Name: من MEFs لMatrigel 3 : hESCs من الركض على Matrigel Matrigel (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-10T15:33:00.000+00:00
Duration: 3 min 50 s
Description: تعلم تقنية تمرير خلايا الجنين البشرية Pluripotent Stem Cells على Matrigel بدون خلايا مغذية، مع التحقق من تعدد القدرات بالتألق المناعي. هذه الطريقة تدعم نمو الخلايا الجذعية بشكل صحي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وتدعم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية الدراسات في المختبر Teitell بواسطة معهد كاليفورنيا للطب التجديدي (CIRM) منح البذور RS1 - 00313. نشكر أعضاء المركز واسع في الطب التجديدي ، وأبحاث الخلايا الجذعية في جامعة كاليفورنيا ، وخصوصا الدكتور Amander كلارك ، والدكتور جيروم زاك ، وأعضاء معهد الجذعية في جامعة كاليفورنيا واسع مرفق الخلية الأساسية لدعمهم لدراساتنا.

hESCs انفصالها عن Matrigel لMatrigel عادة ما يمكن تقسيم متموجة 6 - جيدا على طبق من hESCs Matrigel 1:03 حتي 1:05 لوحة إلى أخرى Matrigel ، مع الآبار تصبح متكدسة مرة أخرى 4-5 أيام بعد انفصالها. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتعد لوحات CM Matrigel كما هو موضح أعلاه قبل تقسيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم من تقسيم ، ويغسل كل بئر لتقسيم مع 1 × PBS ، pH7.4 ، إضافة 1ml من Dispase 1mg/ml (تمييع الحل الأسهم 5mg/ml مع وسائل الاعلام DMEM/F12) إلى كل جيدا ، واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل كل بئر ثلاث مرات مع 1 × PBS ، pH7.4 ، إضافة 1ml من وسائل الإعلام من دون وفاق bFGF ، واستخدام مكشطة الخلية لكشط قبالة المستعمرات قاع البئر ، وجمع hESCs علقت في أنبوب الصقر 50ml ، وبيليه بواسطة الطرد المركزي في 200G لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة لإعادة hESCs Matrigel على لوحات ، وغسل أول لوحات Matrigel مع DMEM/F12 وإضافة 2.5ml من CM تستكمل مع bFGF 10ng/ml لكل بئر. Resuspend الكرية hESC في حجم مناسب لCM تستكمل مع bFGF 10ng/ml ، ماصة تعليق خلية صعودا وهبوطا ثلاث مرات. (ملاحظة : عند hESCs لتقسيم تأتي من لوحات Matrigel ، وكتل من السهل جدا لكسر ، وبالتالي ثلاث جولات من pipetting يكفي وأكثر pipetting قد تعطل الإفراط في المستعمرات وتجعل الخلايا واحدة). قسامة 0.5 مل من كتل تعليق في hESC كذلك من لوحة Matrigel 6 - جيدا لتحقيق في 3ml كذلك الحجم النهائي. وضع لوحة في الحاضنة 37 درجة مئوية. </li></ol> كشف علامات تعدد القدرات التي المجهري المناعي يستخدم لفحص المجهري المناعي التعبير عن علامات hESC تعدد القدرات أكتوبر - 4 - 4 وSSEA خلال زراعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح وسائل الاعلام من بئر واحدة تغسل مع 1 × PBS ، ودرجة الحموضة 7.4. إضافة 2ml من الفورمالديهايد بنسبة 3.7 ٪ إلى البئر لتحديد لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التشطيف مع 1xPBS ، ودرجة