متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

مختبرنا طريقة التصوير العضلي السلكي لقياس انقباض العضلات الملساء الوعائية لسنوات عديدة. نستخدم هذه التقنية لدراسة آلية تقلص العضلات الملساء. نستخدم هذه الطريقة لاستكشاف أدوية جديدة لعلاج ارتفاع ضغط الدم.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن جزء الوعاء على قيد الحياة بعد أربع ساعات على الأقل من التركيب ويحافظ على الانقباض الناجم عن ارتفاع البوتاسيوم لعدة مرات. يوفر النظام متعدد القنوات الفرصة للفحص عالي العلاج للأدوية الجديدة. قم بتثبيت جسم الفأر القتل الرحيم مع توجيه بطنه لأعلى وبلل البطن بنسبة 70٪ من الإيثانول.

ثم ، بعد استخدام المقص لقطع الجلد على طول خط الوسط البطني من الفخذ ، قم بعمل شقوق أسفل كل ساق من بداية الشق الأول. اسحب الجلد للخلف على كلا الجانبين ، ثم قم بعمل شقوق مماثلة لفتح الصفاق. بعد ذلك ، استخدم المقص لقطع المريء والقولون والأنسجة الضامة الأخرى لعزل الجهاز الهضمي تماما بتغذية الأوعية الدموية من الجسم.

بعد شطف الدم من الجهاز الهضمي باستخدام محلول HEPES-Tyrode أو H-T ، انقل الجزء المعزول إلى طبق بتري مغلف لتشريح الشريان المساريقي في درجة حرارة الغرفة. قم بتنعيم المعدة والصائم والدقاق والأعص في اتجاه عقارب الساعة وقم بتثبيت المعدة والأعص على الجانب الأيسر والأيمن على التوالي. قم بتشغيل مصدر ضوء الإرسال في المجهر المجسم وقم بتثبيت الأمعاء بدبابيس لكشف الشرايين المساريقية التشريح.

ثم قم بتثبيت الأنسجة الدهنية حول الشرايين بالملقط وعزل الشرايين بعناية عن طريق قطع جميع الأنسجة الضامة بمقص التشريح. أمسك الشريان الزائد بالملقط وانقل شجرة الشريان المساريقي واغمرها في محلول H-T البارد الخالي من أيونات الكالسيوم. اقطع جزءا مقاس 1.4 ملم من الشريان القريب من جدار الأمعاء في الممر المساريقي واستخدم ملقطين لفتح جانبي هذا الجزء من الشريان بعناية.

قم بإعداد جزأين من أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ بطول 2.5 سم ووضعهما في نفس الطبق. استخدم الملقط لتثبيت أحد طرفي الشريان برفق. ثم استخدم ملقطا آخر لإدخال سلكين بعناية في تجويف الشريان واحدا تلو الآخر.

تأكد من أن الأسلاك تبقى مستقيمة ولا تلمس البطانة. باستخدام ملقطين ، قم بتثبيت كلا السلكين خارج الوعاء الملولب في وقت واحد وانقل الوعاء بعناية من طبق بتري إلى غرفة التصوير العضلي مملوءة بمحلول H-T. قم بربط فكي الغرفة بعيدا لإفساح المجال للتركيب ، ثم أمسك جانبي أحد السلكين المدخلين باستخدام ملقطين وضع الوعاء في فجوة الفك.

لف جانبي السلك المثبت حول مسامير الفك المتصلة بالميكرومتر. قم بإصلاح المسمار الأيسر عن طريق التواء في اتجاه عقارب الساعة. ثم استخدم الملقط لتصويب السلك.

بعد ذلك ، قم بإصلاح المسمار الأيمن عن طريق التواء في اتجاه عقارب الساعة. تأكد من أن الوعاء دائما داخل فجوة الفك ولكن لا تلمس الفك لتجنب التلف. أغلق الفكين باستخدام الميكرومتر.

تأكد من أن الفكين قريبان بدرجة كافية ولكنهما لا يلمسان بعضهما البعض ، وأن السلك غير المثبت موجود فوق السلك الثابت. باستخدام الملقط الأيمن ، قم بطي السلك غير اللولبي بعناية في زاوية الفك المتصل بمحول القوة ولفه في اتجاه عقارب الساعة حول المسمار الأيمن. ثم قم بإصلاح المسمار.

كرر فتح ولف الجانب الأيسر من السلك وقم بتثبيت المسمار الأيسر. بعد ذلك ، حرك الفكين بعيدا قليلا دون تمديد الوعاء عن طريق تدوير الميكرومتر بعناية بحيث يمكن للفجوة بين الفكين استيعاب السلكين فقط. ثم استخدم الملقط لتحريك السلك على جانب الميكرومتر إلى المستوى الأفقي للسلك في جانب محول الطاقة.

