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Analyzing Large Protein Complexes by Structural Mass Spectrometry

Living cells control and regulate their biological processes through the coordinated action of a large number of proteins that assemble themselves into an ...

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T-wave Ion Mobility-mass Spectrometry: Basic Experimental Procedures for Protein Complex Analysis

Ion mobility (IM) is a method that measures the time taken for an ion to travel through a pressurized cell under the influence of a weak electric field. ...

Weizmann Institute of Science

&#x6700;&#x8FD1;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684; Kv1.1/Kvbeta &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;syntaxin 1A&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; K(+) &#x6E20;&#x9053;&#x548C;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#xFF0C;&#x5982;&#x90A3;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25 &#x53EF;&#x80FD;&#x53C2;&#x4E0E;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x4E0E; syntaxin 1A &#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E92;&#x52A8;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86; Kv1.1/Kvbeta1.1 &#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5FEB;&#x901F;&#x706D;&#x6D3B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; G &#x86CB;&#x767D; betagamma &#x4E9A;&#x57FA;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x52A0;&#x5F3A;&#x7684;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684; syntaxin 1A&#x3002;&#x5728;&#x573A;&#x5408;&#x5242;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; betagamma &#x4E9A;&#x57FA;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; syntaxin 1A &#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x52A0;&#x5F3A;&#x706D;&#x6D3B;&#x81F4; beta(1)gamma(2) &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x8FC7;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; syntaxin &#x6216;&#x5176;&#x6E05;&#x7406;&#x5728;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x649E;&#x540E;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A; Kv1.1 &#x7684; N &#x603B;&#x7AD9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8111; synaptosomal &#x548C;&#x91CD;&#x7EC4; syntaxin 1A&#xFF0C;&#x5E76;&#x540C;&#x65F6;&#x7ED1;&#x5B9A; beta(1)gamma(2) &#xFF1B;beta(1)gamma(2) &#x7684;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#xFF0C;syntaxin 1A&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7531; syntaxin &#x548C; G &#x86CB;&#x767D; betagamma &#x4E9A;&#x57FA;&#x540C;&#x65F6;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92; Kv &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5176;&#x706D;&#x6D3B;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x8111;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; K + &#x901A;&#x9053;&#x7531; syntaxin 1A &#x7684;&#x8C03;&#x5236;&#x8981;&#x6C42;&#x4E0E;&#x901A;&#x9053;&#x7269;&#x7406;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; Gbetagamma&#x3002;

Recently we suggested that direct interactions between voltage-gated K(+) channels and proteins of the exocytotic machinery, such as those observed between the Kv1.1/Kvbeta channel, syntaxin 1A, and SNAP-25 may be involved in neurotransmitter release. Furthermore, we demonstrated that the direct interaction with syntaxin 1A enhances the fast inactivation of Kv1.1/Kvbeta1.1 in oocytes. Here we show that G-protein betagamma subunits play a crucial role in the enhancement of inactivation by syntaxin 1A. The effect caused by overexpression of syntaxin 1A is eliminated in the presence of chelators of endogenous betagamma subunits in the whole cell and at the plasma membrane. Conversely, enhancement of inactivation caused by overexpression of beta(1)gamma(2) subunits is eliminated upon knock-down of endogenous syntaxin or its scavenging at the plasma membrane. We further show that the N terminus of Kv1.1 binds brain synaptosomal and recombinant syntaxin 1A and concomitantly binds beta(1)gamma(2); the binding of beta(1)gamma(2) enhances that of syntaxin 1A. Taken together, we suggest a mechanism whereby syntaxin and G protein betagamma subunits interact concomitantly with a Kv channel to regulate its inactivation.

Modulation of a brain voltage-gated K+ channel by syntaxin 1A requires the physical interaction of Gbetagamma with the channel.

R&eacute;cemment, nous avons sugg&eacute;r&eacute; que les interactions directes entre les canaux tension-k (+) et les prot&eacute;ines des machines exocytotique, telles que celles observ&eacute;es entre le canal de Kv1.1/Kvbeta, syntaxine 1 a, et SNAP-25 pourrait &ecirc;tre impliqu&eacute;e dans la lib&eacute;ration des neurotransmetteurs. En outre, nous avons d&eacute;montr&eacute; que l&#39;interaction directe avec la syntaxine 1 a am&eacute;liore l&#39;inactivation rapide du Kv1.1/Kvbeta1.1 dans les ovocytes. Ici, nous montrons que sous-unit&eacute;s betagamma G-prot&eacute;ine jouent un r&ocirc;le crucial dans l&#39;am&eacute;lioration de l&#39;inactivation de la syntaxine 1 a. L&#39;effet provoqu&eacute; par la surexpression de la syntaxine 1 a est &eacute;limin&eacute;e en pr&eacute;sence de ch&eacute;lateurs des sous-unit&eacute;s betagamma endog&egrave;ne dans les cellules enti&egrave;res et &agrave; la membrane plasmique. &Agrave; l&#39;inverse, am&eacute;lioration d&#39;inactivation caus&eacute;e par la surexpression des sous-unit&eacute;s beta(1)gamma(2) est &eacute;limin&eacute;e d&egrave;s d&eacute;montable de la syntaxine endog&egrave;ne ou son nettoyage &agrave; la membrane plasmique. Nous montrons que l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de Kv1.1 lie cerveau v&eacute;sicules synaptiques ou recombinante syntaxine 1 a et en m&ecirc;me temps que lie beta(1)gamma(2) ; la liaison de beta(1)gamma(2) renforce celle de la syntaxine 1 a. Ensemble, nous sugg&egrave;rent un m&eacute;canisme par lequel syntaxine et sous-unit&eacute;s de betagamma G prot&eacute;ines interagissent en concomitance avec un canal de Kv pour r&eacute;glementer son inactivation.

Modulation d&#39;un cerveau voltage-d&eacute;pendants canal K + de la syntaxine 1 a requiert l&#39;interaction physique de Gbetagamma avec le canal.

Modulation des Gehirns spannungsabh&#xE4;ngigen K +-Kanal durch Syntaxin 1A erfordert die physikalische Wechselwirkung zwischen Gbetagamma mit dem Kanal.

Recentemente abbiamo suggerito che interazioni dirette tra tensione-gated canali K(+) e proteine della macchina questo, come quelle osservano tra il canale di Kv1.1/Kvbeta, Sintaxina 1A, e SNAP-25 possono essere coinvolti nel rilascio di neurotrasmettitore. Inoltre, abbiamo dimostrato che l&#39;interazione diretta con 1A Sintaxina migliora l&#39;inattivazione veloce di Kv1.1/Kvbeta1.1 in ovociti. Qui vi mostriamo che subunit&agrave; G-proteina betagamma giocano un ruolo cruciale nella valorizzazione della inattivazione di Sintaxina 1A. L&#39;effetto causato dalla sovraespressione di Sintaxina 1A &egrave; eliminato in presenza di chelanti di subunit&agrave; betagamma endogena l&#39;intera cellula e la membrana plasmatica. Al contrario, valorizzazione di inattivazione causata dalla sovraespressione di subunit&agrave; beta(1)gamma(2) &egrave; eliminato su knock-down di Sintaxina endogeno o sua evacuazione alla membrana del plasma. Mostriamo ulteriormente che il capolinea N di Kv1.1 associa cervello synaptosomal e ricombinante Sintaxina 1A e simultaneamente si lega beta(1)gamma(2); l&#39;associazione di beta(1)gamma(2) migliora quella di Sintaxina 1A. Presi insieme, consigliamo un meccanismo per cui Sintaxina e subunit&agrave; G proteina betagamma interagire simultaneamente con un canale Kv a regolare la sua inattivazione.

Modulazione di un cervello canale voltaggio-dipendente K + da 1A Sintaxina richiede l&#39;interazione fisica di Gbetagamma con il canale.

&#x6700;&#x8FD1;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a&#x3001;Kv1.1/Kvbeta &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x9593;&#x96FB;&#x5727;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x9593;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7; 25 &#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Kv1.1/Kvbeta1.1 &#x306E;&#x9AD8;&#x901F;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; betagamma &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x306E; overexpression &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E; betagamma &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x5168;&#x4F53;&#x3068;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306E;&#x30AD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5264;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x9664;&#x53BB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;&#x5F37;&#x5316; beta(1)gamma(2) &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; overexpression &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x6E05;&#x6383;&#x6642;&#x306B;&#x9664;&#x53BB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Kv1.1 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x8133;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x4ED8;&#x968F;&#x3057;&#x3066; beta(1)gamma(2) &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;;beta(1)gamma(2) &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;whereby &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; betagamma &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x305D;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;Kv &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x4ED8;&#x968F;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5909;&#x8ABF;&#x8133;&#x96FB;&#x4F4D; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068; Gbetagamma &#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; K(+) &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xBC0F; exocytotic &#xAE30;&#xACC4; &#xB4F1;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC04;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; syntaxin 1A, Kv1.1/Kvbeta &#xCC44;&#xB110; &#xC0AC;&#xC774; &#xAD00;&#xCC30; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; syntaxin 1a&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xD5A5;&#xC0C1; oocytes&#xC5D0;&#xC11C; kv1.1/kvbeta1.1&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; betagamma subunits syntaxin 1a&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Syntaxin 1a&#xC758; overexpression&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC804;&#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD; betagamma subunits chelators &#xC874;&#xC7AC; &#xC81C;&#xAC70; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, beta(1)gamma(2) subunits&#xC758; overexpression&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC0DD; syntaxin &#xB610;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0;&#xB294; &#xCCAD;&#xC18C;&#xC758; &#xB179; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xC2DC; &#xC81C;&#xAC70; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; kv1.1&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xB1CC; synaptosomal &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; syntaxin 1A &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; concomitantly &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; beta(1)gamma(2); &#xD45C;&#xC2DC; beta(1)gamma(2)&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; syntaxin 1a&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; syntaxin &#xBC0F; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; betagamma subunits &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; concomitantly Kv &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB1CC; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; K + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; syntaxin 1a&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xCC44;&#xB110; Gbetagamma&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD574;&#xC57C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Recientemente nos sugiri&oacute; que interacciones directas entre canales voltaje-bloqueados del k y prote&iacute;nas de la maquinaria exocit&oacute;tico, como los observaron entre el canal de Kv1.1/Kvbeta, sintaxina 1A, y SNAP-25 puede estar involucrados en la liberaci&oacute;n de neurotransmisores. Adem&aacute;s, hemos demostrado que la interacci&oacute;n directa con la sintaxina 1A realza la inactivaci&oacute;n r&aacute;pida de Kv1.1/Kvbeta1.1 en ovocitos. Aqu&iacute; mostramos que subunidades de prote&iacute;na G betagamma desempe&ntilde;an un papel crucial en la mejora de la inactivaci&oacute;n por sintaxina 1A. Se elimina el efecto causado por la sobreexpresi&oacute;n de la sintaxina 1A en presencia de quelantes de subunidades betagamma end&oacute;genos en la c&eacute;lula entera y en la membrana plasm&aacute;tica. Por el contrario, mejora de inactivaci&oacute;n causada por la sobreexpresi&oacute;n de subunidades beta(1)gamma(2) se elimina a la precipitaci&oacute;n de la sintaxina end&oacute;geno o su borrado en la membrana plasm&aacute;tica. Adem&aacute;s demostramos que N terminal de Kv1.1 une el cerebro synaptosomal y recombinante sintaxina 1A y concomitante une beta(1)gamma(2); la Uni&oacute;n de beta(1)gamma(2) mejora de sintaxina 1A. Tomados en conjunto, nos sugieren un mecanismo por el que la sintaxina y subunidades de la prote&iacute;na de G betagamma interactuan concomitante con un canal de Kv para regular su inactivaci&oacute;n.

Modulaci&oacute;n de un voltage-gated K + canal cerebro por sintaxina 1A requiere la interacci&oacute;n f&iacute;sica de Gbetagamma con el canal.

&#x4EE5;&#x524D;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; K + &#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x5206;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x6D89;&#x53CA; Kv2.1 &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x666E;&#x904D;&#x5B58;&#x5728;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x7684;&#x6574;&#x6D41; K + &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; syntaxin 1A &#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x5728;&#x80F0;&#x5C9B; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5C55;&#x793A; Kv2.1 K + &#x7535;&#x6D41;&#x8C03;&#x5236;&#x7684; syntaxin 1A &#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6F14;&#x793A;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; co &#x6C89;&#x6DC0;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7269;&#x7406;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; Kv2.1 &#x548C; syntaxin 1A&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5206;&#x6790;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x5E94; co-&#x6C89;&#x6DC0;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7535;&#x6781;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x7279;&#x70B9;&#x7684;&#x6D47;&#x6CE8; syntaxin 1A/&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25 &#x7EC4;&#x88C5;/&#x62C6;&#x5378;&#x6709;&#x5173; Kv2.1 &#x901A;&#x9053;&#x4E0A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5F71;&#x54CD; &#xFF08;&#x76EE;&#x6807; (t)-&#x7F51;&#x7F57;) &#x590D;&#x6742;&#x3002;Syntaxin 1A &#x72EC;&#x81EA;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Kv2.1 &#x7684;&#x5F3A;&#x70C8;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x6781;&#x5316;&#x7535;&#x4F4D;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0E;&#x5931;&#x6D3B;&#x3002;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25 &#x72EC;&#x81EA;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Kv2.1 &#x7684;&#x5F31;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x672C;&#x8EAB;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25 syntaxin 1A &#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0E;&#x5BF9;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0E;&#x5931;&#x6D3B;&#x7684; syntaxin 1A &#x4EC5;&#x5F71;&#x54CD;&#x4ECE;&#x800C;&#x6D88;&#x9664; t &#x7F51;&#x7F57;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x800C;&#x4E14;&#xFF0C;&#x706D;&#x6D3B;&#x8F6C;&#x5411;&#x76F8;&#x53CD;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#xFF0C;&#x671D;&#x9000;&#x504F;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x5176;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x548C;&#x901F;&#x7387;&#x5F31;&#x6BD2;&#x75AB;&#x82D7;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x80DE;&#x7531; Kv2.1 &#x901A;&#x9053;&#x6D47;&#x6CE8;&#x7684; t &#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x8026;&#x5408;&#x8FDB;&#x884C;&#x5FAE;&#x8C03;&#x3002;

&#x76EE;&#x6807;&#x5708;&#x5957;&#x4E0E; Kv2.1 &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6A21;&#x6001;&#x8C03;&#x8282;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x5931;&#x6D3B;&#x95E8;&#x3002;

Previously we suggested that interaction between voltage-gated K+ channels and protein components of the exocytotic machinery regulated transmitter release. This study concerns the interaction between the Kv2.1 channel, the prevalent delayed rectifier K+ channel in neuroendocrine and endocrine cells, and syntaxin 1A and SNAP-25. We recently showed in islet beta-cells that the Kv2.1 K+ current is modulated by syntaxin 1A and SNAP-25. Here we demonstrate, using co-immunoprecipitation and immunocytochemistry analyses, the existence of a physical interaction in neuroendocrine cells between Kv2.1 and syntaxin 1A. Furthermore, using concomitant co-immunoprecipitation from plasma membranes and two-electrode voltage clamp analyses in Xenopus oocytes combined with in vitro binding analysis, we characterized the effects of these interactions on the Kv2.1 channel gating pertaining to the assembly/disassembly of the syntaxin 1A/SNAP-25 (target (t)-SNARE) complex. Syntaxin 1A alone binds strongly to Kv2.1 and shifts both activation and inactivation to hyperpolarized potentials. SNAP-25 alone binds weakly to Kv2.1 and probably has no effect by itself. Expression of SNAP-25 together with syntaxin 1A results in the formation of t-SNARE complexes, with consequent elimination of the effects of syntaxin 1A alone on both activation and inactivation. Moreover, inactivation is shifted to the opposite direction, toward depolarized potentials, and its extent and rate are attenuated. Based on these results we suggest that exocytosis in neuroendocrine cells is tuned by the dynamic coupling of the Kv2.1 channel gating to the assembly status of the t-SNARE complex.

