نموذج فئران ذو كفاءة مناعية للعلاج الحراري الخلالي بالليزر للورم الأرومي الدبقي

يركز بحثنا على أورام الدماغ لدى البالغين. وهذا يشمل الورم الأرومي الدبقي الأولي ، وكذلك ورم خبيث في الدماغ. لقد طورنا نماذج فئران ورم الدماغ لتحديد علاجات أكثر فعالية للمرضى الذين يعانون من هذه الحالات المميتة.

الورم الأرومي الدبقي هو أورام الدماغ الأولية الأكثر حدة والأكثر شيوعا. في أكثر من 20٪ من مرضى الورم الأرومي الدبقي ، لا يمكن إزالة هذا الورم في المخ جراحيا. في هذه الحالات ، يتم استخدام العلاج الحراري الخلالي بالليزر ، باختصار ، LITT ، سريريا لاستهداف أورام الدماغ العدوانية.

LITT هي تقنية استئصال الأنسجة الحرارية التي يتم تطبيقها سريريا لأورام الدماغ التي يتعذر الوصول إليها جراحيا. سيوفر بحثنا باستخدام نماذج الفئران LITT معلومات مهمة عن استجابات الأنسجة والخلايا للمعالجة الحرارية في الورم وأنسجة المخ المحيطة. إن الفهم الأفضل للتغيرات الجزيئية والخلوية التي يسببها LITT في الدماغ سيمكننا من استخدام LITT بشكل أكثر فعالية لتحسين النتائج لمرضى أورام الدماغ.

التحدي التجريبي الأكثر أهمية هو الاستهداف الدقيق للورم وعلاجه. على عكس جراحة LITT ، المستخدمة سريريا في المرضى من البشر ، لا تحتوي معظم النماذج على تصوير التصوير بالرنين المغناطيسي في الوقت الفعلي ، مما يجعل من الصعب استهداف الورم دون أي مساعدة بصرية. للبدء ، سجل وزن الفأر المخدر لحساب جرعات الدواء الصحيحة.

احلق المنطقة الجراحية بعناية ، وتجنب العينين والأذنين والشعيرات. ضع قواطع الماوس في فتحة قضيب العض واضبط مخروط الأنف للإطار التجسيمي حتى يتناسب بشكل مريح ، ثم شد برغي التثبيت لتثبيته في مكانه. تحقق من عمق التخدير عن طريق إجراء قرصات إصبع القدم الخلفية الثنائية.

بمجرد تخدير الماوس بشكل صحيح ، قم بتأمين الجمجمة باستخدام دبابيس الأذن واضبط الرأس على وضع مستوى محايد. ضع مرهم العين بكثرة على كلتا العينين لمنع الجفاف. باستخدام حقنة قياس 28 نصف بوصة ، قم بحقن ميلوكسيكام تحت الجلد كمسكن للألم.

تقليل معدل التخدير للحفاظ على معدل التنفس المستهدف. بعد ذلك ، ثنى الماوس بشكل معمق. باستخدام قطعة قطن معقمة ، ضع محلول مطهر الكلورهيكسيدين بدءا من الوسط والعمل للخارج.

ثم باستخدام قطعة قطن معقمة طازجة ، ضع 70٪ من الإيثانول بنفس الطريقة. أعد فحص عمق التخدير عن طريق مراقبة معدل التنفس. ثم باستخدام مشرط شفرة رقم 15 ، قم بعمل شق سهمي متوسط من 1.0 إلى 1.5 سم يبدأ خلف العينين قليلا في اتجاه التدليل.

الآن ، باستخدام قطعة قطن معقمة ، تعكس حواف الجرح لتصور الجمجمة. افركي أي نسيج ضام برفق من المنطقة. إذا لزم الأمر ، استخدم قطعة قطن معقمة مبللة ببيروكسيد الهيدروجين لكشف سطح الجمجمة وتصور خيوط لامدا.

حدد موقع بريجما حيث تلتقي خيوط القرنية اليمنى واليسرى بالخياطة السهمية. اختياريا لتسهيل نقل بريغما أثناء جراحة LITT ، استخدم راتنج أكريليك ملون غير سام وعود أسنان خشبي معقم واترك علامة صغيرة على البريجما. مع وجود حقنة ميكرولتر في الإطار ، قم بصفر الإحداثيات التجسيمية مع لمس الطرف البريجما.

يشير إحداثي X إلى الحركة في المستوى الجانبي الإنسي ، وإحداثي Y للحركة الخلفية الأمامية ، وإحداثي Z للمستوى البطني الظهري. تأكد من أن lambda في نفس المستوى البطني الظهري مثل bregma حيث Z يساوي صفرا عند كلا المعلمين. إذا كانت التعديلات ضرورية ، فتأكد من أن الجمجمة لا تزال ثابتة بإحكام عن طريق الضغط اللطيف باستخدام مسحة معقمة.

