Name: نهج عبر الملتحمة للحقن في العصب البصري للفئران (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 2 min 33 s
Description: تعلم تقنية الحقن عبر الملتحمة في العصب البصري للفئران لدراسة علاجات التصلب العصبي الليفي من النوع الأول. هذه الطريقة غير جراحية تتيح التسليم المباشر للعوامل العلاجية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Korn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+neuroprotective+effects+of+methylprednisolone+and+surgical+decompression+in+a+rodent+model+of+traumatic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the neuroprotective effects of methylprednisolone and surgical decompression in a rodent model of traumatic optic neuropathy.</a> Curr Eye Res. 47 (3), 461-467 (2022).</li>
<li>Lim, J. Y., Utzschneider, D. A., Sakatani, K., Kocsis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+attenuation+of+GABA+sensitivity+in+the+maturing+myelin-deficient+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Dev+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The attenuation of GABA sensitivity in the maturing myelin-deficient rat optic nerve.</a> Brain Res Dev Brain Res. 72 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Singh, D., Dromel, P. C., Perepelkina, T., Baranov, P., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C6+cell+injection+into+the+optic+nerve+of+long-evans+rats%3A+A+short-term+model+of+optic+pathway+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">C6 cell injection into the optic nerve of long-evans rats: A short-term model of optic pathway gliomas.</a> Cell Transplant. 29, 963689720964383(2020).</li>
<li>Schwaner, S. A., Feola, A. J., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+optic+nerve+head+biomechanics+in+a+rat+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Factors affecting optic nerve head biomechanics in a rat model of glaucoma.</a> J R Soc Interface. 17 (165), 20190695(2020).</li>
<li>Ellouze, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+allotopic+expression+of+the+human+mitochondrial+ND4+prevents+blindness+in+a+rat+model+of+mitochondrial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Optimized allotopic expression of the human mitochondrial ND4 prevents blindness in a rat model of mitochondrial dysfunction.</a> Am J Hum Genet. 83 (3), 373-387 (2008).</li>
<li>Kwon, H., Park, M., Nepali, S., Lew, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-preconditioned+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells+rescue+optic+nerve+axons+via+differential+roles+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+an+optic+nerve+compression+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-preconditioned placenta-derived mesenchymal stem cells rescue optic nerve axons via differential roles of vascular endothelial growth factor in an optic nerve compression animal model.</a> Mol Neurobiol. 57 (8), 3362-3375 (2020).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li>
<li>Raykova, K., Jones, M. V., Huang, H., Hoffman, P. F., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally-invasive+Technique+for+Injection+into+Rat+Optic+Nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve.</a> J Vis Exp. (99), e52249(2015).</li>
<li>Hallas, B. H., Wells, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+mulitple+injections+into+the+mamallian+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Kopf+Carrier%22%5BJournal%5D)">A novel technique for mulitple injections into the mamallian optic nerve.</a> Kopf Carrier. 54, 1-10 (2000).</li>
<li>Yan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+optic+nerve+transection+in+rats%3A+A+model+established+with+a+new+operative+approach+to+assess+secondary+degeneration+of+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Partial optic nerve transection in rats: A model established with a new operative approach to assess secondary degeneration of retinal ganglion cells.</a> J Vis Exp. (128), e56272(2017).</li>
