برنامج التشريح الشامل للأفراد الذين يعانون من التصلب المتعدد

الهدف من بحثنا هو دراسة التسبب في التصلب المتعدد. لتحقيق هذا الهدف أنشأنا برنامج تشريح سريع للحصول على ودراسة العقول من الأفراد المصابين بالتصلز المتعدد. هناك جانبان خاصان لبرنامج التشريح، الأول هو أنه سريع. نجمع الدماغ أقل من ست إلى ثمان ساعات من الموت

وهذا يسمح للدولة من الدراسات الجزيئية الفن. الجانب الثاني هو أن نقوم التصوير بالرنين المغناطيسي في الموقع قبل أن نتحرك الدماغ. وهذا يسمح لنا بربط التغيرات المرضية مع تغيرات تصوير الدماغ.

يسمح العرض التوضيحي المرئي للمشاهدين بفهم كيفية تنظيمنا لفضائنا ووقتنا لتحقيق أفضل النتائج. معالجة الأنسجة التي تحدث بسرعة وبعناية يسمح لتحليل الحمض النووي الريبي، والمناعة، المناعية وR MRI الارتباطات. قد يعاني باحثون جدد من معالجة الأنسجة مع ضعف سلامة الأنسجة.

تجنب أوقات التثبيت بعد الوفاة طويلة من المهم وMTRI أنسجة الحبل يمكن أن يكون تحديا حتى التشاور مع خبراء تحليل التصوير بالرنين المغناطيسي يمكن أن تكون مفيدة جدا. وسيكون من بين البرهان على الإجراء إميلي كريستي وكريسينا فولسكو. فنيون من مختبرنا

بعد التصوير بالرنين المغناطيسي في الموقع، وزن وتصوير الدماغ ووضع أي dura المرفقة في حاوية من 4٪ Paraformaldehyde أو PFA. فصل المخيخ و الدماغ من المخ وتصوير المخ. استخدام مسبار لفصل الأعصاب البصرية، شيازم ومساحات وإعادة تركيب الهيكل مع مشرط.

فصل نصفي الكرة الدماغية طوليا وتصوير كل نصف الكرة الأرضية على حدة. قم بحبر قشرة المحركات الأولية أو PMC لنصف الكرة الأيسر، و rephotograph الأنسجة ووضع الأنسجة في حاوية سعة 3.3 لتر لتثبيتها لفترة طويلة. لإخراج PMC لنصف الكرة الأيمن إزالة السحايا تغطي و rephotograph الأنسجة.

بعد ذلك استرجع PMC باستخدام مشرط. ثم تصوير PMC مُجَرَّحَ بجانب نصف الكرة الأرضية. قطع PMC إلى ستة أقسام متساوية الحجم والحبر الجانب من كل قسم.

ثم ضع كل قسم آخر في حاويات مملوءة PFA لتثبيت قصيرة. وتجمّد المفاجئة الأقسام المتبقية للتخزين في أكياس التجميد المختومة، في برودة رقم واحد. قطع نصف الكرة الأيمن الأمامي إلى الخلفي في المقاطع التاجية سمتمتر واحد.

إصلاح كل قسم آخر في PFA المفاجئة وتجميد المقاطع المتبقية للتخزين في أكياس التجميد مختومة، في برودة رقم واحد. فصل الدماغ من المخيخ ووضع الدماغ في حاوية مملوءة PFA لتثبيت قصيرة. قطع كل نصف نصف الأرض cerebellar إلى أربعة أقسام القوس ثابتة على قدم المساواة وتصوير وجهات النظر الوسيطة والاتية.

ثم ضع شرائح نصف الكرة الأرضية اليسرى في حاوية PFA لتثبيت قصيرة. و المفاجئة تجميد شرائح نصف الكرة الأرضية اليمنى للتخزين في أكياس الفريزر مختومة، في برودة رقم واحد. بعد الحصول على الحبل الشوكي مع جذور الأعصاب إزالة الحبل الشوكي dura ماطر وتخزين دورا في PFA.

فصل الجذور العصبية الأمامية والأيسر والأيسر والخلفية وقطع الجذور العصبية الأمامية والخلفية من الحبل الشوكي لتثبيت قصيرة في PFA. قطع الجذور العصبية الأمامية والخلفية اليمنى من وتر العمود الفقري و المفاجئة تجميد هذه الأنسجة للتخزين في أكياس التجميد مختومة، في برودة رقم اثنين. ثم تصوير معظم caudal-20 سنتيمتر من الحبل الشوكي وقطع قسمين نقل سنتيمتر من الاتجاه السدي إلى التروسل للحبل لتثبيت PFA القصير والتجميد المفاجئ.

ثم تصوير الجزء المتبقي من الحبل الشوكي. وقطع اثنين من المقاطع سنتيمتر نقل من السد إلى الاتجاه الرسترالي من الحبل لتثبيت PFA قصيرة والتجميد المفاجئة. قطع أقسام من الفائدة من الأنسجة الثابتة قصيرة أو طويلة.