Direct interaction of target SNAREs with the Kv2.1 channel. Modal regulation of channel activation and inactivation gating.

Pr&eacute;c&eacute;demment, nous avons sugg&eacute;r&eacute; que l&#39;interaction entre les canaux K + voltage-d&eacute;pendants et les constituants prot&eacute;iques de la machinerie exocytotique r&eacute;glement&eacute;es lib&eacute;ration des transmetteurs. Cette &eacute;tude porte sur l&#39;interaction entre le canal de Kv2.1, le canal K + &agrave; rectification retard&eacute;e pr&eacute;valente dans les cellules neuro-endocrinien et du syst&egrave;me endocrinien et la syntaxine 1 a et SNAP-25. R&eacute;cemment, nous avons montr&eacute; dans les cellules b&ecirc;ta des &icirc;lots que le courant Kv2.1 K + est modul&eacute; par la syntaxine 1 a et SNAP-25. Ici, nous montrons, &agrave; l&#39;aide de co-immunopr&eacute;cipitation et immunocytochimie analyse, l&#39;existence d&#39;une interaction physique dans les cellules neuroendocrines, entre Kv2.1 et la syntaxine 1 a. En outre, l&#39;utilisation concomitante de co-immunopr&eacute;cipitation des membranes plasmiques et les analyses de pince de tension deux &eacute;lectrodes dans combin&eacute;e &agrave; une analyse de liaison in vitro des ovocytes de Xenopus, les auteurs ont caract&eacute;ris&eacute; les effets de ces interactions sur le canal de Kv2.1 blocage concernant le montage/d&eacute;montage de la syntaxine 1 a/SNAP-25 (cible (t)-SNARE) complexes. Syntaxine 1 a seul se lie fortement aux Kv2.1 et d&eacute;place l&#39;activation et l&#39;inactivation de potentiels hyperpolaris&eacute;s. SNAP-25 seul se lie faiblement &agrave; Kv2.1 et n&#39;a probablement pas d&#39;effet en soi. Expression de la SNAP-25 ainsi que de la syntaxine 1 a conduit &agrave; la formation de complexes de t-SNARE, avec &eacute;limination cons&eacute;quente des effets sur l&#39;activation et l&#39;inactivation de la syntaxine 1 a lui seul. En outre, l&#39;inactivation est d&eacute;plac&eacute;e vers la direction oppos&eacute;e, vers des potentiels d&eacute;polaris&eacute;s, et son &eacute;tendue et les taux sont att&eacute;nu&eacute;s. Bas&eacute; sur ces r&eacute;sultats, nous sugg&eacute;rons que l&#39;exocytose dans les cellules neuroendocrines est r&eacute;gl&eacute;e par le couplage dynamique entre le blocage de canal Kv2.1 &agrave; l&#39;&eacute;tat de l&#39;assemblage du complexe t-SNARE.

Interaction directe des collets de cible avec le canal de Kv2.1. R&egrave;glement modal d&#39;activation de canal et le cloisonnement de l&#39;inactivation.

Direkte Interaktion von Ziel-SNAREs mit dem Kv2.1-Kanal. Modal Regulierung der Aktivierung und Inaktivierung Kanal Gating.

In precedenza abbiamo suggerito che interazione tra canali K + voltaggio-dipendenti e i componenti delle proteine di questo macchinario regolato rilascio del trasmettitore. Questo studio riguarda l&#39;interazione tra il canale di Kv2.1, il canale prevalente ritardato raddrizzatore K + nelle cellule endocrine e neuroendocrine e 1A Sintaxina e SNAP-25. Abbiamo recentemente mostrato in beta-cellule dell&#39;isolotto che la Kv2.1 K + corrente &egrave; modulata da 1A Sintaxina e SNAP-25. Qui dimostriamo, usando co-immunoprecipitazione e immunocitochimica analizza, l&#39;esistenza di un&#39;interazione fisica nelle cellule neuroendocrine tra Kv2.1 e Sintaxina 1A. Inoltre, usando co-immunoprecipitazione concomitante da plasma membrane e due elettrodi tensione pinza analisi in Xenopus oocytes combinato con analisi di binding in vitro, abbiamo caratterizzato gli effetti di queste interazioni sul canale Kv2.1 gating relative al montaggio/smontaggio di Sintaxina 1A/SNAP-25 (target (t)-SNARE) complesso. Sintaxina 1A sola si lega fortemente al Kv2.1 e spostamenti sia attivazione ed inattivazione di hyperpolarized potenziali. SNAP-25 da solo si lega debolmente al Kv2.1 e probabilmente non ha alcun effetto di per s&eacute;. Espressione di SNAP-25 insieme a Sintaxina 1A provoca la formazione di complessi t-SNARE, con conseguente eliminazione degli effetti di Sintaxina 1A sola sull&#39;attivazione e la disattivazione. Inoltre, inattivazione &egrave; spostato nella direzione opposta, verso potenziali depolarizzati, e sua estensione e la frequenza sono attenuate. Sulla base di questi risultati vi consigliamo quello esocitosi di cellule neuroendocrine &egrave; sintonizzato dall&#39;accoppiamento dinamico del Kv2.1 canale gating lo status di assemblaggio del complesso t-SNARE.

Interazione diretta delle insidie di destinazione con il canale di Kv2.1. Regolamento modale del canale attivazione ed inattivazione gating.

&#x4EE5;&#x524D;&#x96FB;&#x5727;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6210;&#x5206;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x898F;&#x5236;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76; kv2.1&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x3068;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3067;&#x6D41;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x9045;&#x5EF6;&#x6574;&#x6D41; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25 &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1; Kv2.1 K + &#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7; 25 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x81B5;&#x5CF6; &beta; &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3082;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;co &#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5206;&#x6790;, &#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE; Kv2.1 &#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x9593;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;in vitro &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3068; 2 &#x96FB;&#x6975;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4F75;&#x7528; co &#x3092;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a/&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25 &#x306E;&#x7D44;&#x7ACB;/&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x4FC2;&#x308B;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; kv2.1 &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7279;&#x5FB4; (&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; (t)-&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;) &#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306F; Kv2.1 &#x306B;&#x5F37;&#x304F;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x904E;&#x5206;&#x6975;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3092;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25 &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x5F31; Kv2.1 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x52B9;&#x679C;&#x81EA;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7; 25 &#x306E;&#x5F0F;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a t SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x5E30;&#x7D50;&#x9664;&#x53BB;&#x3057;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x7121;&#x504F;&#x5149;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x53CD;&#x5BFE;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x6E1B;&#x8870;&#x306F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B; Kv2.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; t SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x7ACB;&#x9032;&#x6357;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3092;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x3001;kv2.1 &#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x306F;&#x3002;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C0;&#x30EB;&#x898F;&#x5236;&#x3002;

&#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; K + &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; exocytotic &#xAE30;&#xACC4;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC1A1;&#xC2E0;&#xAE30; &#xBC29;&#xCD9C; &#xADDC;&#xC81C; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; Kv2.1 &#xCC44;&#xB110; neuroendocrine &#xBC0F; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; syntaxin 1a&#xC5D0; &#xB9CC;&#xC5F0;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xB41C; &#xC815;&#xB958;&#xAE30; K + &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC6B0;&#xB824;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC12C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Kv2.1 K + &#xC804;&#xB958;&#xB294; syntaxin 1A &#xBC0F; &#xC2A4;&#xB0C5;-25&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;, &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation &#xBC0F; immunocytochemistry&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D;, Kv2.1 &#xBC0F; syntaxin 1A &#xC0AC;&#xC774; neuroendocrine &#xC140;&#xC5D0; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; syntaxin 1A/&#xC2A4;&#xB0C5;-25&#xC758; &#xC870;&#xB9BD;/&#xBD84;&#xD574;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; Kv2.1 &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xBC0F; 2 &#xC804;&#xADF9; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xBC18; co immunoprecipitation Xenopus oocytes &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, (&#xB300;&#xC0C1; (t)-&#xC62C; &#xBB34;) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;. Syntaxin 1A &#xD63C;&#xC790; kv2.1&#xB97C; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; hyperpolarized &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC774;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xD63C;&#xC790; kv2.1&#xC744; &#xC57D;&#xD558;&#xAC8C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xC544;&#xB9C8; &#xB2E8;&#xB3C5;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Syntaxin 1A &#xD568;&#xAED8; &#xC2A4;&#xB0C5;-25&#xC758; &#xC2DD; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; syntaxin 1A &#xD63C;&#xC790;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xAC70;&#xC640; t-&#xC62C; &#xBB34; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; depolarized &#xD6C4;&#xBCF4;&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xBC18;&#xB300; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xBC94;&#xC704;&#xC640; &#xC18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC1E0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8; exocytosis neuroendocrine &#xC140;&#xC5D0; t-&#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; Kv2.1 &#xCC44;&#xB110; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xACB0;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Kv2.1 &#xCC44;&#xB110; &#xB300;&#xC0C1; Snares&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC758; &#xBAA8;&#xB2EC; &#xADDC;&#xC81C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Previamente nos sugiere que la interacci&oacute;n entre canales voltaje-bloqueados K + y componentes proteicos de la maquinaria exocit&oacute;tico regulada liberaci&oacute;n de transmisor. Este estudio refiere a la interacci&oacute;n entre el canal de Kv2.1, el canal rectificador retraso frecuente K + en las c&eacute;lulas neuroendocrinas y endocrinas y sintaxina 1A y SNAP-25. Recientemente mostramos en el islote de las c&eacute;lulas beta que la corriente de Kv2.1 K + es modulada por la sintaxina 1A y SNAP-25. Aqu&iacute; demostramos, utilizando co-inmunoprecipitaci&oacute;n e immunocytochemistry analiza, la existencia de una interacci&oacute;n f&iacute;sica en c&eacute;lulas neuroendocrinas entre Kv2.1 y sintaxina 1A. Adem&aacute;s, utilizando co-inmunoprecipitaci&oacute;n concomitante de las membranas de plasma y los an&aacute;lisis de abrazadera del voltaje de dos electrodos en ovocitos de Xenopus junto con an&aacute;lisis de Uni&oacute;n in vitro, hemos caracterizado los efectos de estas interacciones en el canal de Kv2.1 relacionados con el montaje/desmontaje de la sintaxina 1A/SNAP-25 que bloquean (objetivo (t)-trampa) complejo. Sintaxina 1A solo se une fuertemente al Kv2.1 y cambios tanto de activaci&oacute;n e inactivaci&oacute;n hyperpolarized potenciales. SNAP-25 solo se une d&eacute;bilmente a Kv2.1 y probablemente no tiene ning&uacute;n efecto por s&iacute; mismo. Expresi&oacute;n del SNAP-25 junto con sintaxina 1A da lugar a la formaci&oacute;n de complejos de t-SNARE, con la consiguiente eliminaci&oacute;n de los efectos de la sintaxina 1A solo en tanto activaci&oacute;n e inactivaci&oacute;n. Por otra parte, inactivaci&oacute;n se desplaza a la direcci&oacute;n opuesta, hacia despolarizados potenciales, y su medida y tasa se aten&uacute;an. Basado en estos resultados sugieren eso exocitosis en las c&eacute;lulas neuroendocrinas est&aacute; sintonizado por el acoplamiento din&aacute;mico de la compuerta de canal Kv2.1 el estatuto de la Asamblea del complejo t-SNARE.

Interacci&oacute;n directa de las trampas del destino con el canal de Kv2.1. Regulaci&oacute;n modal de activaci&oacute;n del canal y compuerta de inactivaci&oacute;n.

Kv2.1&#x3001; &#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x666E;&#x904D;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x6574;&#x6D41; K(+) &#x901A;&#x9053;&#x4EE5;&#x524D;&#x63D0;&#x51FA;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x96C6;&#x56E2;&#x5728;&#x80F0;&#x5C9B; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC; syntaxin 1A (Syx) &#x548C;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N-ethylmaleimide-&#x654F;&#x611F;&#x56E0;&#x5B50;&#x86CB;&#x767D;-25 &#x9644;&#x4EF6; &#xFF08;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8EAB;&#x4F53;&#x4E2D;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; Kv2.1&#x3001; Syx &#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25 Kv2.1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0E;&#x5931;&#x6D3B;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5176;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5C5E;&#x4E8E; Syx/&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25 (t-&#x7F51;&#x7F57;) &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC4;&#x88C5;/&#x62C6;&#x5378;&#x3002;&#x5728;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x7ADE;&#x4E89;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x80BD;&#x4F7F;&#x7528;&#x901A;&#x9053;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x65F6;&#x6CE8;&#x5165;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x5DF2;&#x7ECF; coexpressing &#x4E0E; Kv2.1 Syx Syx Kv2.1 &#x901A;&#x9053;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x7269;&#x7406;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; Syx &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x56E0;&#x679C;&#x5173;&#x7CFB;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#xFF1A; Syx &#x7ED1;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;&#x4E0A;&#x7684; N &#x578B;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4E00;&#x4E2A;&#x80BD;&#x548C; Kv2.1 C &#x603B;&#x7AD9; Syx &#x7ED1;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;&#x5BF9;&#x5E94;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x591A;&#x80BD;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x591A;&#x80BD;&#x4E0A; Kv2.1&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x7A33;&#x6001;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684;&#x8D85;&#x6781;&#x5316;&#x8F6C;&#x79FB;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B; Kv2.1 Syx &#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x6307;&#x5411; C &#x603B;&#x7AD9;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x98A0;&#x5012; Syx &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;Syx &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x662F;&#x7531;&#x90E8;&#x5206;&#x5220;&#x9664; C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x6D88;&#x6563;&#x4E86;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;t &#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x663E;&#x793A;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7684; Kv2.1 C &#x603B;&#x7AD9;&#x548C; Kv2.1 &#x7684;&#x706D;&#x6D3B;&#x6548;&#x679C;&#x53CA;&#x5176;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E86;&#x6D88;&#x6563;&#x7684; C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x5220;&#x9664;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Syx &#x548C; t &#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x7269;&#x7406;&#x4EA4;&#x4E92; Kv2.1 &#x7684; C &#x603B;&#x7AD9;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4E86;&#x822A;&#x9053;&#x6574;&#x6CBB;&#x3002;

Syntaxin 1A &#x548C; syntaxin 1A/&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N ethylmaleimide &#x654F;&#x611F;&#x56E0;&#x5B50;-25 (t-&#x7F51;&#x7F57;) &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x4EA4;&#x4E92;&#x901A;&#x9053;&#x7684; C &#x603B;&#x7AD9;&#x53D7;&#x5230; Kv2.1 &#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x5931;&#x6D3B;&#x3002;

Kv2.1, the prevalent delayed-rectifier K(+) channel in neuroendocrine and endocrine cells, was suggested previously by our group to be modulated in islet beta-cells by syntaxin 1A (Syx) and soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein-25 (SNAP-25). We also demonstrated physical interactions in neuroendocrine cells between Kv2.1, Syx, and SNAP-25, characterized their effects on Kv2.1 activation and inactivation in Xenopus laevis oocytes, and suggested that they pertain to the assembly/disassembly of the Syx/SNAP-25 (t-SNARE) complex. In the present work, we established the existence of a causal relationship between the physical and the functional interactions of Syx with the Kv2.1 channel using three different peptides that compete with the channel for binding of Syx when injected into oocytes already coexpressing Syx with Kv2.1 in the plasma membrane: one peptide corresponding to the Syx-binding region on the N-type Ca(2+) channel, and two peptides corresponding to Syx-binding regions on the Kv2.1 C terminus. All peptides reversed the effects of Syx on Kv2.1, suggesting that the hyperpolarizing shifts of the steady-state inactivation and activation of Kv2.1 caused by Syx result from cell-surface protein-protein interactions and point to participation of the C terminus in such an interaction. In line with these findings, the effects of Syx were dissipated by partial deletions of the C terminus. Furthermore, the t-SNARE complex was shown to bind to the Kv2.1 C terminus, and its effects on the inactivation of Kv2.1 were dissipated by partial deletions of the C terminus. Taken together, these findings suggest that physical interactions of both Syx and the t-SNARE complex with the C terminus of Kv2.1 are involved in channel regulation.