<li>Han, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+retinal+progenitor+cell+grafts+in+immunocompromised+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of human induced pluripotent stem cell-derived retinal progenitor cell grafts in immunocompromised rats.</a> Cell Transplantation. 31, 1-25 (2022).</li>
<li>Tang, Y., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+Type+1-associated+optic+pathway+gliomas%3A+Current+challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Manag+Res%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis Type 1-associated optic pathway gliomas: Current challenges and future prospects.</a> Cancer Manag Res. 15, 667-681 (2023).</li>
<li>Pan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+biomimetic+polydopamine+nanocomposite+scaffold+promotes+optic+nerve+regeneration+through+modulating+inhibitory+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">Implantation of biomimetic polydopamine nanocomposite scaffold promotes optic nerve regeneration through modulating inhibitory microenvironment.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 683(2024).</li>
<li>Gokoffski, K. K., Peng, M., Alas, B., Lam, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-protection+and+neuro-regeneration+of+the+optic+nerve%3A+recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-protection and neuro-regeneration of the optic nerve: recent advances and future directions.</a> Curr Opin Neurol. 33 (1), 93-105 (2020).</li>
<li>Negishi, H., Dezawa, M., Oshitari, T., Adachi-Usami, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+nerve+regeneration+within+artificial+Schwann+cell+graft+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Optic nerve regeneration within artificial Schwann cell graft in the adult rat.</a> Brain Res Bull. 55 (3), 409-419 (2001).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4 '، 6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)</td> <td>MilliporeSigma</td><td>D9542</td><td>1: 10،000 تخفيف ، يستخدم لتلوين المقاطع بالتبريد</td></tr><tr><td>الجسيمات الفيروسية AAV</td><td>Vectorbuilder N</td><td>/ A</td><td>ناقلات تستخدم لحقن العصب البصري</td></tr><tr><td>Aqua-Mount Mounting Medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-390-5</td><td>تستخدم لتركيب عمليات القطع الملطخة</td></tr> بالتبريد <tr><td>مصل البقر ألبومين&nbsp;</td><td>Research Products International Corp</td><td>9048-46-8</td><td>تستخدم في عملية تلطيخ القطع بالتبريد</td></tr><tr><td>الماعز المضادة للفئران Alexa Fluor 488 & nbsp ؛</td><td>تخفيف Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11006</td><td>1: 1000 ، يستخدم لتلوين القطع بالتبريد</td></tr><tr><td>غاز الأيزوفلوران</td><td>Primal Healthcare</td><td>66794-017-10</td><td>غاز للتخدير</td></tr><tr><td>Leica TCS SPE نظام المجهر متحد البؤر المستقيم &nbsp ؛</td><td>Leica Microsystems</td><td>N / A</td><td>مجهر متحد البؤر</td></tr><tr><td>حقنة قفل لور</td><td>BD</td><td>309628</td><td>حقنة للحقن</td></tr><tr><td>ميكروم HM505E cryostat &nbsp ؛</td><td>ميكروم</td><td>M-HM360 فوم مارشال العلمي</td><td>يستخدم لتقسيم العينة</td></tr><tr><td>الفئران المضادة ل GFP &nbsp ؛</td><td>BioLegend</td><td>338002</td> 1<td>: 500 التخفيف ، يستخدم لتلوين عمليات القطع</td></tr><tr><td>بالتبريد خطاف الحبل الشوكي</td><td>FST</td><td>10162-12</td><td>خطاف يستخدم لعزل العصب البصري</td></tr><tr><td>عشرة ميكرولتر حقنة</td><td>هاميلتون</td><td>CAL 803901</td><td>حقنة للحقن</td></tr><tr><td>إبرة</td><td>JBP</td><td>JBP3308B</td><td>للحقن</td></tr><tr><td>Tissue-Tek OCT مركب &nbsp ؛</td><td>VWR International</td><td>25608-930</td><td>تستخدم لمعالجة التبريد</td></tr><tr><td>ملقط مسنن</td><td>Bausch و Lomb</td><td>E1809</td><td>ملقط لفهم مقص</td></tr><tr><td>بضع الوتر الملتحمة Westcott مقص</td><td>Bausch and Lomb</td><td>E3323-R</td><td>لإنشاء استئصال الصفاق</td></tr></tbody></table>