بعد تركيب الشرايين في الغرف الأخرى ، قم بتوصيل جميع الغرف بالمعدات وتغطية الغرف. قم بتوصيل مصدر الأكسجين بنسبة 100٪ ومسبار درجة الحرارة وابدأ في التسخين إلى 37 درجة مئوية. افتح برنامج الرسوم البيانية.

اضغط على زر البدء لبدء التسجيل. حدد قناة الاهتمام من قائمة DMT لفتح نافذة تسوية DMT للقناة المقابلة. أدخل القيم الثابتة التالية في النافذة:نقاط نهاية الأنسجة a1 ، 0.1 ؛ نقاط نهاية الأنسجة أ2 ، 4 ؛ قطر السلك ، 40.

ثم تعرض النافذة طول الوعاء المحسوب على أنه 1.40 ملم. اقرأ ميكرومتر غرفة الأنسجة المناسبة. أدخل القيمة في مربع قراءة الميكرومتر وانقر فوق الزر "إضافة نقطة".

هذه القيمة هي القيمة الأولية ل X.بعد تأخير لمدة 60 ثانية ، تعرض النافذة القوة والضغط الفعال المقابل لقيمة الميكرومتر هذه. في الوقت نفسه ، يصبح صندوق قراءة الميكرومتر نشطا. قم بتمديد الوعاء الذي يتم تطبيعه عن طريق تدوير الميكرومتر في عكس اتجاه عقارب الساعة.

أدخل قيمة الميكرومتر في مربع قراءة الميكرومتر وانقر فوق الزر "إضافة نقطة". انتظر وقت تأخير قدره 60 ثانية مرة أخرى. استمر في تمديد الوعاء وإضافة قيم ميكرومتر حتى تعرض النافذة قيمة الميكرومتر X-one ، وهو إعداد الميكرومتر المحسوب المطلوب لتمديد الوعاء إلى IC-one.

اضبط الميكرومتر على قيمة X-one. بعد التطبيع ، قم بموازنة الوعاء في الغرفة لمدة 15 إلى 20 دقيقة. بمجرد التوازن ، تحدي الوعاء بمحلول عالي البوتاسيوم عن طريق استبدال محلول H-T ب 5 مل من محلول عالي البوتاسيوم للحث على الانكماش لمدة 10 دقائق.

بعد تكرار الحضانة لمدة 10 دقائق في محلول طازج عالي البوتاسيوم ، اغسلها بخمسة ملليلتر من محلول H-T ثلاث إلى أربع مرات. مرة أخرى ، تحدى الوعاء بخمسة ملليلتر من محلول عالي البوتاسيوم للحث على الانكماش. بعد خمس دقائق ، أضف 0.5 ميكرولتر من محلول مخزون Neoliensinine إلى الغرفة لإرخاء الوعاء بتركيز نهائي من ميكرومولار واحد Neoliensinine.

عندما تكون القوة مستقرة بعد عدة دقائق ، أضف 0.5 ميكرولتر آخر من محلول مخزون Neoliensinine لزيادة التركيز إلى اثنين من الضرس الصغير. أضف ميكرولتر واحدا من محلول المخزون في كل مرة لزيادة التركيز إلى أربعة وستة وثمانية و 10 ميكرومولار لتوليد منحنى استجابة الجرعة. أثناء إجراء التطبيع ، تم شد السفينة عدة مرات حتى وصلت إلى قيمة IC-100 وتضمنت كل دورة ممتدة انكماشا قويا واسترخاء سريعا وصيانة للقوة في 60 ثانية.

ما أظهر تقلص العضلات الملاءة الوعائية الناجم عن محلول عالي البوتاسيوم مرحلتين ، مرحلة قوية ومرحلة مستدامة. وصفنا طريقة لقياس الانقباض متساوي القياس للشريان المساريقي للفأر باستخدام نظام عضلي متعدد الأسلاك. يمكن استخدام هذه الطريقة لتقييم وظائف العضلات الملساء الوعائية وفحص مرخيات العضلات الملساء.

يكمن الاختلاف الرئيسي بين هذه الطريقة وغيرها في خطوات التثبيت. هذه الخطوة المستخدمة هنا سهلة التنفيذ ولا تلحق الضرر بالأنسجة أو الجهاز. بعد هذا الإجراء ، يمكن أيضا استخدام محفزات أخرى مثل EP و Angiotensin II لتحفيز تقلص العضلات الملساء من أجل العثور على بعض الأدوية الجديدة الحساسة لهذا الناهض.