نموذج حرق الفئران لدراسة الحروق الحرارية الجلدية كاملة السماكة والعدوى

نموذج إصابة الحروق هذا قادر على تلخيص الحالات السريرية التي لوحظت في مرضى الحروق في المستشفى بعد إصابات الحروق مثل عدم التنظيم المناعي والالتهابات البكتيرية. هذه الطريقة لإحداث الحرق في الفئران سهلة التعلم ويمكن استخدامها لتطوير وتقييم الأدوية الاستوائية الجديدة لجروح الحروق والالتهابات. يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم التئام الجروح وكذلك تطور العدوى البكتيرية في موقع الحرق.

يمكن أيضا استخدام طريقة تحريض الحرق هذه في الفئران والنماذج الحيوانية الأخرى لتحريض الحروق ودراسة العدوى البكتيرية لجروح الحروق. ابدأ في تحضير الجرذ المخدر لإصابة الحروق عن طريق تحريكه فوق وسادة التدفئة في وضعية الانبطاح. باستخدام أداة تطبيق ذات رأس قطني ، ضعي مزلق العين على كلتا العينين لمنع جفاف القرنية.

حلق المنطقة الظهرية للفأر باستخدام مقص كهربائي في مستطيل كبير من شفرات الكتف وصولا إلى قاعدة الذيل. امسح الشعر المتساقط من المنطقة المحلوقة باستخدام الأنسجة المنقوعة في محلول ملحي. ضعي غسول إزالة الشعر على المنطقة المحلوقة باستخدام قضيب برأس قطني.

بعد ثلاث دقائق ، امسح المنطقة بإسفنجة شاش مبللة مرتين لإزالة المستحضر ومنع تهيج الجلد. قم بإيقاف تشغيل isoflurane وإزالة مخروط الأنف قبل وضع الفئران في قفص الانتعاش. في يوم تجربة إصابة الحروق ، اضبط درجة حرارة حمام الماء على 97 درجة مئوية وقبل ساعة واحدة من التجربة ، ضع 420 جراما من أربعة قضبان نحاسية في حمام مائي.

بمجرد أن لا يستجيب الجرذ لقرصة إصبع القدم على جميع الأطراف ، ضعه على وسادة التدفئة في وضع الانبطاح وحقن 20 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم من المورفين عبر الجذر داخل الصفاق ، أو جذر IP ، لإدارة الألم. بعد ذلك ، تحقق من درجة حرارة حمام الماء. اضبط المؤقت وارتدي القفازات المقاومة للحرارة.

خذ قضيبا نحاسيا ساخنا من الحمام المائي ولمسه على منطقة الظهر لمدة سبع ثوان. قم على الفور بتطبيق الحروق الثلاثة التالية واحدة تلو الأخرى باستخدام قضيب واحد لكل موقع حرق وإنتاج ما يقرب من 20٪ من إجمالي مساحة سطح الجسم بالكامل حرق التلامس. بعد الحرق ، قم بإنعاش الحيوان عن طريق حقن 0.1 ملليلتر لكل جرام من وزن الجسم من محلول رينغر المرضع من خلال مسار IP.

بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بإيقاف تشغيل الأيزوفلوران. إزالة مخروط الأنف ووضع الفئران على حصيرة الحرارة. في يوم الحرق والعدوى ، يقوم جهاز الطرد المركزي بزراعة Pseudomonas aeruginosa أو المكورات العنقودية الذهبية بشكل منفصل عند 4000 مرة غرام لمدة 5 دقائق.

اغسل الحبيبات بمحلول ملحي عادي قبل تخفيف الحبيبات باستخدام محلول ملحي إلى كثافة بصرية 0.1 عند 600 نانومتر. تمييع 200 ميكرولتر من التعليق البكتيري مع 800 ميكرولتر من المياه المالحة والحصول على اللقاح البكتيري المطلوب من 2 × 10 إلى وحدات تشكيل المستعمرة السابعة أو CFU لكل ملليلتر. بعد 15 دقيقة من الحرق ، قم بحقن 50 ميكرولتر من اللقاح المخفف للبكتيريا بالقرب من منطقة الحرق باستخدام إبرة قياس 29.