Kv2.1 channel activation and inactivation is influenced by physical interactions of both syntaxin 1A and the syntaxin 1A/soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor-25 (t-SNARE) complex with the C terminus of the channel.

Kv2.1, le canal de k (+)-redresseur retard&eacute; pr&eacute;valent dans les cellules neuro-endocrinien et du syst&egrave;me endocrinien, a &eacute;t&eacute; propos&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment par notre groupe pour &ecirc;tre modul&eacute; en cellules b&ecirc;ta des &icirc;lots de la syntaxine 1 a (Syx) et soluble sensible au N-&eacute;thylmal&eacute;imide facteur de fixation prot&eacute;ique-25 (SNAP-25). Nous avons aussi d&eacute;montr&eacute;es interactions physiques dans les cellules neuroendocrines entre Kv2.1 et Syx SNAP-25, caract&eacute;ris&eacute; leurs effets sur les Kv2.1 d&#39;activation et l&#39;inactivation dans les ovocytes de Xenopus laevis et a sugg&eacute;r&eacute; que ce qui a trait &agrave; l&#39;assemblage/d&eacute;sassemblage de la Syx/SNAP-25 (t-SNARE) complexes. Dans le pr&eacute;sent travail, nous avons &eacute;tabli l&#39;existence d&#39;un lien de causalit&eacute; entre la physique et les interactions fonctionnelles entre Syx avec le canal de Kv2.1 &agrave; l&#39;aide de trois diff&eacute;rents peptides qui sont en concurrence avec le canal pour la liaison de Syx lorsqu&#39;inject&eacute; dans les ovocytes co-exprimant d&eacute;j&agrave; Syx avec Kv2.1 dans la membrane plasmique : un peptide correspondant &agrave; la r&eacute;gion de Syx-fixation sur le canal de type N heterodimericet deux peptides correspondant aux r&eacute;gions de Syx-fixation &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; C de Kv2.1. Tous les peptides a renvers&eacute; les effets de Syx sur Kv2.1, sugg&eacute;rant que les d&eacute;placements hyperpolarisants de l&#39;inactivation de l&#39;&eacute;quilibre et l&#39;activation de Kv2.1 caus&eacute;e par Syx r&eacute;sultent d&#39;interactions prot&eacute;ine-prot&eacute;ine de surface cellulaire et pointent sur la participation de la partie C terminale dans une telle interaction. Conform&eacute;ment &agrave; ces conclusions, les effets de Syx a &eacute;t&eacute; dissip&eacute;es par d&eacute;l&eacute;tion partielle de la partie C terminale. En outre, le complexe t-SNARE a montr&eacute; &agrave; lier &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; C Kv2.1 et ses effets sur l&#39;inactivation des Kv2.1 ont &eacute;t&eacute; dissip&eacute;s par d&eacute;l&eacute;tion partielle de la partie C terminale. Pris ensemble, ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les interactions physiques de Syx et le complexe t-caisse claire avec la partie C terminale de Kv2.1 interviennent dans la r&eacute;gulation des canaux.

L&#39;inactivation et l&#39;activation de canal Kv2.1 est influenc&eacute;e par des interactions physiques de la syntaxine 1 a et le complexe de facteur-25 (t-SNARE) syntaxine 1 a/soluble sensible au N-&eacute;thylmal&eacute;imide avec le C-terminale de la cha&icirc;ne.

Kv2.1-Kanal-Aktivierung und Inaktivierung durch physikalische Wechselwirkungen sowohl Syntaxin 1A und Syntaxin 1A/soluble N-Ethylmaleimid-sensitiver Faktor-25 (t-SNARE)-Komplex mit dem C-Terminus des Kanals beeinflusst.

Kv2.1, il canale K(+) in ritardo-raddrizzatore prevalente nelle cellule endocrine e neuroendocrine, &egrave; stato suggerito in precedenza dal nostro gruppo per essere modulata in beta-cellule dell&#39;isolotto di Sintaxina 1A (Syx) e solubile N-ethylmaleimide-sensibili al fattore accessorio proteina-25 (SNAP-25). Abbiamo anche dimostrate interazioni fisiche in cellule neuroendocrine tra Kv2.1, Syx e SNAP-25, caratterizzato i loro effetti su Kv2.1 attivazione ed inattivazione negli ovociti di Xenopus laevis e sugger&igrave; che si riferiscono al montaggio/smontaggio del Syx/SNAP-25 (t-SNARE) complesso. Nel presente lavoro, abbiamo stabilito l&#39;esistenza di un nesso causale tra il fisico e le interazioni funzionali di Syx con il canale di Kv2.1 utilizzando tre diversi peptidi che competono con il canale per l&#39;associazione di Syx Quando iniettato in ovociti gi&agrave; coexpressing Syx con Kv2.1 nella membrana del plasma: un peptide corrispondente alla regione Syx-associazione sul canale N-tipo Ca(2+)e due peptidi corrispondenti alle regioni Syx-associazione Kv2.1 C terminale. Tutti i peptidi invertito gli effetti di Syx Kv2.1, suggerendo che i turni hyperpolarizing di inattivazione stazionario e l&#39;attivazione di Kv2.1 causati da Syx risultato di interazioni proteina-proteina di superficie cellulare e puntare alla partecipazione del C terminale in tale interazione. In linea con questi risultati, gli effetti della Syx erano dissipati da delezioni parziali di C terminale. Inoltre, il complesso t-SNARE &egrave; stato mostrato da associare al capolinea Kv2.1 C e suoi effetti sull&#39;inattivazione di Kv2.1 furono dissipate da delezioni parziali di C terminale. Presi insieme, questi risultati suggeriscono che interazioni fisiche Syx sia il complesso t-SNARE con il C-terminale di Kv2.1 sono coinvolti nella regolazione del canale.

Kv2.1 canale attivazione e inattivazione &egrave; influenzata dalle interazioni fisiche di Sintaxina 1A e il complesso fattore-25 (t-SNARE) N-ethylmaleimide-sensitive Sintaxina 1A/solubile con il C-terminale del canale.

Kv2.1&#x3001;&#x6D41;&#x884C;&#x306E;&#x9045;&#x5EF6;&#x6574;&#x6D41;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x3068;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x81B5;&#x5CF6; &beta; &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F; &#xFF08;Syx) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N n-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-25 &#xFF08;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25)&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x7269;&#x7406;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; Kv2.1&#x3001;Syx&#x3001;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25 &#x306E; Kv2.1 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB; &#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3057;&#x3001;Syx/&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7; - 25 &#xFF08;t-&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;) &#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x7D44;&#x7ACB;/&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7AF6;&#x4E89;&#x3059;&#x308B; 3 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x3059;&#x3067;&#x306B; Syx Kv2.1 &#x3068;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306E; coexpressing &#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6CE8;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D; Syx &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; kv2.1 &#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x306B; Syx &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x7269;&#x7406;&#x9593;&#x306E;&#x56E0;&#x679C;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;: N &#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x4E0A; Syx &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3001;&#x3068; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; Syx &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; Kv2.1 C &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; Syx &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B; Kv2.1 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x904E;&#x5206;&#x6975;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x3001;C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x5506; Kv2.1 &#x4E0A; Syx &#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x9006;&#x8EE2;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066; Syx &#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x524A;&#x9664;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F7F;&#x3044;&#x679C;&#x305F;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;t &#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; Kv2.1 C &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305D;&#x306E; Kv2.1 &#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x524A;&#x9664;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F7F;&#x3044;&#x679C;&#x305F;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x306F; Kv2.1 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x3068; Syx &#x3068; t SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Kv2.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a/&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N n-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;-25 &#xFF08;t-&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;) &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Kv2.1, neuroendocrine &#xBC0F; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xD37C;&#xC9C4; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xC815;&#xB958;&#xAE30; K(+) &#xCC44;&#xB110; syntaxin 1a&#xB85C; &#xC12C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4; (Syx) &#xBC0F; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; N ethylmaleimide &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C; &#xCCA8;&#xBD80; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 25 (&#xC2A4;&#xB0C5;-25). &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC5F0;&#xB41C; &#xC2E4;&#xC81C; neuroendocrine &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; Kv2.1, Syx, &#xBC0F; &#xC2A4;&#xB0C5;-25 Kv2.1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Xenopus laevis oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; Syx/&#xC2A4;&#xB0C5;-25 (t-&#xC62C; &#xBB34;) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC870;&#xB9BD;/&#xBD84;&#xD574;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; Syx oocytes &#xC774;&#xBBF8; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; kv2.1&#xC640; Syx&#xB97C; coexpressing&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC785; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC44;&#xB110; &#xACBD;&#xC7C1; &#xC138; &#xB2E4;&#xB978; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Kv2.1 &#xCC44;&#xB110; &#xC2E4;&#xC81C;&#xC640; Syx&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC778;&#xACFC; &#xAD00;&#xACC4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC124;&#xB9BD;: &#xD55C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; Syx &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED; N &#xD615; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9;&#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; Syx &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED; Kv2.1 C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; Kv2.1, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; hyperpolarizing &#xAD50;&#xB300; &#xBC0F; Syx&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; kv2.1&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xC5D0; Syx&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC18;&#xC804;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9DE;&#xCDB0; Syx&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; &#xC0AD;&#xC81C; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, t-&#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; Kv2.1 C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xBC0F; kv2.1&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8; &#xBD80;&#xBD84; &#xC0AD;&#xC81C; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; kv2.1&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; Syx &#xBC0F; t-&#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBB3C;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xCC44;&#xB110; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Kv2.1 &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; syntaxin 1A &#xBC0F; syntaxin 1A/&#xC218;&#xC6A9; &#xC131; N ethylmaleimide &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC694;&#xC778; 25 (t-&#xC62C; &#xBB34;) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBB3C;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Kv2.1, el canal de k retrasado-rectificador prevalente en las c&eacute;lulas neuroendocrinas y endocrinas, sugiri&oacute; previamente por nuestro grupo a ser modulada en beta-c&eacute;lulas del islote por sintaxina 1A (Syx) y N-etilmaleimida-sensible soluble factor accesorio prote&iacute;na-25 (SNAP-25). Nosotros tambi&eacute;n demostradas interacciones f&iacute;sicas en c&eacute;lulas neuroendocrinas entre Kv2.1, Syx y SNAP-25, caracteriza sus efectos sobre la activaci&oacute;n de KV2.1 e inactivaci&oacute;n en ovocitos de Xenopus laevis y sugiri&oacute; que pertenecen al montaje/desmontaje de la Syx/SNAP-25 (t-SNARE) complejo. En el presente trabajo, hemos establecido la existencia de una relaci&oacute;n causal entre la f&iacute;sica y las interacciones funcionales de Syx con el canal de Kv2.1 usando tres p&eacute;ptidos diferentes que compiten con el canal de enlace de Syx cuando se inyecta en ovocitos ya coexpressing Syx con Kv2.1 en la membrana plasm&aacute;tica: un p&eacute;ptido correspondientes a la regi&oacute;n de Syx vinculante en el canal tipo N CAy dos p&eacute;ptidos que corresponden a las regiones de Syx-Uni&oacute;n en la terminal C de Kv2.1. Los p&eacute;ptidos revoc&oacute; los efectos de Syx sobre Kv2.1, sugiriendo que los cambios hiperpolarizador de la inactivaci&oacute;n de estado estacionario y la activaci&oacute;n de la Kv2.1 causado por Syx resultan de las interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na de superficie celular y apuntan a la participaci&oacute;n de la terminal C en tal interacci&oacute;n. En consonancia con estos resultados, los efectos de Syx fueron disipados por eliminaciones parciales del terminal C. Adem&aacute;s, el complejo t-SNARE fue demostrado al lazo a la terminal C del Kv2.1, y sus efectos en la inactivaci&oacute;n de Kv2.1 fueron disipados por eliminaciones parciales del terminal C. Tomados en conjunto, estos resultados sugieren que interacciones f&iacute;sicas de Syx y el complejo t-SNARE con la terminal C de Kv2.1 participan en la regulaci&oacute;n del canal.

Inactivaci&oacute;n y activaci&oacute;n del canal de Kv2.1 est&aacute; influenciada por las interacciones f&iacute;sicas de sintaxina 1A y el complejo de factor-25 (t-SNARE) sintaxina 1A/soluble sensibles a N-etilmaleimida con la terminal C del canal.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5047;&#x8BBE;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x5206;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N-ethylmaleimide-&#x654F;&#x611F;&#x56E0;&#x5B50;&#x9644;&#x4EF6; &#xFF08;SNAP&#xFF09; &#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;&#x9677;&#x9631;&#xFF09; &#x590D;&#x6742;&#x3001; syntaxin 1A &#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25&#x3001; &#x660E;&#x663E;&#x8C03;&#x8282;&#x4E0D;&#x540C;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; K + (Kv) &#x6E20;&#x9053;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5206;&#x5E03;&#x3002;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&alpha;&#x3001; &beta;&#x3001; &#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;) &#x5747;&#x5300;&#x5730;&#x5305;&#x542B; syntaxin 1A &#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5316;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x542B;&#x6709;&#x72EC;&#x7279;&#x4F18;&#x52BF;&#x7684; Kv &#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; Kv2.1 beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; Kv2.2&#xFF0C;&#x5728; alpha &#x548C;&#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5C06;&#x5176;&#x4E0E;&#x9677;&#x9631;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x8C03;&#x8282;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x3001; &#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x7D20;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x89C4;&#x4F8B;&#x7684; syntaxin 1A &#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25 &#x7684;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x660E; Kv2.1 &#x4EA4;&#x4E92; syntaxin 1A &#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25 &#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E0E; C &#x603B;&#x7AD9;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; syntaxin 1A &#x548C;&#x590D;&#x6742; syntaxin 1A/&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25 &#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7279;&#x70B9; syntaxin 1A &#x53CA;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25 &#x4E0E; Kv2.2 &#x8FD9;&#x662F; Kv2.1&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86; C-&#x603B;&#x7AD9;&#x5230;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Kv2.2 &#x548C; Kv2.1 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7535;&#x6781;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x53EA;&#x6709;&#x4E0E; syntaxin 1A Kv2.2 &#x4EA4;&#x4E92;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0E; Kv2.1&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x4E0E; syntaxin 1A/&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25 &#x590D;&#x6742;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x6240;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x654F;&#x611F;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC4;&#x88C5;/&#x62C6;&#x5378;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E0D;&#x540C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5708;&#x5957;&#x6E20;&#x9053;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F52;&#x56E0;&#x5176; C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6E20;&#x9053;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5206;&#x5E03;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7F51;&#x7F57;&#x6C34;&#x5E73;&#x6709;&#x6848;&#x53EF;&#x7A3D;&#x6DF1;&#x523B;&#x4E0B;&#x964D;&#x8C03;&#x8282;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x6700;&#x7EC8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684;&#x7CD6;&#x7A33;&#x6001;&#x626D;&#x66F2;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x5206;&#x6CCC;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

&#x53D7;&#x76EE;&#x6807;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N ethylmaleimide &#x654F;&#x611F;&#x56E0;&#x5B50;&#x9644;&#x4EF6;&#x86CB;&#x767D;&#x4F53; (t-&#x5708;&#x5957;&#xFF09; &#x4EE5;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x8C03;&#x8282;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0E;&#x5931;&#x6D3B;&#x95E8;&#x63A7;&#x7684; Kv2.2 &#x548C; Kv2.1&#xFF1A; &#x5F71;&#x54CD;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7EC6;&#x80DE; Kv &#x6E20;&#x9053;&#x3002;

We have hypothesized that the plasma membrane protein components of the exocytotic soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein (SNAP) receptor (SNARE) complex, syntaxin 1A and SNAP-25, distinctly regulate different voltage-gated K+ (Kv) channels that are differentially distributed. Neuroendocrine islet cells (alpha, beta, delta) uniformly contain both syntaxin 1A and SNAP-25. However, using immunohistochemistry, we show that the different pancreatic islet cells contain distinct dominant Kv channels, including Kv2.1 in beta cells and Kv2.2 in alpha and delta cells, whose interactions with the SNARE proteins would, respectively regulate insulin, glucagon and somatostatin secretion. We therefore examined the regulation by syntaxin 1A and SNAP-25 of these two channels. We have shown that Kv2.1 interacts with syntaxin 1A and SNAP-25 and, based on studies in oocytes, suggested a model of two distinct modes of interaction of syntaxin 1A and the complex syntaxin 1A/SNAP-25 with the C terminus of the channel. Here, we characterized the interactions of syntaxin 1A and SNAP-25 with Kv2.2 which is highly homologous to Kv2.1, except for the C-terminus. Comparative two-electrode voltage clamp analysis in oocytes between Kv2.2 and Kv2.1 shows that Kv2.2 interacts only with syntaxin 1A and, in contrast to Kv2.1, it does not interact with the syntaxin 1A/SNAP-25 complex and hence is not sensitive to the assembly/disassembly state of the complex. The distinct regulation of these closely related channels by SNAREs may be attributed to differences in their C termini. Together with the differential distribution of these channels among islet cells, their distinct regulation suggests that the documented profound down-regulation of islet SNARE levels in diabetes could distort islet cell ion channels and secretory responses in different ways, ultimately contributing to the abnormal glucose homeostasis.