وضع المقاطع في آبار فردية من لوحة ستة بئر وغسل الأنسجة مع ثلاثة يغسل خمس دقائق في ملليلتر اثنين من برنامج تلفزيوني الطازجة لكل غسل، مع اهتزاز. لاسترجاع المستضد، الميكروويف المقاطع لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق في كوب زجاجي يحتوي على ما يقرب من 30 ملليلتر من 10 ملليمولار سيترات العازلة. عندما تكون أقسام قد بردت إلى درجة حرارة الغرفة نقل العينات إلى لوحة جديدة ستة بئر لمدة ثلاث خمس غسلات دقيقة واثنين من ملليلتر من برنامج تلفزيوني، بالإضافة إلى 0.3٪ تريتون X-100 في البئر، في غسل.

تليها بسد البيروكسيديز الذاتية في مليلترين من بيروكسيد الهيدروجين 3٪ بالإضافة إلى 0.3٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة، في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، وغسل أقسام ثلاث مرات في مليلتر اثنين من برنامج تلفزيوني بالإضافة إلى تريتون X-100 لكل غسل، كما هو موضح. تليها حجب في مليلترين من مصل الماعز العادي 3٪ وبرنامج تلفزيوني زائد تريتون X-100 لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.

بعد ذلك ، احتضان الأقسام من بين عشية وضحاها إلى خمسة أيام في الأجسام المضادة الأولية ذات الاهتمام عند أربع درجات مئوية تليها ثلاث يغسل لمدة خمس دقائق في ملليلترين من PBS لكل غسل. احتضان الأقسام في حل افيدين البيوتين المعقدة أو مجمع ABC لمدة ساعة واحدة ، في درجة حرارة الغرفة. متابعة هذا الأمر مع ثلاثة خمس دقائق يغسل في برنامج تلفزيوني.

تسمية المقاطع مع مليلتر اثنين من تصفية Diaminobenzidine تكملها بيروكسيد الهيدروجين في بئر لمدة ثلاث إلى ثماني دقائق. عندما يكون اللون قد وضعت بشكل كاف، وغسل أقسام ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني ونقل كل قسم بشكل فردي إلى حاوية تعبئة برنامج تلفزيوني. ضع كل قسم بشكل مسطح، تحت شرائح الأنسجة الفردية.

ورفع بلطف كل شريحة من برنامج تلفزيوني، والحفاظ على المقاطع شقة قدر الإمكان. استخدام اثنين من فرش الطلاء لتسطيح بلطف وتمتد كل الأنسجة. واستخدام منشفة ورقية لداب بعيدا المياه الزائدة.

ثم قم بتركيب المقاطع مع وسيلة مناسبة التركيب وختم كل زلة الغطاء مع طلاء الأظافر واضحة. يتم فحص أقسام الأنسجة لوجود آفات المادة البيضاء والمناطق المختارة ملطخة للنشاط المناعي وإزالة الغموض. في الآفات Sceloris متعددة الحادة العديد من هذه المحاور إزالة الغموض بمثابة المصابيح التراجع المحوري التي تعكس نهايات قريبة من المحاور المحن.

كثافة المحاور المورثة في الآفات الحادة تتجاوز 11000 لكل ملليمتر مكعب في الآفات النشطة مقارنة فقط 15 في المناطق المجاورة غير الآفات البيضاء. oligodendrocytes ولدت حديثا موجودة أيضا في العديد من الآفات MS المزمنة. هذه العمليات المنتسبين مع ولكن لا المائلية المحي والمحاور.

ممثل, بحث غير متحيزة عن التغيرات الجينية العصبية في القشرة الحركية المجمدة بسرعة التي تم الحصول عليها من مرضى التصلب المتعدد المزمن, حددت تخفيضات كبيرة في 23 النووية ومدونة الميتوكوندريا رسول RNA دراسات الاعتماد باستخدام الكيمياء المناعية والتهجين في الموقع أشار إلى أن هذه الجينات كانت غنية للغاية في الخلايا العصبية الإسقاط القشرية وأن الميتوكوندريا معزولة عن عرض axons عرض انخفاض الجلي. المقارنة بين التعبير الجيني العصبي في فرس النهر النخاعي وإزالة الغموض يكشف عن تخفيضات في العصبية رسول RNA بما في ذلك البروتينات المشاركة في الذاكرة والتعلم. وعلاوة على ذلك، بالمقارنة مع القشريات السيطرة، فقدان الخلايا العصبية القشرية هو أكبر بكثير في السكان الفرعية لمرضى التصلب المتعدد التي لديها إزالة الغموض من الحبل الشوكي والقشرة الدماغية ولكن ليس من المادة البيضاء الدماغية.

أثناء معالجة الأنسجة ، تأكد من أنه عندما يتم قطع الأجزاء التاجية يتم قطعها باستمرار فيما يتعلق بسمكة وتوجه. وأنها تقع شقة عندما تطفو في تثبيت أو عندما المجمدة. بالإضافة إلى التحليل المناعي الهيستوكيميائي، فإن جمع الأنسجة المجمدة يوفر لنا الفرصة لإجراء التحليل الجيني والبروتيومي.

وقد ساعدت هذه التقنيات في تحديد مجموعة جديدة من مرضى التصلب المتعدد الذين يعانون من آفات المادة البيضاء الدماغية على التصوير بالرنين المغناطيسي ولكن من دون أي إزالة الغموض المادة البيضاء الهامة. يطلق عليه Myelocortical MS.