الحموضة 7.4 ، إضافة الميثانول 2ml إلى البئر ومكان عقد الاجتماع -20 درجة مئوية لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التشطيف مع 1xPBS ، ودرجة الحموضة 7.4 ، وكتلة مع 1ml من serume البقري بنسبة 0.2 ٪ الزلال (BSA) لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1ml الضد من أكتوبر - 4 أو anti-h/mSSEA-4 (1:200 0.2 ٪ في تخفيف BSA) ، ويحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة أو عند 4 درجات مئوية خلال الليل. (ملاحظة : لتلوين SSEA - 4 ، انتقل مباشرة إلى الخطوة 6) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف ثلاث مرات مع 1xPBS ، ودرجة الحموضة 7.4 ، إضافة FITC أرنب ، مترافق مفتش (1:500 0.2 ٪ في تخفيف BSA) ، ويحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف 3 مرات مع 1xPBS ، ودرجة الحموضة 7.4 ، ووضع قطرة من حل تركيب (يمكن أن تحتوي على دابي إذا كان المطلوب التصور النووية) في مركز البئر. ساترة وضع على رأس هذه الخلايا ، وختم مع طلاء الأظافر ، وتقييم بواسطة المجهر المناعي. </li></ol> الخلايا الجذعية الجنينية البشرية إيصالات وفاق وسائل الإعلام (وسائل الإعلام الخلايا الجذعية الجنينية) : DMEM/F12 -- 400ml مصل حال محل خروج المغلوب -- 100ML غير الأحماض الأمينية الأساسية -- 5ml 200MM GlutaMax / BME الحل -- 5ml البنسلين / الستربتوميسين -- 5ml تخلط جيدا وتخزينها النهائي الإعلام الثقافة hESC في زجاجات 500ml في 4 درجات مئوية. جيد لمدة أقصاها أسبوعين. MEF الثقافة وسائل الإعلام : DMEM -- 1000ml FBS -- 100ML غير الأحماض الأمينية الأساسية -- 10ML الجلوتامين -- 10ML Penicllin / الستربتوميسين -- 10ML تخلط جيدا وتخزينها النهائي الإعلام الثقافة MEF في 4 درجات مئوية. 200MM Glutamax / BME الحل : Glutamax -- 100ML β - المركابتويثانول (أسهم في حل 14.3M) -- 140 μ1 مزيج حلين جيدا ثم الأجزاء 10ML قسامة. تبقي في aliquots -20 درجة مئوية. bFGF محلول (تركيز النهائي للسهم : 10 ميكروغرام / مل) : bFGF (FGF2) -- 50 ميكروغرام 0،1 ٪ في جيش صرب البوسنة 1xPBS ، ودرجة الحموضة 7.4 -- 5ml حل 50 ميكروغرام في bFGF 5ml BSA 0.1 ٪ لجعل 10 ميكروغرام / مل الأسهم. قسامة في 500 أجزاء ميكرولتر. المحل في -80 درجة مئوية. رابعا كولاجيناز محلول (1mg/ml) : كولاجيناز رابعا -- 50mg DMEM/F12 الإعلام -- 50ml إضافة إلى مسحوق الرابع كولاجيناز أنبوب الصقر 50ml. في غطاء محرك السيارة ، في مزيج من وسائل الإعلام 50ml DMEM/F12 العقيمة. دوامة الحل ل1 دقيقة &lt;. للتأكد من حل مسحوق. في هود ، ويمر عبر فلتر 0.22 ميكرون إلى أنبوب جديد العقيمة الصقر 50ml. هذا الحل هو جيد لمدة أقصاها أسبوعين من 2 المخزنة في 4 درجات مئوية. Dispase محلول (1mg/ml) : Dispase 5mg/ml -- 2ml وسائل الإعلام DMEM/F12 -- 8ml قسامة Dispase 5mg/ml التجارية وتخزينها في حل -20 درجة مئوية. لتمييع dispase 1mg/ml DMEM/F12 به. يمكن الاحتفاظ هذا الحل : 1 أسبوع في 4 درجات مئوية.