Target soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptors (t-SNAREs) differently regulate activation and inactivation gating of Kv2.2 and Kv2.1: Implications on pancreatic islet cell Kv channels.

Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que les constituants prot&eacute;iques de la membrane plasmique de l&#39;exocytotique soluble N-&eacute;thylmal&eacute;imide sensibles facteur complexe de r&eacute;cepteurs (SNARE) fixation prot&eacute;ique (SNAP), syntaxine 1 a et SNAP-25, r&eacute;glementer distinctement diff&eacute;rents voltage-d&eacute;pendants (Kv) canaux potassiques qui sont distribu&eacute;es diff&eacute;remment. Des cellules des &icirc;lots de neuroendocrine (alpha, b&ecirc;ta, delta) contiennent uniform&eacute;ment syntaxine 1 a et SNAP-25. Toutefois, par immunohistochimie, nous montrons que les cellules des &icirc;lots pancr&eacute;atiques diff&eacute;rents contiennent dominante Kv canaux distincts, y compris Kv2.1 dans les cellules b&ecirc;ta et Kv2.2 en alpha et cellules delta, dont les interactions avec les prot&eacute;ines SNARE seraient, respectivement r&eacute;gulent la s&eacute;cr&eacute;tion de l&#39;insuline, le glucagon et la somatostatine. Nous avons donc examin&eacute; le r&egrave;glement de la syntaxine 1 a et SNAP-25 de ces deux canaux. Nous avons montr&eacute; que Kv2.1 interagit avec la syntaxine 1 a et SNAP-25 et, sur la base d&#39;&eacute;tudes dans les ovocytes, a propos&eacute; un mod&egrave;le de deux modes distincts de l&#39;interaction de la syntaxine 1 a et le complexe syntaxine 1 a/SNAP-25 avec l&#39;extr&eacute;mit&eacute; C terminale du canal. Ici, nous avons caract&eacute;ris&eacute; les interactions de la syntaxine 1 a et SNAP-25 avec Kv2.2 qui est tr&egrave;s homologue &agrave; Kv2.1, &agrave; l&#39;exception de l&#39;extr&eacute;mit&eacute; C-terminale. Analyse de pince de tension comparative de deux &eacute;lectrodes dans les ovocytes entre Kv2.2 et Kv2.1 montre que Kv2.2 interagit uniquement avec la syntaxine 1 a et que, contrairement &agrave; Kv2.1, il n&#39;interagit pas avec la syntaxine 1 a/SNAP-25 complexe et n&#39;est donc pas sensible &agrave; l&#39;&eacute;tat de montage/d&eacute;montage du complexe. Le r&egrave;glement distinct de ces proches canaux par pi&egrave;ges peut &ecirc;tre attribu&eacute;e &agrave; des diff&eacute;rences dans leurs extr&eacute;mit&eacute;s C. Ainsi que la distribution diff&eacute;rentielle de ces canaux entre les cellules des &icirc;lots pancr&eacute;atiques, leur r&egrave;glement distinct sugg&egrave;re que la r&eacute;gulation n&eacute;gative profonde document&eacute;e de niveaux SNARE &icirc;lot dans le diab&egrave;te pourrait fausser canaux ioniques d&#39;islet cell et r&eacute;ponses s&eacute;cr&eacute;trices de diff&eacute;rentes mani&egrave;res, en bout de ligne contribue &agrave; l&#39;hom&eacute;ostasie du glucose anormale.

Cible sensible N-&eacute;thylmal&eacute;imide facteur accessoire prot&eacute;ines r&eacute;cepteurs solubles (t-SNAREs) r&eacute;glementent diff&eacute;remment l&#39;activation et l&#39;inactivation blocage de Kv2.2 et Kv2.1 : Implications sur les &icirc;lots pancr&eacute;atiques de cellules canaux Kv.

Wir haben die Hypothese auf, dass die Plasmamembran Proteinkomponenten der exocytotic l&ouml;slichen N-Ethylmaleimid-Sensitive Anlage Protein (SNAP) (SNARE)-Rezeptor-Komplex, Syntaxin 1A und SNAP-25 Faktor, regulieren deutlich unterschiedliche Spannung-Gating K + (Kv) Kan&auml;le, die differentiell verteilt werden. Neuroendokrine Inselzellen (Alpha, Beta, Delta) enthalten einheitlich Syntaxin 1A und SNAP-25. Jedoch zeigen verwenden Immunohistochemistry, wir, dass die verschiedenen pankreatischen Inselzellen unterschiedliche dominante Kv-Kan&auml;le enthalten, darunter Kv2.1 in Beta-Zellen und Kv2.2 Alpha und Delta-Zellen, deren Interaktionen mit der SNARE-Proteine w&uuml;rde, bzw. Sekretion von Insulin, Glukagon und Somatostatin regulieren. Wir untersucht daher die Verordnung von Syntaxin-1A und SNAP-25 dieser zwei Kan&auml;le. Wir haben gezeigt, dass Kv2.1 mit Syntaxin interagiert 1A und SNAP-25 und, basierend auf Studien in Eizellen, schlugen ein Modell von zwei verschiedenen Betriebsmodi der Interaktion von Syntaxin-1A und der komplexen Syntaxin 1A/SNAP-25 mit der Carboxyl-Terminus des Kanals. Hier charakterisiert wir die Wechselwirkungen zwischen Syntaxin 1A und SNAP-25 mit Kv2.2, die hochgradig homologe zu Kv2.1, mit Ausnahme der C-Terminus ist. Vergleichende zwei-Elektroden-Spannung Klemme Analyse in Oozyten zwischen Kv2.2 und Kv2.1 zeigt, dass Kv2.2 nur mit Syntaxin 1A interagiert und, im Gegensatz zu Kv2.1, es interagiert nicht mit der Syntaxin 1A/SNAP-25 komplex und daher nicht f&uuml;r die Montage/Demontage-Zustand der Anlage empfindlich ist. Unterschiedliche Verordnung dieser verwandten eng Kan&auml;le von Ozon auf Unterschiede in ihren C-Termini zur&uuml;ckzuf&uuml;hren ist. Zusammen mit der unterschiedlichen Verteilung dieser Kan&auml;le unter Inselzellen zufolge ihre unterschiedlichen Verordnung die dokumentierte Tiefe Herunterregulation Inselchen SNARE Levels in Diabetes unterschiedlich, letztlich einen Beitrag zu den anormalen Glukose-Hom&ouml;ostase Inselchen Zelle Ionenkan&auml;le und sekretorischen Antworten verf&auml;lschen k&ouml;nnten.

Ziel l&ouml;sliche N-Ethylmaleimid-Sensitive Faktor Anlage Protein Rezeptoren (t-SNAREs) neu zu Regeln, Aktivierung und Inaktivierung Anspritzung von Kv2.2 und Kv2.1: Auswirkungen auf Pankreas Inselchen Zelle Kv-Kan&auml;le.

Noi abbiamo ipotizzato che il membrana plasmatica i componenti delle proteine di questo solubile N-ethylmaleimide-sensibile fattore complesso di attacco della proteina (SNAP) recettore (rullante), 1A Sintaxina e SNAP-25, distintamente regolano la tensione-gated K + (Kv) canali diversi che sono distribuiti in modo differenziale. Cellule neuroendocrine insulari (alfa, beta, delta) contengono in modo uniforme sia 1A Sintaxina e SNAP-25. Tuttavia, usando immunohistochemistry, mostrano che le cellule diverse isole pancreatiche contengono distinti canali di Kv dominante, compreso Kv2.1 in cellule beta e Kv2.2 in alfa e cellule delta, le cui interazioni con le proteine SNARE sarebbero, rispettivamente regolano la secrezione di insulina, glucagone e somatostatina. Abbiamo quindi esaminato il regolamento da 1A Sintaxina e SNAP-25 di questi due canali. Abbiamo dimostrato che Kv2.1 interagisce con Sintaxina 1A e SNAP-25, sulla base di studi e ovociti, ha suggerito un modello di due distinte modalit&agrave; di interazione di Sintaxina 1A e il complesso Sintaxina 1A/SNAP-25 con il C-terminale del canale. Qui, abbiamo caratterizzato le interazioni della 1A Sintaxina e SNAP-25 con Kv2.2 che &egrave; altamente omologa alla Kv2.1, fatta eccezione per il C-terminale. Analisi morsetto tensione comparativa di due elettrodi in ovociti tra Kv2.2 e Kv2.1 mostra che Kv2.2 interagisce solo con 1A Sintaxina e, a differenza di Kv2.1, non interagisce con la sintaxina 1A/SNAP-25 complessi e quindi non &egrave; sensibile allo stato di montaggio/smontaggio del complesso. Strettamente il regolamento distinto di questi canali da insidie possono essere attribuite alle differenze nella loro termini C. Insieme con la distribuzione differenziale di questi canali tra le cellule dell&#39;isolotto, loro regolamento distinto suggerisce che il documentato profonda down-regulation dei livelli SNARE isolotto in diabete potrebbe distorcere scanalature dello ione di islet cell e risposte secretorie in modi diversi, in definitiva contribuendo all&#39;omeostasi del glucosio anormale.

Destinazione solubile N-ethylmaleimide-sensibile fattore attachment protein receptors (t-SNAREs) diversamente regolare attivazione ed inattivazione gating di Kv2.2 e Kv2.1: implicazioni sulle isole pancreatiche cell canali Kv.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6210;&#x5206;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N n-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x56E0;&#x5B50;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#xFF09; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7; 25 &#x4EEE;&#x8AAC;&#x304C;&#x3001;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x96FB;&#x4F4D; K + (Kv) &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x81B5;&#x5CF6;&#x7D30;&#x80DE; (&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;) &#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x69D8;&#x306B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7; 25 &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x81B5;&#x5CF6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A; Kv &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; Kv2.1 &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084; Kv2.2 &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3068;&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x305D;&#x306E; SNARE &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x601D;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;, &#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BD;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25 &#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Kv2.1 &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 1A &#x3068;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7; 25 &#x3068;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x7814;&#x7A76;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a/&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25 Kv2.1 C &#x672B;&#x7AEF;&#x4EE5;&#x5916;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x76F8;&#x540C;&#x3067;&#x3042;&#x308B; Kv2.2 &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03; 2 &#x96FB;&#x6975;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x5206;&#x6790; Kv2.2 &#x3068; Kv2.1 &#x3068;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F; Kv2.2 &#x306E;&#x307F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x3001;Kv2.1 &#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a/&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25 &#x3068;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5BFE;&#x8A71;&#x304C;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3086;&#x3048;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x7D44;&#x7ACB;/&#x5206;&#x89E3;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E; C &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81B5;&#x5CF6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x5DEE;&#x5206;&#x306E;&#x5206;&#x914D;&#x305D;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x898F;&#x5236;&#x6587;&#x66F8;&#x306E;&#x6DF1;&#x3044;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x81B5;&#x5CF6;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x81B5;&#x5CF6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x5206;&#x6CCC;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x7DAD;&#x6301;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x6B6A;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3053;&#x3068;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N n-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668; (t &#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;) &#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; Kv2.2 &#x3068; Kv2.1 &#x306E;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;: &#x81B5;&#x5CF6;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x643A;&#x5E2F; Kv &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; exocytotic &#xC131; N ethylmaleimide-&#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C;&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC694;&#xC18C; &#xCCA8;&#xBD80; (&#xC2A4;&#xB0C5;) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC62C; &#xBB34;) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;, syntaxin 1A &#xBC0F; &#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;&#xB294;, &#xBA85;&#xBC31; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; K + (Kv) &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB3D9; &#xBC30;&#xD3EC; &#xB418;&#xB294; &#xADDC;&#xC81C;. Syntaxin 1A &#xBC0F; &#xC2A4;&#xB0C5;-25&#xC5D0; &#xADE0;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C; neuroendocrine &#xC12C; &#xC140; (&#xC54C;&#xD30C;, &#xBCA0;&#xD0C0;, &#xB378;&#xD0C0;) &#xD3EC;&#xD568;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xB978; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xC12C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD3EC;&#xD568; &#xC54C;&#xD30C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; kv2.2&#xC5D0;&#xC11C; kv2.1&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; Kv &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; &#xB378;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;, &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; SNARE &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xAC01;&#xAC01; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;, &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4;, &#xBC0F; somatostatin &#xBD84; &#xBE44; &#xC870;&#xC808; &#xD45C;&#xC2DC; &#xAE30;&#xC220; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; syntaxin 1A &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB450; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC2A4;&#xB0C5;-25&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Kv2.1 syntaxin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; 1A &#xBC0F; &#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xACE0;, oocytes, &#xAE30;&#xBC18;&#xB41C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC81C;&#xC548; syntaxin 1A &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; syntaxin 1A/&#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; syntaxin 1A &#xC2A4;&#xB0C5;-25 C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC744; &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; kv2.1&#xC744; &#xB192;&#xC740; &#xB3D9;&#xC885;&#xC740; kv2.2&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Kv2.2&#xC640; Kv2.1 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xAD50; 2 &#xC804;&#xADF9; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; Kv2.2 syntaxin 1a&#xC640;&#xB9CC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0;, Kv2.1, &#xB2EC;&#xB9AC;&#xB294; syntaxin 1A/&#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC870;&#xB9BD;/&#xBD84;&#xD574; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828; SNAREs &#xC5EC; &#xCC44;&#xB110; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; &#xC12C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC04;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB3D9; &#xBD84;&#xD3EC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBB38;&#xC11C;&#xD654; &#xB41C; &#xAE4A;&#xC740; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xC12C; &#xC62C; &#xBB34; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC740; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xC12C; &#xC140; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xBD84; &#xC751;&#xB2F5; &#xC65C;&#xACE1; &#xC218; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

&#xB300;&#xC0C1; &#xC131; N ethylmaleimide &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C; &#xCCA8;&#xBD80; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC6A9; (t-SNAREs) &#xB2E4;&#xB974;&#xAC8C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; Kv2.2 &#xBC0F; Kv2.1: &#xCDCC; &#xC7A5; &#xC12C;&#xC5D0; &#xC758;&#xBBF8; &#xC140; k v &#xCC44;&#xB110;.