نهج عبر الملتحمة للحقن في العصب البصري للفئران

Transconjunctival Approach for Injection into the Rat Optic Nerve

تظهر النتائج التجريبية التمثيلية باستخدام هذه التقنية لحقن العصب البصري للفئران في الشكل 2. في هذا المثال ، تم حقن الفيروس eGFP المرتبط بالغدة (AAV-eGFP) في العصب البصري للفئران باستخدام تقنية عبر الملتحمة الموضحة أعلاه بإبرة 33 G متصلة بحقنة 10 ميكرولتر. كانت هذه النتائج جزءا من تجربة باستخدام هذه التقنية لدراسة حقن العصب البصري كجزء من الهدف النهائي لاستخدام AAV لتقديم تصحيح CRISPR للأعصاب البصرية في نموذج الفئران من الورم العصبي الليفي 1 (NF1). تم استخدام مزيج من الصبغة وناقلات AAV لتطوير تقنية الحقن. تم التضحية بالحيوانات بعد سبعة أيام من الحقن في العصب البصري. ثم تم تشريح الأعصاب وتصنيفها بالأجسام المضادة ل GFP للسماح بتصوير العصب البصري باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر للتأكد من أن المادة قد اخترقت بنجاح غمد العصب البصري ودخلت العصب البصري. تم تأكيد الإدخال الناجح للمادة في العصب البصري عن طريق تلطيخ الأجسام المضادة ، وظهرت باللون الأخضر في الفحص المجهري متحد البؤر ، كما هو موضح في الشكل 2 أ. في الحالات التي لم يكتمل فيها الاختراق عبر غمد العصب البصري ، أو كان هناك تدفق للمواد من مسار الإبرة ، شوهد تلطيخ على طول حافة غمد العصب البصري بدلا من داخل الأنسجة العصبية ، كما هو موضح في الشكل 2C.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig01.jpg"> 
الشكل 1: تسلسل الخطوات الجراحية. (أ) يتم إمساك الملتحمة بالملقط المسنن ، ويستخدم مقص Westcott لإنشاء استئصال الصفاق الدافي. (ب) بعد فتح لفافة اللسان وتشريحها بصراحة ، يتم الكشف عن المدار بمساعدة مقص Westcott. (ج) يتم إدخال خطاف الحبل الشوكي واستخدامه لعزل العصب البصري. (د) بعد التشريح الحاد للأنسجة الحجاجية المغطى ، يتم الكشف عن العصب البصري باستخدام خطاف الحبل الشوكي. (ه) تستخدم إبرة 33 جم لثقب غمد العصب البصري وحقن الفيروس الغدي أو الصبغة في العصب البصري. (و) يتم وضع الكرة الأرضية في المدار، ويعاد وضع الملتحمة فوق موقع استئصال الصفاق. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig01large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig02.jpg"> 
الشكل 2: صورة بانورامية ممثلة فلورسنت متحدة البؤر للعصب البصري للفئران بعد 7 أيام من الحقن الناجح باستخدام AAV-eGFP (أخضر) حيث تم نقل الخلايا العصبية المتجهة بالقرب من التصاب البصري. (أ) يتم تمييز نوى العصب البصري ب DAPI (أزرق). يشير ONH مع السهم إلى رأس العصب البصري أو الطرف المداري للعصب ، في حين أن نهاية chiasm البصرية تسمى "chiasm". (ب) صورة فوتوغرافية لعصب بصري للفأر من المدار إلى التصلب مدمج في إدرار القطع بالتبريد المجمد. يتم حقن العصب بالحبر الهندي خلف المدار مباشرة (موقع الحقن المشار إليه بالسهم الأسود) من أجل توجيه العصب البصري. (ج) صورة فلورية بانورامية للعصب البصري للفئران بعد 7 أيام من الحقن غير الناجح باستخدام AAV-eGFP (أخضر) حيث من المحتمل أن يتدفق معظم معلق الناقل من المسالك العصبية ، مما يؤدي إلى تحويل الغمد البصري. يتم تصنيف نوى العصب البصري ب DAPI (أزرق). يشير ONH إلى رأس العصب البصري الخلفي مباشرة للشبكية العصبية وموقع الحقن المشار إليه بسهم أبيض. يحدد Chiasm والسهم الأبيض نحو chiasm البصري. أشرطة المقياس = 400 ميكرومتر في (A) و 200 ميكرومتر في (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig02large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>متغير</td>
			<td colspan="3">أقبل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>عبر الملتحمة</td>
			<td>متفوق</td>
			<td>جانبي</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>شق الجلد</td>
			<td>لا</td>
			<td>نعم</td>
			<td>نعم</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>شق الملتحمة</td>
			<td>نعم</td>
			<td>لا</td>
			<td>لا</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>مجهر</td>
			<td>نعم</td>
			<td>نعم</td>
			<td>نعم</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>قطع العضلة المدارية العليا</td>
			<td>لا</td>
			<td>نعم</td>
			<td>لا</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>خياطة الجر</td>
			<td>لا</td>
			<td>نعم</td>
			<td>نعم</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>خطاف الحبل الشوكي</td>
			<td>نعم</td>
			<td>لا</td>
			<td>لا</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>خياطة الجلد</td>
			<td>لا</td>
			<td>نعم</td>
			<td>نعم</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 1: مقارنة بالتقنيات المنشورة سابقا لعزل العصب البصري للفئران للدراسة التجريبية. تتم مقارنة المتغيرات ، بما في ذلك الحاجة إلى شق الجلد ، وشق الملتحمة ، ومجهر التشغيل ، وقطع العضلة المدارية العلوية ، وخياطة الجر ، وخطاف الحبل الشوكي ، وخياطة الجلد ، باستخدام الأساليب عبر الملتحمة ، والعليا ، والجانبي.

The rat serves as an important model for studying disorders of the optic nerve, including heritable, traumatic, neoplastic, and autoimmune conditions. ...

transconjunctival-approach-for-injection-into-the-rat-optic-nerve

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

حقن Intravitreous هو التقنية المستخدمة على نطاق واسع في بحوث العلوم البصرية لأمراض العين أو التطبيق المباشر للعلاج المحلية. أثبت هذا الفيديو على بروتوكول للحقن intravitreous باستخدام المحاقن 1ml مع ماصة الزجاج. يتم إعطاء نصائح مفيدة حول تجنب نزيف حاد وتلف العدسة.