<ol><li>Thomson, J. amesA., Itskovitz-Eldor, J. oseph, Shapiro, S. anderS., Waknitz, M. ichelleA., Swiergiel, J. enniferJ., Marshall, V. ivienneS., Jones, J. effreyM. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+Stem+Cell+Lines+Derived+from+Human+Blastocysts+%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts .</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Xu, C. hunhui, Inokuma, M. argaretS., Denham, J. errod, Golds, K. athaleen, Kundu, P. ratima, Gold, J. osephD., Carpenter, M. elissaK. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((+Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells+Nature+Biotechnology+19%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)"> Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells Nature Biotechnology 19.</a> Nature Biotechnology. 19, 971-974 (2001).</li>
</ol>

هذه السلسلة من 3 فيديو يوضح كيفية زراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) على الخلايا الليفية الماوس الخلايا الجنينية المغذية (MEF) (فيديو 1) ، وكيفية مرور لهم Matrigel خالية من الخلايا المغذية لوحات (فيديو 2) ، وكيفية المحافظة hESCs بواسطة الركض في تغذية Matrigel خالية من الخلايا الشروط (الفيديو 3). وأظهرت دراسات سابقة عديدة أن صيانة hESCs وقابلة للحياة يتطلب ثقافة غير متمايزة في الخلايا المغذية MEF المعطل. ومع ذلك ، لكثير من التجارب ، لا بد من السكان نقية من hESCs خالية من التلوث الخلايا المغ...

<table><tbody><tr><td>بديل المصل المسبب للتعطيل (KSR)</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من شركة Life Technologies</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>11330-057</td><td></td></tr><tr><td> الأحماض الأمينية غير الأساسية</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من شركة Life Technologies</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>جلوتامكس (GlutaMax) </td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>وسط دلاسكو ميزي المعتدل (DMEM)</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>مصل الجنين البقري</td><td>كاشف</td><td>مختبرات Clontech</td><td>631107</td><td></td></tr><tr><td>إل-جلوتامين</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من شركة Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>الهندسة الحيوية الطبية</td><td>كاشف</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP176-100</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>كاشف</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>233-FB-025</td><td></td></tr><tr><td>كولاجيناز IV</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>17104-019</td><td></td></tr><tr><td>ديسبيز (Dispase)</td><td>كاشف</td><td>تقنيات الخلايا الجذعية</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>بنسلين / ستربتومايسين </td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>الجيلاتين</td><td>كاشف</td><td>Chemicon International</td><td>ES-006-B</td><td></td></tr><tr><td>ماتريجيل (Matrigel)</td><td>كاشف</td><td>BD Biosciences</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>جسم مضاد لـ Oct-4</td><td>كاشف</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>SC-9081</td><td></td></tr><tr><td>anti-h/mSSEA-4 Phyc&amp;#8211;مضاد جسم IgG3 للفئران مقترن بـ rythrin</td><td>كاشف</td><td>R&amp;أنظمة R&D</td><td>FAB1435P</td><td></td></tr><tr><td>جسم مضاد لـ IgG الأرنب مقترن بـ FITC</td><td>كاشف</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-095-152</td><td></td></tr></tbody></table>

من mefs لmatrigel 3 : hescs من الركض على matrigel matrigel

From MEFs to Matrigel 3: Passaging hESCs from Matrigel onto Matrigel

هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا.

هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا. الجزء 3 من 3.

من MEFs لMatrigel 3 : hESCs من الركض على Matrigel Matrigel

يوضح هذا الفيديو كيفية الحفاظ على نمو الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية، وكيفية إجراء عملية الممر المستمرة...