Hemos presumido que los componentes de la prote&iacute;na de membrana plasm&aacute;tica del exocit&oacute;tico N-etilmaleimida-sensible soluble factor accesorio (SNAP) de la prote&iacute;na del receptor (trampa) complejo, sintaxina 1A y SNAP-25, regula distintamente diferentes canales voltaje-bloqueados K + (Kv) que se distribuyen diferencialmente. Las c&eacute;lulas del islote neuroendocrinos (alfa, beta, delta) contienen uniformemente sintaxina 1A y SNAP-25. Sin embargo, usando immunohistochemistry, demostramos que las c&eacute;lulas del islote pancre&aacute;tico diferentes contienen canales distintos de Kv dominantes, incluyendo Kv2.1 en las c&eacute;lulas beta y Kv2.2 en alfa y las c&eacute;lulas delta, ser&iacute;a que las interacciones con las prote&iacute;nas SNARE, respectivamente regulan la secreci&oacute;n de insulina, glucag&oacute;n y somatostatina. Por lo tanto, examinamos la regulaci&oacute;n por la sintaxina 1A y SNAP-25 de estos dos canales. Hemos demostrado que Kv2.1 interact&uacute;a con la sintaxina 1A y SNAP-25 y, en base a estudios en ovocitos, sugiri&oacute; un modelo de dos modos distintos de interacci&oacute;n de la sintaxina 1A y el complejo de la sintaxina 1A/SNAP-25 con la terminal C del canal. Aqu&iacute;, caracterizamos las interacciones de la sintaxina 1A y SNAP-25 con Kv2.2 que es altamente hom&oacute;logo al Kv2.1, excepto el c-terminal. An&aacute;lisis comparativo de dos electrodos de tensi&oacute;n abrazadera ovocitos entre Kv2.2 y Kv2.1 muestra que Kv2.2 interact&uacute;a solamente con la sintaxina 1A y, en contraste con Kv2.1, no interact&uacute;a con la sintaxina 1A/SNAP-25 complejo y por lo tanto no es sensible al estado de montaje/desmontaje del complejo. La regulaci&oacute;n distinta de ellas relacionada con canales por trampas pueden atribuirse a diferencias en sus t&eacute;rminos de C. Junto con la distribuci&oacute;n diferencial de estos canales entre las c&eacute;lulas del islote, su regulaci&oacute;n distinta sugiere que la profunda documentada abajo-regulaci&oacute;n de niveles de trampa de islotes en la diabetes podr&iacute;a distorsionar canales del ion de c&eacute;lulas islote y respuestas secretoras de diferentes maneras, en &uacute;ltima instancia, contribuir a la homeostasis de la glucosa anormal.

Blanco solubles sensibles a N-etilmaleimida factor accesorio prote&iacute;nas receptores (t-SNAREs) regulan diferentemente activaci&oacute;n y compuerta de inactivaci&oacute;n de Kv2.2 y Kv2.1: implicaciones en islotes pancre&aacute;ticos Kv canales de la c&eacute;lula.

&#x5FB7;&#x8BFA;&#x5408;&#x6210;&#x6CE2;&#x5F62;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x88C2;&#x89E3;&#x7247;&#x6BB5;&#x6700;&#x8FD1;&#x636E;&#x62A5;&#x4E0E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Erk1 &#x4E0E; Erk2 &#x5730;&#x56FE;&#x6FC0;&#x9176; (pErk) &#x7684;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7ECF;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x4FEE;&#x590D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x9012;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5916;&#x5FEB;&#x9006;&#x884C;&#x8FD0; importins &#x548C;&#x808C;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8981;&#x6F84;&#x6E05;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E86;&#x516C;&#x56ED;&#x5982;&#x4F55;&#x8131;&#x6C2E;&#x9664;&#x78F7;&#x5728;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x4ECE;&#x53D7;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6CE2;&#x5F62;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x4E0B;&#x62C9;&#x83DC;&#x5355;&#x548C;&#x9176;&#x8054;&#x514D;&#x75AB;&#x5438;&#x9644;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x6CE2;&#x5F62;&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x589E;&#x52A0;&#x4ECE; 180 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x7EBF;&#x5708;&#x76D8;&#x7ED5;&#x57DF;&#x7684;&#x5916;&#x5FEB;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7ED1;&#x5B9A; 240nm 0.1 microM &#x9499; 15 &#x5230; 10 microM &#x9499;&#x725B;&#x7C73;&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6709;&#x5F88;&#x5C11;&#x6216;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x6CE2;&#x5F62;&#x975E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Erk&#x3002;&#x51E0;&#x4F55;&#x548C;&#x9759;&#x7535;&#x4E92;&#x8865;&#x5BF9;&#x63A5;&#x751F;&#x6210;&#x591A;&#x4E2A;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x8981;&#x632F;&#x5174;&#x7684;&#x6CE2;&#x5F62;&#x7ED1;&#x5B9A; occludes &#x542B;&#x78F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x4E2D;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x5634;&#x5507;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0E; Erk &#x80BD;&#x7ADE;&#x4E89;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E2D;&#x7684;&#x6CE2;&#x5F62;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5507;&#x5728;&#x76D6;&#x516C;&#x56ED;&#xFF0C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E;&#x4E0A;&#x9762;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x548C;&#x5507;&#x4E0B;&#x65B9;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x80BD;&#x6291;&#x5236; pErk &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x808C;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x4ECE;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6CE2;&#x5F62;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4E1D;&#x7247;&#x6BB5;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6FC0;&#x9176;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FDD;&#x62A4;&#x5176;&#x514D;&#x53D7;&#x8131;&#x6C2E;&#x9664;&#x78F7;&#x7684;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x963B;&#x3002;

&#x6CE2;&#x5F62;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Erk &#x542B;&#x6709;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F4D;&#x963B;&#x963B;&#x788D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x9176;&#x8131;&#x78F7;&#x3002;

Cleavage fragments of de novo synthesized vimentin were recently reported to interact with phosphorylated Erk1 and Erk2 MAP kinases (pErk) in injured sciatic nerve, thus linking pErk to a signaling complex retrogradely transported on importins and dynein. Here we clarify the structural basis for this interaction, which explains how pErk is protected from dephosphorylation while bound to vimentin. Pull-down and ELISA experiments revealed robust calcium-dependent binding of pErk to the second coiled-coil domain of vimentin, with observed affinities of binding increasing from 180 nM at 0.1 microM calcium to 15 nM at 10 microM calcium. In contrast there was little or no binding of non-phosphorylated Erk to vimentin under these conditions. Geometric and electrostatic complementarity docking generated a number of solutions wherein vimentin binding to pErk occludes the lip containing the phosphorylated residues in the kinase. Binding competition experiments with Erk peptides confirmed a solution in which vimentin covers the phosphorylation lip in pErk, interacting with residues above and below the lip. The same peptides inhibited pErk binding to the dynein complex in sciatic nerve axoplasm, and interfered with protection from phosphatases by vimentin. Thus, a soluble intermediate filament fragment interacts with a signaling kinase and protects it from dephosphorylation by calcium-dependent steric hindrance.

Vimentin binding to phosphorylated Erk sterically hinders enzymatic dephosphorylation of the kinase.

Fragments de clivage de novo synth&#xE9;tis&#xE9; vimentine ont &#xE9;t&#xE9; signal&#xE9;s r&#xE9;cemment &#xE0; interagir avec Erk1 phosphoryl&#xE9;e et ERK2 MAP kinases (avantage) dans le nerf sciatique bless&#xE9;, reliant ainsi avantage &#xE0; un complexe de signalisation r&#xE9;trograde transport&#xE9;s sur importines et la dyn&#xE9;ine. Ici, nous pr&#xE9;ciser la base structurelle de cette interaction, qui explique comment avantage est prot&#xE9;g&#xE9;e contre les d&#xE9;phosphorylation alors qu&#x26;#39;il est soumis &#xE0; la vimentine. Tirez vers le bas et ELISA exp&#xE9;riences ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; robuste liaison d&#xE9;pendant du calcium de perk &#xE0; la deuxi&#xE8;me domaine coiled-coil de la vimentine, avec des affinit&#xE9;s de liaison observ&#xE9;s passant de 180 nM &#xE0; 0,1 microM de calcium &#xE0; 15 nM &#xE0; 10 de calcium microM. En revanche il y avait peu ou pas de liaison de non-phosphoryl&#xE9;e Erk &#xE0; la vimentine dans ces conditions. Accueil compl&#xE9;mentarit&#xE9; g&#xE9;om&#xE9;trique et &#xE9;lectrostatique g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; un certain nombre de solutions dans lequel s&#x26;#39;embo&#xEE;te la vimentine contraignant pour perk la l&#xE8;vre contenant des r&#xE9;sidus phosphoryl&#xE9;s dans la kinase. Des exp&#xE9;riences de comp&#xE9;tition avec des peptides de liaison Erk a confirm&#xE9; une solution dans laquelle la vimentine couvre la l&#xE8;vre phosphorylation &#xE0; Perk, en interagissant avec les r&#xE9;sidus de dessus et en dessous de la l&#xE8;vre. Les m&#xEA;mes peptides inhib&#xE9; la liaison avantage au complexe dyn&#xE9;ine dans axoplasme nerf sciatique, et port&#xE9; atteinte &#xE0; la protection contre les phosphatases par la vimentine. Ainsi, un fragment de filament interm&#xE9;diaire soluble interagit avec une kinase de signalisation et le prot&#xE8;ge de la d&#xE9;phosphorylation par le calcium-d&#xE9;pendante encombrement st&#xE9;rique.

Liaison &#xE0; phosphoryl&#xE9;e Erk Vimentin Hinders st&#xE9;riquement d&#xE9;phosphorylation enzymatique de la kinase

Spaltbarkeit Fragmente von de Novo synthetisiert Vimentin wurden k&uuml;rzlich berichtet, Interaktion mit phosphorylierten Erk1 und Erk2 MAP Kinasen (munter) in verletzten Ischiasnerv, wobei die Verg&uuml;nstigung zu einer Signalisierung komplexe retrogradely auf Importins und Dynein transportiert in Verbindung. Hier kl&auml;ren wir die strukturelle Grundlage f&uuml;r diese Interaktion, die erkl&auml;rt, wie munter vor Dephosphorylierung w&auml;hrend gebundene Vimentin gesch&uuml;tzt ist. Pulldownmen&uuml; und ELISA Experimente aufgedeckt robuste Kalzium-abh&auml;ngige Bindung der Verg&uuml;nstigung der zweiten aufgerollte Spule-Dom&auml;ne von Vimentin, mit beobachteten Affinit&auml;ten der Bindung von 180 nM bei 0,1 MicroM Kalzium bis 15 nM bei 10 MicroM Kalzium. Im Gegensatz dazu gab es wenig oder gar keine Bindung von Erk, Vimentin unter diesen Bedingungen nicht phosphoryliert. Geometrische und elektrostatische Komplementarit&auml;t Andocken generiert eine Reihe von L&ouml;sungen, worin Vimentin Bindung an munter die Lippe, die den phosphoryliertes R&uuml;ckst&auml;nde in der Kinase Zahnbildung. Wettbewerb Experimente mit Erk Peptide binden hat eine L&ouml;sung, in welche, die, die Vimentin deckt die Phosphorylierung lip in Interaktion mit R&uuml;ckst&auml;nden oben und unten die Lippe munter, best&auml;tigt. Die gleichen Peptide gehemmt pErk Bindung an den Komplex in Ischiasnerv Axoplasm Dynein und Schutz vor Phosphatasen durch Vimentin beeintr&auml;chtigt. So eine l&ouml;sliches Heizfadens Fragment interagiert mit einer Signalisierung Kinase und sch&uuml;tzt es vor Dephosphorylierung durch Kalzium-abh&auml;ngige sterische Hinderung.

Vimentin Bindung an Phosphorylierte Erk behindert sterisch enzymatische Dephosphorylierung von der Kinase.

Frammenti di clivaggio del de novo sintetizzato vimentina recentemente sono stati segnalati per interagire con Erk1 ed Erk2 mappa fosforilate chinasi (pErk) infortunato nervo sciatico, collegando cos&igrave; pErk per un complesso di segnalazione retrogradely trasportati su importins e dineina. Qui noi chiarire le basi strutturali per questa interazione, che spiega come pErk &egrave; protetto dalla defosforilazione mentre associato alla vimentina. Pull-down ed ELISA esperimenti hanno rivelato robusto legame calcio-dipendente di pErk al secondo dominio coiled-coil di vimentina, con osservato affinit&agrave; di binding aumentando da 180 nM a 0,1 microM calcio a 15 nM a 10 microM calcio. Al contrario c&#39;era poca o nessuna associazione di Erk fosforilato non alla vimentina in queste condizioni. Complementarit&agrave; geometrica ed elettrostatico docking generato un certo numero di soluzioni in cui vimentina associazione per adornare occlude il labbro che contengono i residui fosforilati nella chinasi. Associazione esperimenti concorrenza con peptidi Erk ha confermato una soluzione in cui vimentina copre la fosforilazione del labbro in pErk, interagendo con residui di cui sopra e sotto il labbro. I peptidi stessi inibiscono pErk vincolante per la dineina complesso nel nervo sciatico assoplasma e interferirono con protezione da fosfatasi di vimentina. Cos&igrave;, un frammento di filamento intermedio solubile interagisce con una segnalazione chinasi e protegge dalla defosforilazione di calcio-dipendente sterico.

Associazione vimentina Erk fosforilato stericamente ostacola la defosforilazione enzimatica della chinasi di.

&#x306E;de novo&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D3;&#x30E1;&#x200B;&#x200B;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x9006;&#x884C;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x3067;&#x8F38;&#x9001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x7279;&#x5178;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3001;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7D4C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;ERK1&#x304A;&#x3088;&#x3073;ERK2 MAP&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PERK&#xFF09;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x306B;&#x8131;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7279;&#x5178;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3068;ELISA&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x3001;10&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;15 nM&#x3067;&#x3001;0.1&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3067;180 nm&#x304B;&#x3089;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x4F34;&#x3044;&#x3001;&#x30D3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306E;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x7279;&#x5178;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x30D3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x975E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;Erk&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x5168;&#x304F;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5E7E;&#x4F55;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9759;&#x96FB;&#x76F8;&#x88DC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x7279;&#x5178;&#x9589;&#x585E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5507;&#x306B;&#x30D3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3002; Erk&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x7AF6;&#x5408;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306F;&#x5507;&#x306E;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5178;&#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x5507;&#x3092;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x3058;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x7279;&#x5178;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x30D3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3092;&#x59A8;&#x5BB3;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x5F84;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x969C;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8131;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;ERK&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D3;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7ACB;&#x4F53;&#x7684;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x7684;&#x8131;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;

&#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xD569;&#xC131; vimentin&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4; &#xD30C;&#xD3B8; phosphorylated Erk1 &#xBC0F; Erk2 &#xC9C0;&#xB3C4; kinases (pErk) &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; retrogradely &#xC774;&#xC1A1; importins &#xD68C;&#xC5D0;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD2B9;&#xAD8C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC190;&#xC0C1;&#xB41C; &#xC88C; &#xACE8; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC54C;&#xB824;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; dephosphorylation&#xC5D0;&#xC11C; vimentin&#xC73C;&#xB85C; &#xBD80;&#xC218;&#xC785;&#xC740; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C;. &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBC0F; ELISA &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACF5;&#xAC1C; 180&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30;&#xB41C; affinities vimentin&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD2B9;&#xAD8C;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; 0.1 microM &#xCE7C;&#xC298; 15 nM 10 microM &#xCE7C;&#xC298; nM. &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; vimentin &#xBE44; phosphorylated Erk&#xC758; &#xAC70;&#xC758; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD558;&#xAC8C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD615;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xC815;&#xC804;&#xAE30; complementarity &#xB3C4;&#xD0B9; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xAD8C;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; vimentin occludes &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD0A4;&#xC758; phosphorylated &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xB9BD; &#xC218; &#xC0DD;&#xC131;. Erk &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC640; &#xACBD;&#xC7C1; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC744; vimentin&#xC5D0;&#xB294; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB9BD; &#xCEE4;&#xBC84; &#xD2B9;&#xAD8C;, &#xC785;&#xC220; &#xC544;&#xB798; &#xC704;&#xC758; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xACFC;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC19;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xC88C; &#xACE8; &#xC2E0;&#xACBD; axoplasm, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD68C;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xAD8C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xBCF4;&#xD638;&#xC640; vimentin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC29;&#xD574;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xC911;&#xAC04; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xC870;&#xAC01; &#xC2E0;&#xD638; &#xB2C8;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xC785;&#xCCB4;&#xC801; &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xC5EC; dephosphorylation&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xD638;.

