبوب على الثلج حتى يتم فصل جميع أنسجة المناسل عن اليرقات.لاستخلاص الحمض النووي الريبي (RNA) الكلي من أنسجة الغدد التناسلية اليرقية، انقل الغدد التناسلية المعزولة إلى أنبوب جديد سعة 1.5 milliliter خالٍ من إنزيم RNase وأزل محلول رينجر (Ringer's Solution). ثم، أضف 100 microliters من محلول التحلل. وقم برج الأنبوب بواسطة جهاز الـ vortex حتى تتحلل الأنسجة تماماً.بعد إجراء استخلاص الحمض النووي الريبي (RNA) الكلي، وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة، أضف عُشر حجم محلول DNase I buffer، وميكروليتر واحد من DNase I إلى محلول RNA، وامزج محتويات الأنبوب برفق. قم بتحضين العينة عند 37 °C لمدة 20 دقيقة. بعد ذلك، أضف عُشر حجم كاشف تثبيط DNase إلى محلول RNA.قم بحضن العينة عند 70 درجة Celsius لمدة عشر دقائق. بعد ذلك، استخدم مطياف الامتصاص الذري (spectrophotometer) لقياس تركيز الـ RNA الكلي. ولإجراء تخليق الشريط الأول من الـ cDNA، استخدم بادئ oligo-dT linker و 1 إلى 2 micrograms من الـ RNA، وذلك وفقاً لبروتوكول الشركة المصنعة.قم بحضن التفاعل عند 45 °C لمدة 90 دقيقة. بعد ذلك، أوقف التفاعل عن طريق تسخين العينة عند 70 °C لمدة خمس دقائق. أضف 1 µL من RNase H إلى محلول cDNA لإزالة RNA المتبقي.امزج محتويات الأنبوب بلطف ثم قم بطرد العينة مركزياً عند 13,000 ×g تقريباً لمدة عشر ثوانٍ. حضن الأنبوب عند 37 °C لمدة 20 دقيقة. بعد ذلك، أضف 20 µL من الماء الخالي من النيوكلياز إلى العينة.يُخزن الـ cDNA عند درجة حرارة 70- درجة مئوية. وأخيراً، يُستخدم صبغ فلوري لإجراء QCPR وفقاً للشروط والبادئات المذكورة في البروتوكول المكتوب. يوضح هذا الشكل نسيجاً غدياً نموذجياً ليرقات zebrafish في اليوم 17 بعد الإخصاب (17 DPF).تكون الغدد التناسلية متصلة بالجانب البطني لمثانة العوم، كما هو موضح هنا. عند اليوم 17 بعد الإخصاب (17 DPF)، تحتوي اليرقات على الغدد التناسلية اليمنى واليسرى، والتي تكون شفافة. وفي معظم الحالات، تكون الغدد التناسلية محاطة بأنسجة ظهارية وكلية أولية.في اليوم 25 بعد الإخصاب (DPF)، غالبًا ما تكون الغدة التناسلية محاطة بنسيج دهني، ويمكن ملاحظة غدد تناسلية كبيرة أو صغيرة. وأخيرًا، لتحليل الخصائص الجزيئية لنسيج الغدة التناسلية المعزول، تم فحص مستويات تعبير المؤشرات التناسلية amh وcyp19a1a وnanos3 وvasa عن طريق تقنية QPCR. وتظهر النتائج زيادات ملحوظة في الجينات المؤشرة في نسيج الغدة التناسلية مقارنة بالنسيج الضابط.بمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن إنجازها في غضون ساعة واحدة إذا نُفذت بشكل صحيح. وأثناء محاولة تطبيق هذا الإجراء، من المهم تذكر توفير ظروف تربية ثابتة ليرقات zebrafish، حيث يعد ذلك أمراً بالغ الأهمية للحصول على النتائج المتوقعة. وبعد تطويرها، مهدت هذه التقنية الطريق للأبحاث في مجال التطور الجنسي لاستكشاف آليات تحديد الجنس في zebra fish.بعد مشاهدة هذا الفيديو، سيكون لديك فهم جيد لكيفية عزل الأنسجة التناسلية من يرقات سمك الزيبرا.

dissection-of-larval-zebrafish-gonadal-tissue

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

يصف هذا البروتوكول إجراء تشريح لتحديد وأعضاء من الزرد الكبار.

تشريح هيئات من اسماك الزرد الكبار

توضح هذه المقالة نهج لشبكية العين microdissect الزرد مع وبدون صباغ الشبكية ظهارة المرفقة ، 1-3 أجنة postfertilization يوما.