لتجزئة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية المستزرعة على Matrigel إلى طبق Matrigel آخر. نبدأ بطبق سداسي الفجوات يحتوي على خلايا جذعية جنينية وصلت لمرحلة التلاقي (confluent) على Matrigel، والتي يمكن تجزئتها بنسبة 1:3 أو 1:5 إلى طبق Matrigel آخر. وهذا يتيح للفجوات أن تصل إلى مرحلة التلاقي مرة أخرى بعد أربعة إلى خمسة أيام من التجزئة في يوم التجزئة.اغسل كل بئر سيتم تقسيمه باستخدام 1XPBS pH 7.4. ثم أضف 1 mL من معجون الديس بتركيز 1 mg/mL إلى كل بئر، وحضنه عند 37 °C لمدة ثلاث دقائق. اغسل كل بئر ثلاث مرات باستخدام 1XPBS pH 7.4.أضف بعد ذلك 1 ml من وسط زراعة الخلايا الجذعية الجنينية الخالي من BF GF، واستخدم كاشطة الخلايا لكشط المستعمرات من قاع البئر. اجمع الخلايا الجذعية الجنينية المعاد تعليقها في أنبوب Falcon سعة 15 ml وقم بترسيبها عن طريق الطرد المركزي بقوة 200 ×g لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ولإعادة زرع الخلايا الجذعية الجنينية البشرية على أطباق matrigel، اغسل أطباق matrigel أولاً بـ D-M-E-M-F 12 وأضف 2.5 ml من وسط meth condition المكمل بـ 10 ng/ml.BFGF لكل بئر بعد طرد الخلايا مركزياً، قم بتعليق كتلة الخلايا الجذعية السمعية البشرية في حجم مناسب من وسط استعادة الحالة. يتم تدعيم الوسط بـ 10 nanograms per mil من BFGF، ثم استخدم الماصة لسحب وتعليق الخلايا ثلاث مرات.ضع في اعتبارك أن تجمعات الخلايا الجذعية من matrigel تتفكك بسهولة. لذا، فإن السحب بالماصة ثلاث مرات سيكون كافياً لتفكيك التجمعات، دون جعل المستعمرات صغيرة جداً. وأخيراً، وزع 0.5 milliliters من معلق الخلايا الجذعية البشرية في كل بئر لتحقيق 3 mils لكل بئر.كحجم نهائي، تأكد من توزيع تكتلات الخلايا بشكل متساوٍ، ثم ضع الطبق في حضانة عند درجة حرارة 37 °C. وبناءً على سلالة الخلايا الجذعية amry المحددة، ستصبح الخلايا الجذعية amry متلاحمة مجدداً بعد أربعة إلى خمسة أيام من عملية التقسيم. وعندما تبدأ المستعمرات في التلامس، من المهم معرفة ما إذا كانت الخلايا الجذعية amry البشرية تحافظ على تعدد القدرات أو الخاصية الجذعية في المزرعة أم لا.للتحقق من تعدد القدرات للخلايا أثناء استزراع الخلايا الجذعية العصبية، نستخدم مجهر التألق المناعي لفحص تعبير مؤشرات تعدد القدرات، OCT four وSSEA four، في إحدى الآبار. يتم تثبيت طبقنا المكون من ستة آبار وصبغه لكل من OC four وSSEA four. إذا رأينا أن الخلايا مصنفة تألقياً لكلا هذين المؤشرين، فإننا نعلم أن الخلايا الجذعية الجنينية البشرية قد حافظت على تعدد قدراتها ويمكن استخدامها في تجاربنا.لقد شرحنا لكم للتو كيفية زراعة وصيانة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية القوية، بما في ذلك الخلايا الجنينية، والخلايا الليفية، والخلايا المغذية، وفي ظل ظروف خالية من الخلايا المغذية على مادة Matrigel. هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة، وبالتوفيق في تجاربكم.

from-mefs-to-matrigel-3-passaging-hescs-from-matrigel-onto-matrigel

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

في هذا الفيديو كيف نظهر مختبرنا الممرات بشكل روتيني الأشكال البشرية خطوط الخلايا الجذعية الجنينية مع التربسين.

الأشكال الركض الجذعية الجنينية البشرية خلية خطوط مع التربسين

هذا الفيديو يوضح كيفية زراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) على الخلايا الجنينية الماوس الليفية التغذية (MEF). جزء 1 من 3.

من MEFs لMatrigel الأول : hESCs الركض في وجود MEFs

هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا. الجزء 2 من 3.

من MEFs إلى 2 Matrigel : hESCs من تقسيم MEFs على Matrigel

وقد ولدت من تمايز موجهة الى خلايا محددة hESCs الكثير من الاهتمام في مجال الطب التجديدي. ونحن نقدم موجزة ، وخطوة بخطوة لتحديد...

رسم مصير الخلايا الجذعية الجنينية البشرية من خلال تكوين ورم مسخي

هذه المادة سوف تركز على جيل من الأديم الباطن كبدي الإنسان من الجنينية البشرية السكان الخلايا الجذعية.