Sterically Vimentin &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; phosphorylated Erk&#xB294; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD6A8;&#xC18C; dephosphorylation&#xC744; &#xBC29;&#xD574;&#xAC00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Fragmentos de su desdoblamiento de sintetizados de novo vimentina se inform&#xF3; recientemente de interactuar con fosforilados Erk1 y ERK2 MAP quinasas (beneficio) en el nervio ci&#xE1;tico da&#xF1;ado, vinculando as&#xED; animar a un complejo de se&#xF1;alizaci&#xF3;n retr&#xF3;grada transportados en importins y dine&#xED;na. Aqu&#xED; se aclare la base estructural de esta interacci&#xF3;n, que explica c&#xF3;mo gratificaci&#xF3;n est&#xE1; protegido de desfosforilaci&#xF3;n mientras est&#xE1; unido a la vimentina. Tire hacia abajo y ELISA experimentos revelaron robusta de calcio dependen de la uni&#xF3;n de beneficio a la segunda espiral de la bobina de dominio de vimentina, con afinidades observadas de la uni&#xF3;n cada vez mayores de 180 Nm a 0,1 microM de calcio a 15 nm en el calcio microM 10. En cambio, se hizo poco o nada de la uni&#xF3;n de no fosforilados Erk a la vimentina en estas condiciones. Acoplamiento complementariedad geom&#xE9;trica y electrost&#xE1;tica generado una serie de soluciones en las que la uni&#xF3;n a vimentina ocluye animan el labio que contiene los residuos fosforilados de la quinasa. Experimentos de uni&#xF3;n de la competencia con p&#xE9;ptidos Erk confirm&#xF3; una soluci&#xF3;n en la que vimentina cubre el labio fosforilaci&#xF3;n en beneficio, interactuando con los residuos por encima y por debajo del labio. Los mismos p&#xE9;ptidos inhibi&#xF3; la uni&#xF3;n beneficio del complejo dine&#xED;na en el axoplasma del nervio ci&#xE1;tico, y ha interferido con la protecci&#xF3;n de las fosfatasas de vimentina. As&#xED;, un fragmento soluble de filamentos intermedios interact&#xFA;a con una quinasa de se&#xF1;alizaci&#xF3;n y lo protege de la desfosforilaci&#xF3;n por dependiente de calcio impedimento est&#xE9;rico.

La uni&#xF3;n a fosforilada Erk Vimentina est&#xE9;ricamente obstaculiza desfosforilaci&#xF3;n enzim&#xE1;tica de la cinasa

&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; K(+) &#x6E20;&#x9053;&#x662F;&#x5185;&#x5728;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x548C;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7531;&#x6211;&#x4EEC;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x4E0E; syntaxin 1A &#x5355; Kv1.1 &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Syntaxin &#x4E0B;&#x8DCC;&#x9149;&#x7535;&#x5BFC;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#x5404;&#x56FD; &#xFF08;&#x4E24;&#x4E2A; subconductances &#x548C;&#x5145;&#x5206;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#xFF09; &#x548C;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x5E73;&#x5747;&#x5C01;&#x95ED;&#x505C;&#x7559;&#x65F6;&#x95F4;&#x5728;&#x6D88;&#x504F;&#x7535;&#x4F4D;&#x5EF6;&#x957F;&#x5176;&#x5F00;&#x653E;&#x7684;&#x6982;&#x7387;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x9608;&#x7535;&#x4F4D; syntaxin 1A &#x589E;&#x52A0; subconductance &#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x6982;&#x7387;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5B8F;&#x89C2;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#x7387;&#x5728;&#x4E34;&#x754C;&#x503C;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x7535;&#x4F4D;&#x4E0B;&#x964D;&#x800C;&#x4E14;&#x5728;&#x9608;&#x503C;&#x7535;&#x4F4D;&#x6709;&#x6240;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7A33;&#x5B9A;&#x72B6;&#x6001;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x6570;&#x503C;&#x6A21;&#x62DF;&#x8868;&#x660E;&#xFF1A; &#xFF08;1&#xFF09; &#x7531; syntaxin &#x63A7;&#x5236;&#x6D47;&#x6CE8;&#x901A;&#x8FC7;&#x5F3A;&#x5236;&#x53EA;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x79BB;&#x6563;&#x6B65;&#x9AA4;&#x901A;&#x8FC7; subconductance &#x56FD;&#x5BB6;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5408;&#x4F5C;&#x793E;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7684; Kv1.1 &#xFF1B; &#x5728;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x7EC6;&#x76EE;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x673A;&#x5236;(2) &#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x663E;&#x7136;&#x662F;&#x81EA;&#x76F8;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x4EE3;&#x7406;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x51CF;&#x5C11;&#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x51CF;&#x8F7B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x653E;&#x7535;&#x9891;&#x7387;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x5206;&#x6D41;&#x7535;&#x5BFC; K(+) K(+)&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8C03;&#x5236;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8F93;&#x51FA;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EA7;&#x522B;&#x662F; syntaxin &#x7684;&#x7B26;&#x5408;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x7597;&#x6548;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E3A; Kv1.1 &#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x3002;

Syntaxin &#x5E26;&#x6709;&#x5355;&#x4E2A; Kv1.1 &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF1A; &#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Voltage-gated K(+) channels are crucial for intrinsic neuronal plasticity and present a target for modulations by protein-protein interactions, notably, by exocytotic proteins demonstrated by us in several systems. Here, we investigated the interaction of a single Kv1.1 channel with syntaxin 1A. Syntaxin decreased the unitary conductance of all conductance states (two subconductances and a full conductance) and decreased their open probabilities by prolongation of mean closed dwell-times at depolarized potentials. However, at subthreshold potentials syntaxin 1A increased the probabilities of the subconductance states. Consequently, the macroscopic conductance is decreased at potentials above threshold and increased at threshold potentials. Numerical modeling based on steady-state and kinetic analyses suggests: (1) a mechanism whereby syntaxin controls activation gating by forcing the conductance pathway only via a sequence of discrete steps through the subconductance states, possibly via a breakdown of cooperative movements of voltage sensors that exist in Kv1.1; (2) a physiological effect, apparently paradoxical for an agent that reduces K(+) current, of attenuating neuronal firing frequency via an increase in K(+) shunting conductance. Such modulation of the gain of neuronal output in response to different levels of syntaxin is in accord with the suggested role for Kv1.1 in axonal excitability and synaptic efficacy.

Interaction of syntaxin with a single Kv1.1 channel: a possible mechanism for modulating neuronal excitability.

Voltage-d&eacute;pendant des canaux k sont cruciales pour la plasticit&eacute; neuronale intrins&egrave;que et pr&eacute;sentent une cible pour des modulations par des interactions de prot&eacute;ine-prot&eacute;ine, notamment, par des prot&eacute;ines exocytotique d&eacute;montr&eacute;s par nous dans plusieurs syst&egrave;mes. Ici, nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;interaction d&#39;un canal unique de Kv1.1 avec la syntaxine 1 a. Syntaxine a diminu&eacute; la conductance unitaire de tous les &Eacute;tats de conductance (deux sous-conductances et une conductance complet) et une diminution de leurs probabilit&eacute;s ouvertes par prolongement de moyennes dwell-fois ferm&eacute;s aux potentiels d&eacute;polaris&eacute;es. Cependant, &agrave; une potentiels syntaxine 1 a augment&eacute; les probabilit&eacute;s des &Eacute;tats sous-conductance. En cons&eacute;quence, la conductance macroscopique est diminu&eacute;e aux potentiels de seuil et a augment&eacute; &agrave; des potentiels de seuil. Mod&eacute;lisation num&eacute;rique bas&eacute;e sur des analyses stationnaires et cin&eacute;tiques sugg&egrave;re: (1) un m&eacute;canisme par lequel la syntaxine contr&ocirc;le activation blocage en for&ccedil;ant la voie de la conductance uniquement via une s&eacute;quence d&#39;&eacute;tapes discr&egrave;tes &agrave; travers les &Eacute;tats de sous-conductance, &eacute;ventuellement via une ventilation des mouvements coop&eacute;ratifs des capteurs de tension qui existent dans Kv1.1 ; (2) un effet physiologique, apparemment paradoxal pour un agent qui r&eacute;duit k actuel, d&#39;att&eacute;nuer la fr&eacute;quence de d&eacute;charge neuronale via une augmentation de k la conductance de la man&oelig;uvre. Cette modulation du gain de sortie neuronale en r&eacute;ponse &agrave; diff&eacute;rents niveaux de la syntaxine est en accord avec le r&ocirc;le propos&eacute; pour Kv1.1 dans l&#39;excitabilit&eacute; axonale et l&#39;efficacit&eacute; synaptique.

Interaction de la syntaxine avec un seul canal Kv1.1 : un m&eacute;canisme possible pour la modulation de l&#39;excitabilit&eacute; neuronale.

Spannung-Gating K(+) Kan&auml;le sind entscheidend f&uuml;r die systeminterne neuronale Plastizit&auml;t und pr&auml;sentieren ein Ziel f&uuml;r Modulationen von Protein-Protein-Wechselwirkungen, insbesondere durch exocytotic Proteine, die von uns in mehreren Systemen nachgewiesen. Hier untersuchten wir das Zusammenspiel von einem Kv1.1 Kanal mit Syntaxin-1A. Syntaxin verringert den unit&auml;ren Leitwert aller Leitwert-Staaten (zwei Subconductances und eine vollst&auml;ndige Leitwert) und ihre offenen Wahrscheinlichkeiten durch Verl&auml;ngerung der mittlere geschlossenen Verweilzeiten auf ersch&uuml;ttertes Potenziale. Jedoch bei subthreshold Potenziale Syntaxin erh&ouml;ht 1A die Wahrscheinlichkeiten der Subconductance Staaten. Folglich ist die makroskopische Leitf&auml;higkeit sank Potenziale &uuml;ber Schwellenwert und stieg am Schwellenwert Potenziale. Numerische Modellierung basierend auf station&auml;ren und kinetische Analysen vorschl&auml;gt: (1) einen Mechanismus, wobei Syntaxin Aktivierung Anspritzung steuert zwingen den Leitwert-Weg nur &uuml;ber eine Abfolge von diskreten Schritten durch den Subconductance Staaten, m&ouml;glicherweise &uuml;ber eine Aufschl&uuml;sselung der kooperativen Bewegungen der Spannungssensoren, die vorhanden in Kv1.1; (2) eine physiologische Wirkung, scheinbar paradoxe f&uuml;r einen Agenten, der Strom, der neuronale feuern Frequenz &uuml;ber einen Anstieg der K(+) Rangier-Leitwert abgeschw&auml;cht K(+) reduziert. Solche Modulation des Gewinns der neuronalen Ausgabe als Reaktion auf verschiedenen Ebenen von Syntaxin ist in &Uuml;bereinstimmung mit der vorgeschlagenen Rolle f&uuml;r Kv1.1 in axonale Erregbarkeit und synaptische Wirksamkeit.

Wechselwirkung von Syntaxin mit einem Kv1.1 Kanal: einen m&ouml;glichen Mechanismus zur Modulation der neuronalen Erregbarkeit.

Tensione-gated K(+) canali sono cruciali per intrinseca plasticit&agrave; neuronale e presentano un bersaglio per le modulazioni di interazioni proteina-proteina, in particolare, da questo proteine dimostrate da noi su diversi sistemi. Qui, abbiamo studiato l&#39;interazione di un singolo canale Kv1.1 con 1A Sintaxina. Sintaxina diminuito la conduttanza unitaria di tutti gli Stati di conduttanza (due subconductances e una completa conduttanza) e diminuito la loro probabilit&agrave; aperta dal prolungamento del medi chiusi dwell-volte a potenziali depolarizzati. Tuttavia, a potenziali sottosoglia Sintaxina 1A aumentato le probabilit&agrave; degli Stati subconductance. Di conseguenza, la conduttanza macroscopica &egrave; diminuita a potenziali sopra soglia e aumentata a potenziali di soglia. Modellazione numerica basata su analisi steady-state e cinetiche suggerisce: (1) un meccanismo per cui la sintaxina controlla attivazione gating costringendo il pathway di conduttanza solo tramite una sequenza di passaggi discreti attraverso gli Stati di subconductance, eventualmente attraverso una ripartizione dei movimenti cooperativi di sensori di tensione che esistono in Kv1.1; (2) un effetto fisiologico, apparentemente paradossale per un agente che riduce la corrente, di attenuare la frequenza di infornamento di un neurone tramite un aumento della conduttanza di manovra K(+) K(+). Tale modulazione del guadagno di uscita neuronale in risposta a differenti livelli di Sintaxina &egrave; in accordo con il ruolo proposto per Kv1.1 in eccitabilit&agrave; assonale e l&#39;efficacia sinaptica.

Interazione di Sintaxina con un singolo canale di Kv1.1: un possibile meccanismo per la modulazione dell&#39;eccitabilit&agrave; neuronale.