ضع الفئران على وسادة التدفئة للتعافي. بعد 15 إلى 20 دقيقة ، انقل الحيوان المستعاد إلى قفص نظيف. مباشرة بعد إصابة الحرق ، قم بتقييم إصابة الجلد شكليا من حيث اللون والهامش.

بعد القتل الرحيم ، قم بتحليل تعداد الدم الكامل لتحديد تأثير تحريض الحرق على الجهاز المناعي المضيف. جمع أنسجة الفئران القتل الرحيم في أنبوب جمع 10 ملليلتر. تجانس العينات باستخدام خالط الأنسجة وتخفيف متجانسات الأنسجة بشكل متسلسل في محلول ملحي طبيعي.

لوحة 100 ميكرولتر من التجانس غير المخفف وجميع التخفيفات لكل عينة نسيج تم جمعها من الفئران المصابة ب P.Aeruginosa على ألواح أجار سيتريميد. بعد احتضان الألواح لمدة 16 إلى 18 ساعة عند 37 درجة مئوية في حاضنة ، عد المستعمرات البكتيرية على اللوحات. اضربها في نسبة التخفيف للحصول على CFU لكل ملليلتر وتطبيعها مع وزن الأنسجة لحساب أنسجة برنامج CFU.

أدى هذا البروتوكول القابل للتكرار بدرجة عالية إلى إصابة حروق كاملة السماكة من الدرجة الثالثة في الفئران. تغير لون إصابة الحرق من الأبيض إلى البني في 24 ساعة إلى 72 ساعة بعد الحرق. في التحليل النسيجي ، أظهرت عينات الجلد من الحيوانات المحروقة إصابة عبر جميع الطبقات في 24 و 48 و 72 ساعة بعد إصابة الحرق ، في حين أظهر الجلد غير المحترق تمييزا واضحا للبشرة والأدمة وطبقات الأنسجة تحت الجلد.

لوحظ تدمير طبقة البشرة وتلف سمك الأدمة الكامل بالدهون تحت الجلد والعضلات الهيكلية في عينات الجلد المحروقة. في 24 ساعة بعد الحرق ، كان عمق الحرق الكامل أكثر من 2.61 ملم. في تقييم التخليص البكتيري ، لوحظ الانتعاش البكتيري في جميع الفئران المصابة بالحروق.

خلال عدوى P.aeruginosa PAO1 ، كان عدد البكتيريا التي تم استردادها بعد 24 ساعة من الإصابة من جلد الفئران المحترقة أقل من اللقاح الأولي من 1 × 10 إلى 6 CFU. ومع ذلك ، فقد زاد 48 و 72 ساعة بعد الإصابة. في S.aureus ، عدوى ATC25923 ، لوحظت زيادة 2 سجل 10 في جميع النقاط الزمنية في الجلد مقارنة باللقاح الأولي ، مما يشير إلى أن إنشاء عدوى S.aureus نتج بسبب التكاثر النشط في الأنسجة.

أظهرت الأنسجة والعضلات تحت الجلد حمولة بكتيرية أعلى من الرئة والطحال. أظهرت البيانات أن الفئران المحترقة أصيبت بعدوى جهازية بعد 24 ساعة من تلقيح P.aeruginosa و 48 ساعة بعد تلقيح S.aureus. قم بإزالة الشعر تماما على ظهر الفئران والحفاظ على درجة الحرارة وحرق وقت الحث كما هو مذكور في البروتوكول.

يمكن أن يؤثر الشعر المتبقي ودرجات الحرارة المختلفة للقضبان النحاسية على جودة الحرق. يمكن استكشاف نموذج حرق الفئران لتقييم العلاجات الموضعية الجديدة لعلاج التهابات جروح الحروق ولتقييم ضمادات الجروح المختلفة.