ضع طرف الإبرة فوق المنطقة المستهدفة عند الإحداثيات بالإضافة إلى 2.0 ملم وسائط جانبية وبالإضافة إلى 0.5 ملم أمامي خلفي من بريجما. اخفض طرف لقمة الحفر بحذر حتى تلامس الجمجمة. ارفع طرف الإبرة قليلا وقم بعمل نقطة صغيرة في موقع ثقب الأزيز باستخدام علامة جراحية معقمة.

بعد ذلك ، ارفع الإبرة قليلا حتى تكون بعيدة عن الطريق وحفر حفرة في موقعك المحدد ، مع الحرص على التوتر فقط من خلال الجمجمة دون الإضرار بالسحايا تحتها. قم بإنشاء ثقب نتوء ثان عند زائد 3.0 ملم جانبي وسطي وزائد 0.5 ملم أمامي خلفي ، أو قم بتمديد الفتحة الأصلية إلى هذا الإحداثي لاستيعاب المزدوجة الحرارية أثناء إجراء LITT. بعد ذلك ، قم بإزالة أنبوب الطرد المركزي الدقيق الذي يحتوي على خلايا الورم الدبقي CT2A من الجليد ونفض الغبار برفق عن الأنبوب بطرف إصبع لإعادة تعليق الخلايا.

باستخدام حقنة سعة خمسة أو 10 ميكرولتر ، ارسم برفق ما يقرب من اثنين من ميكرولتر من تعليق الخلية. اعبر 0.5 ميكرولتر من المحقنة لإزالة أي هواء. امسح عمود الإبرة بمسحة كحولية لإزالة أي سوائل أو خلايا متبقية.

اخفض الإبرة ببطء إلى العمق عند Z يساوي ناقص ثلاثة ملليمترات وتوقف مؤقتا لمدة دقيقة واحدة. ثم اسحب الإبرة ببطء 0.5 ملم وحقن الخلايا بسرعة 0.5 ميكرولتر في الدقيقة. بعد اكتمال الحقن، انتظر لمدة دقيقتين قبل سحب المحقنة ببطء على مدى ثلاث إلى أربع دقائق.

سيساعد التوقف لمدة تصل إلى دقيقة بعد الفترات العديدة الأولى من 100 إلى 250 ميكرومتر على منع إزاحة الخلايا. لإغلاق شق الجرح ، أعد تقريب حواف الشق. باستخدام ثلاث غرز متقطعة مع خياطة 50 ، أغلق الجرح مع تحريك حواف الجرح قليلا لضمان لمسات الأدمة الأساسية.

ضع محلول اليود بوفيدون على الجرح المغلق وانقل الماوس إلى قفص استرداد مبطن بالورق على وسادة تسخين مضبوطة على 37 درجة مئوية. بمجرد أن يستعيد الاستلقاء القصي ، يمكن نقله مرة أخرى إلى قفص منزله. بعد تسعة أيام من حقن تعليق خلايا الورم الدبقي للفأر CT2A ، قم بتأمين الفأر المخدر في الإطار التجسيمي.

أعد إنشاء شق خط الوسط واستخدم قطعة قطن معقمة لتنظيف الجمجمة لإزالة أي أنسجة تحجب البريما. مع وجود العلاج الحراري الخلالي بالليزر أو مرفق LITT في مكانه على الإطار التجسيمي ، قم بصفر الإحداثيات عند بريجما لطرف ألياف الليزر. بعد ذلك ، ارفع طرف ألياف الليزر قليلا وانتقل إلى الإحداثيات الخلفية الجانبية والأمامية الإنسية المطلوبة.

ثم اخفض المسبار ببطء إلى الإحداثيات البطنية الظهرية المستهدفة للوصول إلى الهدف. اضبط معلمات معالجة LITT على الوضع المستمر وقم بتشغيل ماذا. بعد ذلك ، قم بتبديل الليزر من وضع الاستعداد إلى النشط وقم بإشراك الليزر لمدة 60 ثانية باستخدام دواسة القدم.

إذا ارتفعت درجة الحرارة إلى أكثر من 46 درجة مئوية ، توقف لفترة وجيزة ، ثم أعد الانخراط ، بهدف الحفاظ على درجة الحرارة قريبة من 46 درجة مئوية. أخيرا ، اسحب مجموعة الليزر ببطء. امسح ألياف الليزر والمزدوجة الحرارية برفق باستخدام مسحة كحولية.

قم بتدوير المجموعة بعيدا عن الطريق ، مع التأكد من عدم اتصال المجسات بالإطار. أظهرت صور الرنين المغناطيسي للقرنية الموزونة T2 زرع الورم بنجاح مع معدلات أخذ تقارب 100٪ وتكوين ورم كروي ثابت. نتج عن علاج LITT استئصال متسق مع مناطق سوداء شديدة الكثافة محددة ، مما يشير إلى نخر الأنسجة في اللب المركزي ومنطقة بيضاء شديدة الكثافة المحيطة بها تظهر وذمة حول الجراحة.