التصوير T الذاكرة المستجيب الخلايا في الأذن بعد تحريض DTH بالتبني

مرحبا ، أنا ميلاني ماثيو. أنا طالب دراسات عليا في مختبر ميكا هولينز بجامعة كاليفورنيا إيرفين في قسم علم وظائف الأعضاء والفيزياء الحيوية. واليوم ، جنبا إلى جنب مع الدكتورة كريستين بيتون ، سنوضح لكم كيف نصور تأثير الاستجابة أو عدد الخلايا التائية في أذن الفئران.

ستقوم الدكتورة كريستين بيتون أولا بتحفيز فرط الحساسية من النوع المتأخر DTH في أذن الفئران. ثم ننتقل إلى التصوير في الموقع لأذن الفئران بواسطة منظارين مجهريين للصور. قبل يومين قمت بحقن GFP المسمى من الخلايا التائية الخاصة بالألبومين في فرط إلى لويس.

واليوم سأتحدى نفس الجرذ في الأذن. لذلك في الأذن اليمنى سأقوم بحقن الألبومين. وفي الأذن اليسرى سأقوم فقط بحقن بعض PBS.

جرعة الألبومين التي أحقنها هي 20 ميكروغراما في 20 ميكرولتر. والألبومين الذي أستخدمه عبارة عن خليط واحد إلى واحد من Texas Red المسمى من الألبومين وغير المسمى من الألبومين. إذن هذا هو اليمين الذي سأريكم كيف سأقوم بالحقن.

لذلك لدي يدي اليسرى ، أنا أعيم. لذلك خلعت يدي اليسرى القفاز لأتمكن من وضع إصبع واحد تحت الأذن والآخر أعلاه لتمديد الجلد حتى أتمكن من رؤية مكاني بالضبط بالإبرة والدخول بين طبقتي الجلد في الهواء ، وهو رقيق جدا. لذلك أستخدم 27 إبرة قياس للحصول على شيء رفيع للغاية للذهاب إلى هناك.

لذلك إذا قلبتها ، فسترى بالتأكيد أين ذهب تكساس الأحمر وأين ذهب PBS. لذلك نحن الآن بعد 42 ساعة من التحدي هنا وسأستخدم ميكرومتر محمل بنابض لقياس سمك الأذن. لذلك سأقيس كلتا الأذنين ، الأذن اليمنى التي تعرضت للتحدي مع الألبومين والأذن اليسرى التي لم يتم تحديها ، والاختلاف في سمكك سيعطينا فكرة عن شدة الالتهاب.

أوه ، 62 0 60 0 61 ، 0 60 أو 58 أو 57 أو 57. والأذن الأخرى 4 49 4 55 4 48.4 47 4 46 4 50. Hi.So أعطتنا كريستين بيتون للتو الجرذ الذي أزالته بعد قياس استجابة DTH.

لقد نقلناهم إلى هنا على الجليد. هذه هي الأذن اليسرى من الفئران. ونحن هنا الآن في مختبر إيان باركر نقوم بإجراء مجهبين للفوتون.

لذلك سأقوم بإعداد هذه الأذنين لتصوير الفوتون في الموقع. لذلك سأقوم بإعداد إحدى آذان الفئران هنا في قاعدة الأذن. الأنسجة أكثر سمكا ولدينا بعض الشعر الملتصق وسيكون فوضويا بعض الشيء إذا بدأت في قصه.

لذا فإن أول شيء سأفعله هو قص بعض هذا الشعر. أنا فقط أمسك الأذن بلطف. يجعل إصبعي من السهل جدا التحكم في الأنسجة فعليا عندما تمسكها بين إبهامك والسبابة.

أنا أفضل ذلك على استخدام الملقط لأن الملقط ، أنا فقط ، لا أستطيع أن أشعر بما تفعله الأنسجة بسهولة ونحن دائما قلقون بشأن إتلاف الأنسجة. لذلك نريد أن نكون قادرين على الشعور بما نفعله به. لذلك أنا فقط أحب استخدام أصابعي.

هذه هي الطبقة الجلدية التي تتقشر بعيدا عن هنا في أذن الفئران. لذلك بينما كنت أقوم بقص بعض الشعر ، تمكنت من تقليم بعض تلك الأدمة برفق بعيدا عن نوع من التقشير. هناك بعض مقصات التشريح الصغيرة جدا للقيام بذلك ، فقط بعض المقصات المنحنية اللطيفة.

أنت لا تريد أن تضرب الأنسجة ويمكنك العمل في طريقك من قاعدة الأذن إلى الأعلى ، فقط قم بقطع بعض الطبقات الجلدية برفق. لذلك لسنا بحاجة إلى نافذة كبيرة جدا للتصوير. هذه المنطقة هنا ستكون كافية للحصول على بعض الصور الجميلة للخلايا التي تتسلل إلى الأنسجة.

لذا يمكنكم أن تروا أن لدينا بعض الأوعية الدموية السليمة التي لا تزال هنا في قاعدة الأذن وإلى حد كبير حتى طرف الأذن. ستكون هذه المنطقة بأكملها جيدة حقا لتصوير DTH. لذلك سأمضي قدما وأقطع تلك القطعة من الأنسجة التي كشفتها لصنع قطعة صغيرة من الأنسجة يمكننا لصقها في مرحلة التصوير لدينا.