&#x96FB;&#x5727;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x5909;&#x8ABF;&#x7528;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x79C1;&#x9054;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x5206;&#x6CCC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068;&#x5358;&#x4E00; Kv1.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x72B6;&#x614B; (2 &#x3064;&#x306E; subconductances &#x3068;&#x30D5;&#x30EB; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;) &#x30E6;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x78BA;&#x7387;&#x7121;&#x504F;&#x5149;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3067;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x9589;&#x9396;&#x6EDE;&#x7559;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x5EF6;&#x9577;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B9;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30EB;&#x30C9;&#x96FB;&#x4F4D;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3067; 1A subconductance &#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x78BA;&#x7387;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x96FB;&#x4F4D;&#x95BE;&#x5024;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;&#x95BE;&#x5024;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x6570;&#x5024;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x63D0;&#x6848;: (1) whereby &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x5236;&#x5FA1;&#x96FB;&#x6C17;&#x4F1D;&#x5C0E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067; Kv1.1; &#x5B58;&#x5728;&#x96FB;&#x5727;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x306E;&#x5185;&#x8A33;&#x3092;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x7D4C;&#x7531;&#x306E; subconductance &#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x96E2;&#x6563;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x5F37;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x69CB;&#xFF08;2&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x52B9;&#x679C;&#x3067;&#x3001;&#x3069;&#x3046;&#x3084;&#x3089;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5206;&#x6D41;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x706B;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x9006;&#x8AAC;&#x7684;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x51FA;&#x529B;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5229;&#x5F97;&#x5909;&#x8ABF; Kv1.1 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x63A8;&#x5968;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x8EF8;&#x7D22;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x52B9;&#x7387;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00; Kv1.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;: &#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;

K(+) &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xC2E0;&#xACBD;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xD788;, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; exocytotic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; syntaxin 1A Kv1.1 &#xCC44;&#xB110;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC870;&#xC0AC;. Syntaxin &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xD0DC; (&#xB450; &#xAC1C;&#xC758; subconductances &#xBC0F; &#xC804;&#xCCB4; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4;) &#xB2E8;&#xC77C; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; depolarized &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xB73B; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xC720;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC5F0;&#xC7A5; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC5F4;&#xB9B0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, subthreshold &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; syntaxin&#xC5D0;&#xC11C; 1A subconductance &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD655;&#xB960;&#xC774; &#xC99D;&#xAC00;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC784;&#xACC4;&#xAC12; &#xC774;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xC784;&#xACC4;&#xAC12; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC548;&#xC815; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC218;&#xCE58; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC81C;&#xC2DC;: (1)&#xAC00; &#xBA74; syntaxin &#xC81C;&#xC5B4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Kv1.1;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xC555; &#xC13C;&#xC11C;&#xC758; &#xD611;&#xB825; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; subconductance &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xD1B5;&#xB85C;&#xAC00; &#xAC15;&#xC694;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; (2) &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD6A8;&#xACFC;, &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; &#xAC10;&#xC18C; K(+) K(+) &#xC804;&#xCCA0; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC1C;&#xC0AC; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xAC10;&#xC1E0;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xC124;. Syntaxin&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xCD9C;&#xB825; &#xC774;&#xB4DD; &#xAC19;&#xC740; &#xBCC0;&#xC870; axonal &#xD765;&#xBD84; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xD6A8;&#xB2A5; kv1.1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0;&#xB294;.

&#xB2E8;&#xC77C; Kv1.1 &#xCC44;&#xB110; syntaxin &#xC0C1;&#xD638;: &#xC2E0;&#xACBD; &#xD765;&#xBD84;&#xC744; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC7A5;&#xCE58;.

Canales voltaje-bloqueados del k son cruciales para la plasticidad neuronal intr&iacute;nseca y presentan un objetivo para modulaciones por interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na, en particular, por las prote&iacute;nas exocit&oacute;ticas demostradas por nosotros en varios sistemas. Aqu&iacute;, hemos investigado la interacci&oacute;n de un solo canal de Kv1.1 con la sintaxina 1A. Sintaxina hab&iacute;a disminuido la conductancia unitaria de todos los Estados de conductancia (dos subconductances y una completa conductancia) y hab&iacute;a disminuido sus probabilidades abiertas por prolongaci&oacute;n de medias permanencia a veces cerrados en potenciales despolarizados. Sin embargo, en potenciales subliminal sintaxina 1A aument&oacute; las probabilidades de los Estados de subconductance. En consecuencia, la conductancia macrosc&oacute;pica se redujo a potenciales por encima del umbral y aumentaron a potenciales de umbral. Modelamiento num&eacute;rico basado en el an&aacute;lisis del estado de equilibrio y cin&eacute;ticos sugiere: (1) un mecanismo por el que la sintaxina controla activaci&oacute;n gating forzando la v&iacute;a de la conductancia s&oacute;lo a trav&eacute;s de una secuencia de pasos discretos a trav&eacute;s de los Estados de subconductance, posiblemente a trav&eacute;s de un desglose de los movimientos cooperativos de sensores de voltaje que hay en Kv1.1; (2) un efecto fisiol&oacute;gico, aparentemente parad&oacute;jico para un agente que reduce la capacidad actual, de atenuaci&oacute;n de la frecuencia de disparo neuronal mediante un aumento en la capacidad de derivaci&oacute;n de la conductancia. Tal modulaci&oacute;n de la ganancia de salida neuronal en respuesta a diferentes niveles de sintaxina est&aacute; en consonancia con el papel sugerido para Kv1.1 en la excitabilidad axonal y eficacia sin&aacute;ptica.

Interacci&oacute;n de sintaxina con un solo canal de Kv1.1: un posible mecanismo para modular la excitabilidad neuronal.

&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86; Kv2.1 &#x901A;&#x9053;&#x5728;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176; C &#x603B;&#x7AD9;&#x4E0E; syntaxin 1A&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; NSF &#x9644;&#x4EF6;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;&#x9677;&#x9631;&#xFF09; &#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1; (DCVs) &#x7684;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x80DE;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A; Kv2.1 &#x4EA4;&#x4E92; VAMP2&#xFF0C;&#x73B0;&#x65F6;&#x4E5F;&#x6D53;&#x5EA6;&#x504F;&#x9AD8;&#x65F6;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x6C34;&#x75B1;&#x7F51;&#x7F57;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E0E;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053; VAMP2 &#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;&#x4E92;&#x52A8;&#x8111;&#x819C;&#x4E2D;&#x5F97;&#x5230;&#x4F53;&#x73B0;&#x548C;&#x7279;&#x70B9;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F53;&#x5916;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5EFA;&#x6A21;&#x3002;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8; Kv2.1&#x3001; &#x91CE;&#x751F;&#x578B; Kv1.5 &#x548C;&#x5D4C;&#x5408; Kv1.5N/Kv2.1 &#x6E20;&#x9053;&#x900F;&#x9732; VAMP2 &#x589E;&#x5F3A;&#x706D;&#x6D3B; Kv2.1&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; Kv1.5&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E; T1 &#x57DF;&#x7684; Kv2.1 &#x7684; N &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x9274;&#x4E8E;&#x5F53;&#x524D;&#x8C03;&#x63A7;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x9499;&#x8FDB;&#x5165;&#x9AD8;&#x9891;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;VAMP2 Kv2.1 N &#x603B;&#x7AD9;&#x4E0E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x65F6;&#x7684;&#x6301;&#x7EED; Kv2.1 &#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5468;&#x671F;&#x548C;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x89C4;&#x4F8B; VAMP2 &#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E00;&#x8D77; Kv2.1 C &#x603B;&#x7AD9;&#x4E0E; syntaxin &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; DCV &#x6D3B;&#x52A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;

VAMP2 &#x76F4;&#x63A5;&#x4E0E; Kv2.1 &#x52A0;&#x5F3A;&#x901A;&#x9053;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684; N &#x603B;&#x7AD9;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

Recently, we demonstrated that the Kv2.1 channel plays a role in regulated exocytosis of dense-core vesicles (DCVs) through direct interaction of its C terminus with syntaxin 1A, a plasma membrane soluble NSF attachment receptor (SNARE) component. We report here that Kv2.1 interacts with VAMP2, the vesicular SNARE partner that is also present at high concentration in neuronal plasma membrane. This is the first report of VAMP2 interaction with an ion channel. The interaction was demonstrated in brain membranes and characterized using electrophysiological and biochemical analyses in Xenopus oocytes combined with an in vitro binding analysis and protein modeling. Comparative study performed with wild-type and mutant Kv2.1, wild-type Kv1.5, and chimeric Kv1.5N/Kv2.1 channels revealed that VAMP2 enhanced the inactivation of Kv2.1, but not of Kv1.5, via direct interaction with the T1 domain of the N terminus of Kv2.1. Given the proposed role for surface VAMP2 in the regulation of the vesicle cycle and the important role for the sustained Kv2.1 current in the regulation of dendritic calcium entry during high-frequency stimulation, the interaction of VAMP2 with Kv2.1 N terminus may contribute, alongside with the interaction of syntaxin with Kv2.1 C terminus, to the activity dependence of DCV release.

VAMP2 interacts directly with the N terminus of Kv2.1 to enhance channel inactivation.

R&eacute;cemment, nous avons d&eacute;montr&eacute; que le canal de Kv2.1 joue un r&ocirc;le dans r&eacute;glement&eacute; exocytose des v&eacute;sicules de noyau dense (DCVs) gr&acirc;ce &agrave; une interaction directe de son terminus de C avec la syntaxine 1 a, un composant de r&eacute;cepteurs (SNARE) membrane plasmique soluble NSF attachement. Nous rapportons ici que Kv2.1 interagit avec VAMP2, le partenaire SNARE v&eacute;siculaire qui est &eacute;galement pr&eacute;sent &agrave; concentration &eacute;lev&eacute;e dans la membrane plasmique neuronale. Il s&#39;agit du premier rapport d&#39;interaction VAMP2 avec un canal ionique. L&#39;interaction a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e dans les membranes c&eacute;r&eacute;brales et caract&eacute;ris&eacute;es &agrave; l&#39;aide d&#39;&eacute;lectrophysiologiques et des analyses biochimiques dans les ovocytes de Xenopus, combin&eacute;e &agrave; une analyse de liaison in vitro et la mod&eacute;lisation de la prot&eacute;ine. &Eacute;tude comparative r&eacute;alis&eacute;e avec sauvage et mutant Kv2.1 et sauvage Kv1.5 chim&eacute;rique Kv1.5N/Kv2.1 canaux a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que VAMP2 am&eacute;lior&eacute; l&#39;inactivation des Kv2.1, mais pas de Kv1.5, via une interaction directe avec le domaine T1 de l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de Kv2.1. &Eacute;tant donn&eacute; le r&ocirc;le propos&eacute; pour surface que VAMP2 dans la r&eacute;gulation du cycle de la v&eacute;sicule et du r&ocirc;le important pour le Kv2.1 durable actuel dans la r&eacute;gulation de l&#39;entr&eacute;e de calcium dendritiques pendant la stimulation haute fr&eacute;quence, l&#39;interaction entre VAMP2 et Kv2.1 N terminale peuvent contribuer, aux c&ocirc;t&eacute;s d&#39;avec l&#39;interaction de la syntaxine avec Kv2.1 C terminus, &agrave; la d&eacute;pendance de l&#39;activit&eacute; de DCV lib&eacute;ration.

VAMP2 interagit directement avec le terminus de N de Kv2.1 afin d&#39;am&eacute;liorer l&#39;inactivation du canal.

Vor kurzem wir gezeigt, dass der Kv2.1-Kanal in regulierten Exozytose von dichten Kern Bl&auml;schen (DCVs) durch direkte Interaktion &uuml;ber seine C-Terminus mit Syntaxin 1A, einer Plasmamembran L&ouml;sliches NSF Anlage Rezeptor (SNARE) Komponente eine Rolle spielt. Wir berichten hier, dass Kv2.1 mit VAMP2, den vesikul&auml;ren SNARE-Partner interagiert, die auch in neuronalen Plasmamembran in hoher Konzentration vorhanden ist. Dies ist der erste Bericht der VAMP2 Interaktion mit einem Ionenkanal. Die Interaktion zeigte sich im Gehirn Membranen und gekennzeichnet mit elektrophysiologischen und biochemische Analysen im Xenopus Oocytes in Kombination mit einer in-vitro-Bindung Analyse und Modellierung von Protein. Vergleichsstudie mit Wildtyp und Mutant Kv2.1, Wild-Typ Kv1.5 und Chim&auml;ren Kv1.5N/Kv2.1 Kan&auml;le ergab, dass VAMP2 die Inaktivierung von Kv2.1, nicht aber der Kv1.5, durch direkte Interaktion mit der T1-Dom&auml;ne &uuml;ber den N-Terminus der Kv2.1 verbessert. Angesichts der vorgeschlagene Rolle f&uuml;r Oberfl&auml;che, die VAMP2 in der Verordnung die Vesikel-Zyklus und die wichtige Rolle f&uuml;r die nachhaltige Kv2.1 aktuelle bei der Regulierung der dendritischen Kalzium Eintrag w&auml;hrend der hochfrequenten Stimulation, die Wechselwirkung von VAMP2 mit Kv2.1 N-Terminus kann dazu beitragen, neben die Wechselwirkung verschiedener Syntaxin mit Kv2.1 Carboxyl-Terminus, um die Aktivit&auml;t-Abh&auml;ngigkeit der DCV freigeben.

VAMP2 interagiert direkt mit der Amino-Terminus der Kv2.1 zur Verbesserung der Kanal-Inaktivierung.

Recentemente, abbiamo dimostrato che il canale di Kv2.1 gioca un ruolo in regolamentato esocitosi delle vescicole dense-core (DCVs) attraverso l&#39;interazione diretta del suo capolinea C con Sintaxina 1A, membrana plasmatica solubile NSF attachment recettore (rullante) componente. Segnaliamo qui che Kv2.1 interagisce con VAMP2, il partner di rullante vescicolare che &egrave; anche presente in alta concentrazione nella membrana plasmatica neuronale. Questo &egrave; il primo rapporto di interazione VAMP2 con una scanalatura dello ione. L&#39;interazione &egrave; stata dimostrata nelle membrane del cervello e caratterizzati utilizzando elettrofisiologici e analisi biochimiche in Xenopus oocytes combinata con un&#39;associazione in vitro analisi e modellazione di proteine. Studio comparativo eseguito con selvaggio-tipo e mutante Kv2.1, selvaggio-tipo Kv1.5 e chimerici Kv1.5N/Kv2.1 canali ha rivelato che VAMP2 rafforzata l&#39;inattivazione di Kv2.1, ma non di Kv1.5, attraverso l&#39;interazione diretta con il dominio T1 del capolinea del Kv2.1 N. Dato il ruolo proposto per superficie che VAMP2 nella regolazione del ciclo della vescicola e l&#39;importante ruolo per la Kv2.1 sostenuta corrente nella regolazione della voce calcio dendritiche durante la stimolazione ad alta frequenza, l&#39;interazione di VAMP2 con capolinea Kv2.1 N pu&ograve; contribuire, a fianco con l&#39;interazione di Sintaxina con Kv2.1 C terminale, alla dipendenza del DCV Editor attivit&agrave; rilasciare.

VAMP2 interagisce direttamente con la stazione N Kv2.1 per migliorare la inattivazione del canale.