Microdissection من الأنسجة الجنينية العين اسماك الزرد

ووصف واضح وطريقة موحدة للتشريح والعزلة من القلب الزرد في مراحل تنموية متعددة. وتناقش أيضا الشرح وتقدير التقنيات.

تشريح القلب في اليرقات ، اسماك الزرد الأحداث والكبار ، دانيو rerio</em

نقدم طريقة مبتكرة للتغذية القسرية الدقيقة (microgavage) ليرقات سمك الزيبرا باستخدام معدات الحقن المجهري للأجنة والمجاهر الستيريوسكوبية القياسية. ونبين أن التغذية القسرية الدقيقة هي تقنية آمنة وفعالة ومفيدة لإيصال كميات محددة من مواد متنوعة بشكل خاص إلى التجويف المعوي ليرقات سمك الزيبرا.

Microgavage من يرقات اسماك الزرد

بعد transection الشوكي، الزرد الكبار يكون الانتعاش وظيفية لمدة ستة أسابيع بعد الإصابة. للاستفادة من الشفافية اليرقات والانتعاش بشكل أسرع، ونحن نقدم وسيلة لtransecting الحبل الشوكي اليرقات. بعد transection، نلاحظ الانتعاش الحسية ابتداء من الساعة 2 أيام بعد الإصابة، وحركة C-منحنى قبل 3 أيام بعد الإصابة.

Transection الحبل الشوكي في اليرقات الزرد

وهنا، فإننا نقدم مجموعة موحدة من البروتوكولات لمراقبة ناصف العين متفوقة، بنية حددت مؤخرا، وحفظت تقحم في عين الفقاريات. استخدام اليرقات الزرد، علينا أن نظهر التقنيات اللازمة لتحديد العوامل التي تسهم في تشكيل وإغلاق ناصف العين متفوقة.

التصور "ناصف العين العليا" خلال Embryogenesis ريريو دانيو

هنا ، نقدم بروتوكول تشريح مطلوب لتصوير الغدد التناسلية الذكرية ذبابة الفاكهة الجنينية المتأخرة . سيسمح هذا البروتوكول بمراقبة العمليات الخلوية الديناميكية في ظل الظروف العادية أو بعد التلاعب المعدل وراثيا أو الدوائي.

تشريح وتصوير حي للغدد التناسلية ذبابة الفاكهة الجنينية المتأخرة

يصف هذا البروتوكول إجراء إزالة الفص البطني للكبد في سمك الحمار الوحشي البالغ لتمكين دراسة تجديد الكبد.

استئصال الهيباتيك الجزئي في سمك الحمار الوحشي البالغ

يشرح المقال كيفية إزالة العينين جراحيا من يرقات الزرد الحية كخطوة أولى نحو التحقيق في كيفية تأثير مدخلات الشبكية على نمو التكتوم البصري وتطوره. بالإضافة إلى ذلك ، توفر المقالة معلومات حول تخدير اليرقات وتثبيتها وتشريح الدماغ ، تليها الكيمياء النسيجية المناعية والتصوير البؤري.

إزالة العين في يرقات الزرد الحية لفحص النمو والتطور المعتمد على التعصيب للنظام البصري

هذه طريقة شائعة الاستخدام لتشريح الغدد التناسلية C. elegans متبوعة بصدع التجميد ، والذي ينتج عينات من الخط الجرثومي للتألق المناعي عن طريق تلطيخ الأجسام المضادة ، أو لتلطيخ DAPI البسيط لتصور الحمض النووي. كان هذا البروتوكول ناجحا للطلاب الجامعيين في مختبر الأبحاث وفي تجربة بحثية جامعية قائمة على الدورة التدريبية.

جيم ايليجانس تشريح الغدد التناسلية وتجميد الكراك للتألق المناعي وتلطيخ DAPI

هنا ، نصف طريقة لعزل الأمعاء من يرقات الزرد في 5 أيام بعد الإخصاب ، لتحليل تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية.

عزل الأمعاء من يرقات الزرد لتسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية

تعلم تشريح الأنسجة التناسلية من يرقات سمك الزرد لدراسة التمايز الجنسي على المستوى الجزيئي. يتيح هذا البروتوكول عزل الأنسجة من عمر 17 يومًا بعد الإخصاب لتحليل الخصائص الخلوية والجزيئية.

تشريح اليرقات الزرد الغدد التناسلية الأنسجة

استكشف المزيد من الفيديوهات