لذا فقط قم بعمل قطع هنا ، اقلبه. يمكنني أن أقطع هنا. لدينا قطعة صغيرة لطيفة من الأنسجة يمكننا تحضيرها على نطاق الفوتونين للتصوير.

هذه زلات غطاء بلاستيكية غير قابلة للكسر نقطعها بحجم أنسجتنا. ثم نقوم بتركيب الأنسجة عليها باستخدام سند الرهان. ثم نقوم بتأمين زلات الغطاء البلاستيكي غير القابلة للكسر باستخدام شحم السيليكون إلى مرحلة التصوير في الموقع.

سآخذ هذه القطعة الصغيرة من الأنسجة الهوائية ، ولها القليل من الانحناء ، لذلك سأضطر إلى تسويتها أثناء لصقها. ليس مثاليا ، لكنه سيعمل. لذا فأنت تأخذ واحدة من هذه الغطاء وتقطعها ، نوعا ما تقدر حجم أذنك وتقطع قليلا أكبر مما تعتقد أنه سيكون.

لتركيب أنسجتنا على زلة الغطاء. نحن نستخدم غراء فائق آمن للأنسجة يسمى رهان طويل. نحصل عليه من 3M ونضع بضع قطرات من ذلك على قسيمة الغلاف الخاصة بنا.

لا أريد أن يكون لدي الكثير. وتريد أيضا التأكد من انتشاره بالتساوي. لذلك سآخذ قطعة صغيرة من ورق العدسة وأستخدم ركنها لفتيل الغراء عبر زلة الغطاء هنا.

الذهاب إلى ذلك قليلا في الغراء الإضافي وبمجرد أن يلامس هذا الغراء الماء ، سوف يعالج. لذلك تريد أن تكون حذرا جدا مع عينة الأنسجة. لذا سأقوم بالتقاط زاوية الأنسجة هنا التي ربما لن نصورها لأنها في الجزء المنحني.

سأقوم بتجفيفه قليلا. الجزء السفلي منه ، فقط على ورق العدسة بحيث يجف كل شيء. وسألمس ركنها ، أنسجة أذن الفئران هذه إلى زلة الغطاء.

ويجب أن يعالج على الفور حيث لمسته. الباقي ، سأقوم فقط بتسطيح قليلا عن طريق الضغط عليه برفق ، حوافه. لذلك نأمل أن نتمكن من الحصول على إطار تصوير جميل.

الآن ما سأفعله هو علاج الغراء عن طريق غمسه في الوسائط. لذلك لمنع الغراء من الوصول إلى أعلى الأنسجة ، نقلبه رأسا على عقب ونغمسه ببطء في زاوية واحدة أولا في خزان الوسائط لدينا ويجب أن يكون عالقا بشكل جيد ويمكننا تصويره في غرفة تصوير الأنسجة. لذا سنقوم الآن بتركيب قطعة الأنسجة التي أعددناها للتصوير في الموقع ، قطعة من أنسجة البيرة على المسرح.

إذن ها هي قطعة الأنسجة الخاصة بنا مع شحم السيليكون في الجزء السفلي منها ، ونضعها برفق في تدفق الوسائط. الآن عالق في الجزء السفلي من المسرح هو شحم السيليكون. قم بتفتيح تدفق الوسائط باستخدام مسبار درجة الحرارة بجانبها مباشرة.

والآن سنركز. لذا سأقوم بتشغيل تركيزنا، الضوء الجديد، قشرتنا الساطعة. لذا سآخذ هدف 20 × وخفضه إلى الغرفة.

تأكد من أنها لا تلمس الأنسجة. انظر من خلال العدسة وركز على أنسجة الأذن. وها هو.

هنا ترى بصيلات الشعر الخضراء ذاتية الفلورسنت في الطبقة الجلدية لأذن الفئران. تحيط بصيلات الشعر هذه بطبقة كثيفة من الكولاجين. هذه طبقة نزيلها لتصوير الفوتون التائي لخلايا ذاكرة الفكتور التائية.

تحجب بصيلات الشعر الفلورية الذاتية الصورة مثل الكولاجين اللامع للطبقة الجلدية العليا. حسنا ، هنا يمكنك أن ترى أن لدينا ناقلات الجنود المدرعة التي تناولت فولين تكساس الأحمر المترافق ، وهي تقع على طول ألياف الكولاجين الزرقاء هذه. ألياف الكولاجين زرقاء بسبب الجيل التوافقي الثاني الذي ندخل فيه في تصوير الفوتون على طول ألياف الكولاجين.

لدينا tcell شديد الحركة. يزحفون صعودا وهبوطا على ألياف الكولاجين ويتفاعلون مع APCs. لذلك في هذا الفيديو رأيت الدكتورة كريستين بيتون ، تحفز DTH بالتبني في فأر لويس.

ثم أظهرنا لك إعداد الأذن للتصوير ، وخلايا الذاكرة المستجيب T المستجيب ، وأذن الفئران وتقنيتي الفوتون للقيام بذلك.