قوية من الجيل الكبدية مثل خلايا الجنينية البشرية من السكان الخلايا الجذعية

تمليه نوعية الخلايا الليفية الجنينية الماوس (MEFs) عن طريق الضغط على الفأرة اليمين مثل CF-1. وينبغي أن تعدد القدرات الداعمة للMEFs وسائل الإعلام مكيفة (CM) التي تم الحصول عليها من هذه تحتوي على تركيزات الأمثل للActivin، عفريت وTgfβ1 اللازمة لActivin / العقدية ومسارات جمعية جيل المستقبل إلى تعاونية الحفاظ على الذات وتجديد تعدد القدرات.

إعداد خلايا الفأر الجنينية الخلايا الليفية مناسبة للالإنسان التثقيف الجنينية والتي يسببها الخلايا الجذعية المحفزة

على الرغم من الجهود الجارية لثقافات الانتقال إلى شروط التغذية الحرة، والاشتقاق وثقافة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) لا تزال تعتمد إلى حد كبير على الثقافات بالتعاون مع مغذيات الماوس الجنينية (MEFs). هنا، وتبين لنا منهجية جديدة لإزالة بسرعة من مغذيات الثقافات hESC قبل التجريب.

إزالة الخلايا الليفية السريع من الكثافة البشرية العالية الجنينية الخلايا الجذعية الثقافات

هنا، نحن تصف البروتوكول استنادا إلى إعادة برمجة جينية للخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) نحو توليد السكان متجانسة من الأسلاف العضلات والهيكل العظمي أنه في ظل ظروف ثقافة متساهلة تشكيل مجموعات ثلاثية الأبعاد من myofibers مقلص (myospheres)، والتي تلخص السمات البيولوجية البشرية عضلات الهيكل العظمي.

جيل من Myospheres من hESCs بواسطة إعادة برمجة جينية

، بناء على المعرفة من علم الأحياء التنموي والأبحاث المنشورة ، قمنا بتطوير بروتوكول محسن لتوليد الخلايا العصبية الدوبامين A9 في منتصف الدماغ بكفاءة من كل من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية والخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان ، والتي ستكون مفيدة لنمذجة الأمراض والعلاج باستبدال الخلايا لمرض باركنسون.

توجه الدوبامين العصبية التمايز من الخلايا الجذعية المحفزة الإنسان

هنا ، نقدم بروتوكولا لتوليد خلايا الأرومة الغاذية البشرية بكفاءة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات باستخدام البروتين المورفوجينيك للعظام 4 ومثبطات مسارات Activin / Nodal. هذه الطريقة مناسبة للتمايز الفعال للخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات ويمكن أن تولد كميات كبيرة من الخلايا للتلاعب الجيني.

في المختبر تمايز متعددة القدرات البشرية الخلايا الجذعية إلى خلايا الأرومة الغاذية

لتجنب القيود المرتبطة بالمرور الأنزيمي أو الميكانيكي للخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) والخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان (hiPSCs) المزروعة على الخلايا المغذية ، أنشأنا طريقة سريعة وفعالة وفعالة من حيث التكلفة وعالية الغلة لحصاد مستعمرات hESC أو hiPSC التي يتم الاحتفاظ بها على طبقة الخلايا المغذية من الخلايا الليفية القلفة البشرية باستخدام عدم الالتصاق بوساطة EDTA.

تمرير سريع وفعال من حيث التكلفة وخالي من الإنزيم للخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات على الخلايا المغذية عن طريق إزالة الالتصاق بوساطة حمض الإيثيلين ديامينيترايتيك

تعلم تقنية تمرير خلايا الجنين البشرية Pluripotent Stem Cells على Matrigel بدون خلايا مغذية، مع التحقق من تعدد القدرات بالتألق المناعي. هذه الطريقة تدعم نمو الخلايا الجذعية بشكل صحي.

من MEFs لMatrigel 3 : hESCs من الركض على Matrigel Matrigel

استكشف المزيد من الفيديوهات