أبريل 4, 2025
يصف هذا البروتوكول تقنية فريدة باستخدام نهج عبر الملتحمة للوصول إلى العصب البصري للفئران للحقن.
يهدف هذا البحث إلى تطوير طرق أكثر فعالية لتقديم العلاج للعصب البصري في المرضى الذين يعانون من الورم العصبي الليفي من النوع 1. يركز بروتوكولنا على استكشاف تقنيات أفضل للوصول إلى العصب البصري للفئران للدراسة التجريبية. يوفر هذا البروتوكول ميزة كونه طفيفا من التدخل الجراحي ، مما يلغي الحاجة إلى شق جلدي.
[متظاهر] للبدء ، أمسك الملتحمة في الربع السفلي الصدغي باستخدام ملقط مسنن. استخدم مقص Westcott لإنشاء شق الملتحمة الشعاعي ، ثم افتح اللفافة الوتارية في الربع الجحيمي. استخدم تشريحا حادا لإزالة الأنسجة المدارية العلوية. قم بتدوير العين عن طريق الأنف باستخدام ملقط مسنن. اطلب من المساعد إدخال خطاف الحبل الشوكي في الربع السفلي الصدغي لعزل العصب البصري. باستخدام تشريح حاد باستخدام ملقط أو قضيب قطني مائل ، قم بإزالة الأنسجة المدارية المتبقية ولفافة الأوتار لكشف العصب البصري والغمد. باستخدام إبرة قياس 33 متصلة إما بحقنة 10 ميكرولتر أو 1 مليلتر ، اخترق غمد العصب البصري. حقن تركيزات متفاوتة من الفيروس المرتبط بالغدة EGFP أو صبغة الحبر الهندي في العصب البصري تحت التصور المباشر لضمان حقن المادة مباشرة في العصب. أعد تقريب الملتحمة إلى الأطراف لتغطية موقع الشق. يوضح هذا الشكل نتائج توصيل EGFP الناجح وغير الناجح للفيروس المرتبط بالغدة إلى العصب البصري للفئران باستخدام تقنية الحقن عبر الملتحمة. نتج عن الحقن الناجح للعصب البصري إشارة فلورية خضراء واسعة النطاق داخل الأنسجة العصبية ، مما يشير إلى الاختراق الفعال لناقل EGFP للفيروس المرتبط بالغد. أظهر الحقن غير الناجح إشارة خضراء فقط على طول الحافة الخارجية للعصب البصري ، مما يشير إلى أن المادة تسربت ولم تدخل الأنسجة العصبية.
يصف هذا البروتوكول تقنية ذات تدخل جراحي محدود باستخدام نهج عبر الملتحمة للوصول إلى العصب البصري لدى الجرذ لإجراء الحقن. تهدف هذه الطريقة إلى تحسين إيصال العلاج إلى العصب البصري في أبحاث الورم الليفي العصبي من النوع 1.
يتيح الوصول المباشر إلى العصب البصري لدى الجرذ باستخدام نهج عبر الملتحمة طفيف التوغل توصيلاً دقيقاً للعوامل التجريبية في أبحاث الأعصاب والعيون. ويدعم هذا التكنيك تحقيق ارتباط عالي الدقة بالهدف ويقلل من التباين الإجرائي، وهو أمر بالغ الأهمية للدراسات الانتقالية في العلاج الجيني ونماذج إصابة العصب البصري. ويمكن لاعتماد هذا النهج أن يسرّع عمليات الاكتشاف المبكر والتحقق قبل السريري للعلاجات التي تستهدف اعتلالات العصب البصري.
تندمج طريقة الحقن عبر الملتحمة هذه في مراحل الاكتشاف المبكرة والمراحل قبل السريرية من مسار تطوير الأدوية العينية، مما يدعم كلاً من التحقق من الهدف وتحسين المركبات الرائدة.