Intravitreous حقن لأمراض العين تأسيس النموذجي

العصب البصري transection هو النموذج المستخدم على نطاق واسع من اصابة الجهاز العصبي المركزي للبالغين. هذا نموذج مثالي لأداء عدد من المعالجات التجريبية التي تستهدف الشبكية عالميا أو تستهدف مباشرة السكان من الخلايا العصبية جرح العقدة الشبكية.

أساليب التلاعب التجريبية بعد Transection العصب البصري الثدييات في الجهاز العصبي المركزي

يوضح هذا الفيديو تحريض الجلوكوما في فأر مخدر عن طريق حقن محلول ملحي مفرط التوتر في الوريد الإسكليكلي. يدخل المحلول الملحي إلى الشبكة التربيقية عبر قناة شليم ، مما يتسبب في تندب الأنسجة ، مما يمنع تدفق الخلط المائي ويرفع الضغط داخل العين. يؤدي الضغط المرتفع إلى إتلاف الخلايا العقدية الشبكية ، مما يؤدي إلى الجلوكوما.

تقنية حقن المحلول الملحي مفرط التوتر لتحفيز الجلوكوما في الفئران

الحقن المباشر في العصب البصري للفئران مفيد للأبحاث التجديدية. نظهر تقنية طفيفة التوغل للحقن المباشر في العصب البصري للفئران لا تتضمن فتح الجمجمة. باستخدام هذه الطريقة ، يتم تقليل المضاعفات الجراحية ويكون الشفاء أسرع.

تقنيات الحد الأدنى الغازية لحقن الفئران في العصب البصري

يصف التقرير التالي كيفية تكرار نموذج القوارض للاعتلال العصبي البصري الإقفاري الأمامي غير الشرياني (rNAION) ، باستخدام الصبغة المناسبة والعدسات اللاصقة ومعلمات الليزر. نكشف أيضا عن الخطوات المناسبة لتقييم آفة rNAION في الجسم الحي.

نموذج القوارض من Nonarteritic الإقفارية العصبي البصري الأمامي (rNAION)

الحقن تحت الشبكية هي التقنية الأكثر شيوعا لتوصيل العوامل العلاجية الكبيرة مثل البروتينات والنواقل الفيروسية إلى المستقبلات الضوئية وظهارة صبغة الشبكية. يتم وصف طريقة بديلة في الفئران تستهدف بنجاح الفضاء تحت الشبكية بأقل قدر من الضرر الجانبي وأوقات التعافي السريعة.

بديل والمصادق عليها طريقة حقن للوصول إلى الفضاء تحت الشبكية<i&gt; عبر</i&gt; نهج Transcleral الخلفي

يهدف هذا البروتوكول إلى إظهار مسار الإعطاء الوريدي القابل للتكرار والذي يمكن استخدامه في الجرذان والفئران طوال فترة حديثي الولادة. هذا الإجراء مهم لدراسات القوارض قبل السريرية التي ترغب في عكس إعطاء الدواء في وحدات رعاية حديثي الولادة باستخدام الإعطاء الوريدي في المقام الأول.

نموذج القوارض الوليدية لحقن الوريد خلف الحجاج

يصف هذا البروتوكول تقنية للحقن داخل الكاميرا في الفئران باستخدام شق مركزي في القرنية ونفق طويل في الغرفة الأمامية. تقلل طريقة الحقن هذه من خطر إحداث تلف غير مقصود للأنسجة وبالتالي تحسن الدقة والتكاثر.

الحقن داخل الكاميرا في الفئران ذات المخاطر المنخفضة للآثار الضارة

توضح هذه المقالة طرق الحقن تحت الشبكية في الفئران ، باستخدام التصور أثناء الجراحة للتحكم في كل من موقع الحقن ومنطقة انفصال الشبكية.

التصور أثناء الجراحة للحقن تحت الشبكية وانفصال الشبكية في الفئران

تقدم هذه الدراسة منهجية لتوصيل العلاجات إلى شبكية العين والأعصاب البصرية للفئران البالغة. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم طريقة فريدة لاسترجاع الأنسجة لمجموعة من أعلى إلى أسفل من العصب البصري وشبكية العين في الفئران البالغة.

التوصيل العلاجي للعين واسترجاع الأنسجة المتقدم في الفئران البالغة

تعلم تقنية الحقن عبر الملتحمة في العصب البصري للفئران لدراسة علاجات التصلب العصبي الليفي من النوع الأول. هذه الطريقة غير جراحية تتيح التسليم المباشر للعوامل العلاجية.

نهج عبر الملتحمة للحقن في العصب البصري للفئران

استكشف المزيد من الفيديوهات