&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x304C; kv2.1 &#x82AF;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a, &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; NSF &#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB; &#xFF08;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#xFF09; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x305D;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; (DCVs) &#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x304C;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; Kv2.1 &#x3082;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; &#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E; VAMP2 &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068; VAMP2 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x982D;&#x8133;&#x306E;&#x819C;&#x3067;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;in vitro &#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x3001;&#x5909;&#x7570; Kv2.1&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; Kv1.5&#x3001;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E; Kv1.5N/Kv2.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; VAMP2 Kv2.1 &#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;Kv1.5&#x3001;Kv2.1 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306E; T1 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x63D0;&#x6848;&#x306E;&#x5F79;&#x5272; VAMP2 &#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x73FE;&#x5728;&#x6A39;&#x72B6;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x9AD8;&#x5468;&#x6CE2;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3001;Kv2.1 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x3068; VAMP2 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A; Kv2.1 &#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3001;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; Kv2.1 C &#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; DCV &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306B;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

VAMP2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B; Kv2.1 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Kv2.1 &#xCC44;&#xB110; &#xADDC;&#xC81C; exocytosis syntaxin 1A, &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB179;&#xB294; NSF &#xCCA8;&#xBD80; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC62C; &#xBB34;) &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC790;&#xC0AC;&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; &#xC18C;&#xD3EC; (DCVs)&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; kv2.1&#xAC00; &#xB610;&#xD55C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC62C; &#xBB34; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; VAMP2, &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. VAMP2 &#xC0C1;&#xD638; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB1CC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4; electrophysiological &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xBC0F; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xCCB4; &#xC678; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xACB0;&#xD569;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xAD50; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC218;&#xD589; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Kv2.1, &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Kv1.5 &#xBC0F; chimeric Kv1.5N/Kv2.1 &#xCC44;&#xB110; &#xBC1D;&#xD600; VAMP2 &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; Kv2.1, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Kv1.5, kv2.1&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; T1 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C;. VAMP2-&#xACE0;&#xC8FC;&#xD30C; &#xC790;&#xADF9;, Kv2.1 N &#xB9D0;&#xB2E8; VAMP2 &#xC0C1;&#xD638; &#xB3D9;&#xC548; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC758; &#xADDC;&#xCE59;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; Kv2.1 &#xAE30; &#xC8FC;&#xAE30; &#xBC0F; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C;, &#xD568;&#xAED8; Kv2.1 C &#xC885;&#xC810; syntaxin &#xC0C1;&#xD638; DCV &#xD65C;&#xB3D9; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4;&#xB97C; &#xB193;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

VAMP2 &#xCC44;&#xB110; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xB294; kv2.1&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xACFC; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Recientemente, hemos demostrado que el canal de Kv2.1 desempe&ntilde;a un papel en la exocitosis regulada de ves&iacute;culas de n&uacute;cleo denso (DCVs) a trav&eacute;s de la interacci&oacute;n directa de su terminal C con sintaxina 1A, un membrana plasm&aacute;tica NSF accesorio del receptor (trampa) componente soluble. Divulgamos aqu&iacute; que Kv2.1 interacciona con VAMP2, el socio SNARE vesicular que tambi&eacute;n est&aacute; presente en altas concentraciones en la membrana de plasma neuronal. Este es el primer informe de interacci&oacute;n VAMP2 con un canal de iones. La interacci&oacute;n fue demostrada en las membranas del cerebro y caracterizado utilizando electrofisiol&oacute;gicos y los an&aacute;lisis bioqu&iacute;micos en ovocitos de Xenopus combinan con un an&aacute;lisis in vitro de la Uni&oacute;n y el modelado de la prote&iacute;na. Estudio comparativo realizado con el tipo salvaje y mutante Kv2.1, Kv1.5 de tipo salvaje y quim&eacute;ricos Kv1.5N/Kv2.1 canales revelan que VAMP2 hab&iacute;a mejorado la inactivaci&oacute;n de Kv2.1, pero no de Kv1.5, a trav&eacute;s de la interacci&oacute;n directa con el dominio de la T1 del terminal N de Kv2.1. Dado el papel propuesto para la superficie que vamp2 en la regulaci&oacute;n del ciclo del ves&iacute;cula y el importante papel para el sostenido Kv2.1 actual en la regulaci&oacute;n de la entrada de calcio dendr&iacute;ticas durante la estimulaci&oacute;n de alta frecuencia, la interacci&oacute;n de VAMP2 con Kv2.1 N terminal puede contribuir, junto con la interacci&oacute;n de la sintaxina con terminal de Kv2.1 C, a la dependencia de la actividad del DCV liberar.

VAMP2 interact&uacute;a directamente con la terminal N de Kv2.1 para mejorar la inactivaci&oacute;n del canal.

&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6F14;&#x793A;&#x4E86;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x5206;&#x590D;&#x6742;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x5708;&#x5957;&#x5668;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x94BE;&#x901A;&#x9053; Kv2.1&#x3001; syntaxin 1A &#x548C; t &#x7F51;&#x7F57;&#x3001; syntaxin 1A/&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25&#x3001; &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0E; syntaxin Kv2.1 &#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8868;&#x660E;&#x662F;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4FC3;&#x8FDB; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x94BE;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x8FD8; VAMP2&#x3001; &#x6C34;&#x75B1;&#x7684;&#x7F51;&#x7F57;&#xFF0C;&#x7269;&#x7406;&#x4E0A;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92; Kv2.1&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9996;&#x5148;&#x9610;&#x660E;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x5145;&#x5206;&#x7684;&#x7F51;&#x7F57;&#xFF0C;&#x4E92;&#x52A8; syntaxin/&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;-25/VAMP2&#x3001; &#x590D;&#x6742;&#x4E0E;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; VAMP2 Kv2.1 &#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x63A2;&#x9488;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684; t-&#x7F51;&#x7F57;&#xFF0C;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E; VAMP2 &#x5E9F;&#x9664;&#x5BF9;&#x901A;&#x9053;&#x706D;&#x6D3B; VAMP2 &#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; VAMP2&#xFF0C;coprecipitated &#x4E0E; Kv2.1 &#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x3002;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x3001; &#x4F53;&#x5916;&#x4E0B;&#x62C9;&#x83DC;&#x5355;&#x663E;&#x793A;&#x5B8C;&#x6574;&#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x672A;&#x80FD;&#x4E0E; Kv2.1 N-&#x548C; C-&#x603B;&#x7AD9;&#x5728;&#x4E32;&#x8054;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x7684;&#x9677;&#x9631;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; Kv2.1 &#x7684;&#x5708;&#x5957;&#x5668;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5E9F;&#x9664;&#x5176;&#x5F81;&#x8058;&#x843D;&#x5165;&#x5708;&#x5957;&#x6EE1;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x800C;&#x4E0D;&#x4E0E;&#x8BE5;&#x9891;&#x9053;&#x4EA4;&#x4E92;&#x65F6;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x662F; t &#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86; syntaxin&#xFF0C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7279;&#x5B9A; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x901A;&#x9053;&#x57DF;&#xFF0C;C1a&#xFF0C;Kv2.1 &#x663E;&#x793A;&#x6765;&#x8C03;&#x89E3;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x4FBF;&#x5229;&#x5316;&#x548C; Kv2.1 N &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x5177;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D1;&#x73B0;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7531; Kv2.1 &#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x65B0;&#x578B;&#x73B0;&#x8C61;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x5206;&#x5B50;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x7F51;&#x7F57;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86;&#x4E0E; Kv2.1 &#x901A;&#x9053;&#x53CA;&#x5176;&#x4E2A;&#x522B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5206;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Previously, we have demonstrated physical and functional interactions of the voltage-gated potassium channel Kv2.1 with the plasma membrane protein components of the exocytotic SNARE complex, syntaxin 1A, and the t-SNARE, syntaxin 1A/SNAP-25, complex. Importantly, the physical interaction of Kv2.1 with syntaxin was shown to be involved in the facilitation of secretion from PC12 cells, which was independent of potassium currents. Recently, we showed that also VAMP2, the vesicular SNARE, interacts physically and functionally with Kv2.1. Here, we first set out to test the interaction of the full SNARE, syntaxin/SNAP-25/VAMP2, complex with the channel. Using the interaction of VAMP2 with Kv2.1 in Xenopus oocytes as a probe, we showed that coexpression of the t-SNARE complex with VAMP2 abolished the VAMP2 effect on channel inactivation and reduced the amount of VAMP2 that coprecipitated with Kv2.1. Further, in vitro pull down assays showed that the full SNARE complex failed to interact with Kv2.1 N- and C-termini in tandem, in contrast to the individual SNARE components. This suggests that the interactions of the SNARE components with Kv2.1 are abolished upon their recruitment into a full SNARE complex, which does not interact with the channel. Other important findings arising from the in vitro study are that the t-SNARE complex, in addition to syntaxin, interacts with a specific C-terminal channel domain, C1a, shown to mediate the facilitation of release by Kv2.1 and that the presence of Kv2.1 N-terminus has crucial contribution to these interactions. These findings provide important insights into the understanding of the complex molecular events involved in the novel phenomenon of secretion facilitation in neuroendocrine cells by Kv2.1.

Formation of the full SNARE complex eliminates interactions of its individual protein components with the Kv2.1 channel.

Auparavant, nous avons d&eacute;montr&eacute; des interactions physiques et fonctionnelles de la canal de potassium voltage-d&eacute;pendant Kv2.1 avec les constituants prot&eacute;iques de la membrane plasmique de l&#39;exocytotique complexe de SNARE, syntaxine 1 a et le t-SNARE, syntaxine 1 a/SNAP-25, complexe. Ce qui est important, l&#39;interaction physique de Kv2.1 avec la syntaxine s&#39;est av&eacute;r&eacute;e &ecirc;tre impliqu&eacute; dans la facilitation de la s&eacute;cr&eacute;tion par les cellules PC12, qui &eacute;tait ind&eacute;pendant des courants de potassium. R&eacute;cemment, nous avons montr&eacute; que VAMP2, le collet v&eacute;siculaire, interagit aussi physiquement et fonctionnellement avec Kv2.1. Ici, nous avons tout d&#39;abord &eacute;nonc&eacute;es pour tester l&#39;interaction de la pi&egrave;ge complet, syntaxine/SNAP-25/VAMP2, complexes avec le canal. En utilisant l&#39;interaction de VAMP2 avec Kv2.1 dans des ovocytes de Xenopus comme sonde, nous avons montr&eacute; que coexpression de la t-SNARE complexe avec VAMP2 abolit l&#39;effet VAMP2 sur l&#39;inactivation de canal et r&eacute;duit la quantit&eacute; de VAMP2 qui coprecipitated avec Kv2.1. De plus, in vitro, d&eacute;roulant essais montre que le complexe SNARE complet avait interagir avec Kv2.1 N - et C-termini en tandem, par contraste avec les composants individuels de la caisse claire. Ceci sugg&egrave;re que les interactions entre les composants SNARE et Kv2.1 sont supprim&eacute;es &agrave; leur recrutement dans un pi&egrave;ge complet complex, qui n&#39;interagit pas avec le canal. Autres constatations importantes d&eacute;coulant de l&#39;&eacute;tude in vitro sont que le complexe t-SNARE, en plus de la syntaxine, interagit avec un sp&eacute;cifique domaine C-terminal canal, C1a, montr&eacute; &agrave; la m&eacute;diation de la facilitation de la lib&eacute;ration de Kv2.1 et que la pr&eacute;sence du Kv2.1 N-terminus a une contribution cruciale &agrave; ces interactions. Ces r&eacute;sultats fournissent des renseignements importants sur la compr&eacute;hension des &eacute;v&eacute;nements mol&eacute;culaires complexes impliqu&eacute;s dans le ph&eacute;nom&egrave;ne nouveau de facilitation de s&eacute;cr&eacute;tion dans les cellules neuroendocrines par Kv2.1.

Formation de la complexe de SNARE complet &eacute;limine les interactions de ses composants individuels de prot&eacute;ine avec le canal de Kv2.1.

Zuvor haben wir physische und funktionale Wechselwirkungen der Spannung-Gating Kaliumkanals Kv2.1 mit der Plasmamembran Proteinkomponenten der exocytotic SNARE-komplexe, Syntaxin 1A, und t-SNARE, Syntaxin 1A/SNAP-25, Komplex gezeigt. Wichtig ist, zeigte die physikalische Wechselwirkung von Kv2.1 mit Syntaxin Erleichterungen bei der Sekretion von PC12 Zellen beteiligt sein, die war unabh&auml;ngig von Kalium Str&ouml;me. Vor kurzem haben wir gezeigt, dass auch VAMP2, die vesikul&auml;re SNARE, interagiert physisch und funktionell mit Kv2.1. Hier zuerst vorhatten um zu testen, das Zusammenspiel von der vollen SNARE, Syntaxin/SNAP-25/VAMP2, komplexe mit dem Kanal. Verwenden das Zusammenspiel von VAMP2 mit Kv2.1 in Xenopus Oocytes als Sonde, wir haben gezeigt, dass Coexpression von t-SNARE Komplex mit VAMP2 die VAMP2 Wirkung auf Kanal Inaktivierung abgeschafft und reduziert die Menge an VAMP2, die coprecipitated mit Kv2.1. Weitere, in-vitro-Pull-down-Tests zeigten, dass der volle SNARE-Komplex mit Kv2.1 N - und C-Termini im Tandem, im Gegensatz zu der einzelnen SNARE-Komponenten interagieren konnte. Dies deutet darauf hin, dass die Interaktionen der SNARE-Komponenten mit Kv2.1 auf ihre Einstellung in eine volle SNARE-Komplex, abgeschafft werden, die keine Interaktion mit dem Kanal bietet. Andere wichtige Erkenntnisse aus der in-vitro-Studie sind, dass eine bestimmte C-terminalen Kanal Dom&auml;ne, C1a, gezeigt, die Erleichterung der Freigabe zu vermitteln durch Kv2.1 der t-SNARE-Komplex, neben Syntaxin, interagiert und dass die Anwesenheit von Kv2.1 N-Terminus entscheidend zur diese Interaktionen hat. Diese Erkenntnisse Einblicke wichtige in das Verst&auml;ndnis der komplexen molekularen Ereignisse das neue Ph&auml;nomen der Sekretion Erleichterung in neuroendokrinen Zellen von Kv2.1 beteiligt.

Bildung von der vollen SNARE-Komplex beseitigt Interaktionen seiner einzelnen Protein-Komponenten mit dem Kv2.1-Kanal.

In precedenza, abbiamo dimostrato interazioni fisiche e funzionali, il canale del potassio voltaggio-dipendente Kv2.1 con i componenti di proteina di membrana plasmatica di laccio questo complesso, Sintaxina 1A e t-SNARE, Sintaxina 1A/SNAP-25, complesso. Importante, l&#39;interazione fisica di Kv2.1 con Sintaxina ha dimostrato di essere coinvolti nella facilitazione della secrezione da cellule PC12, che &egrave; stato indipendente delle correnti di potassio. Recentemente, abbiamo dimostrato che anche VAMP2, il rullante vescicolare, interagisce fisicamente e funzionalmente con Kv2.1. Qui, prima partiamo per testare l&#39;interazione del rullante pieno, Sintaxina/SNAP-25/VAMP2, complesso con il canale. Mediante l&#39;interazione di VAMP2 con Kv2.1 in Xenopus oocytes come una sonda, abbiamo dimostrato che coexpression di t-SNARE complesso con VAMP2 abolito l&#39;effetto VAMP2 sull&#39;inattivazione del canale e ridotto la quantit&agrave; di VAMP2 che coprecipitated con Kv2.1. Dosaggi a discesa ulteriore, in vitro ha dimostrato che il complesso SNARE completo non &egrave; riuscito a interagire con Kv2.1 N - e C-termini in tandem, in contrasto con i singoli componenti SNARE. Questo suggerisce che le interazioni dei componenti del rullante con Kv2.1 sono abolite dopo il loro reclutamento in una trappola completa complessa, che non interagiscono con il canale. Altre importanti scoperte derivanti dallo studio in vitro sono che il complesso t-SNARE, oltre a Sintaxina, interagisce con uno specifico dominio C-terminale canale, C1a, indicato per mediare la facilitazione del rilascio di Kv2.1 e che la presenza di Kv2.1 N-terminus ha contributo fondamentale di queste interazioni. Questi risultati forniscono importanti intuizioni la comprensione delle complesse vicende molecolari coinvolti nel fenomeno della facilitazione di secrezione nelle cellule neuroendocrine romanzo da Kv2.1.

Formazione di laccio completo complesso elimina le interazioni dei suoi componenti proteiche individuali con il canale di Kv2.1.

&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5206;&#x6CCC;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x96FB;&#x5727;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; Kv2.1&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a &#x3068; t &#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a/&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25&#x3001;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x4FC3;&#x9032;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B; Kv2.1 &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x307E;&#x305F; VAMP2&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x3001;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684; Kv2.1 &#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x30D5;&#x30EB;&#x306E;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;-25/VAMP2&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x3002;VAMP2 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; Kv2.1 &#x3068;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x305D;&#x306E; t &#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; VAMP2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059; VAMP2 &#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;&#x5171;&#x6C88; VAMP2 Kv2.1 &#x306E;&#x91CF;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;in vitro &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x5B8C;&#x5168;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306A;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3068; Kv2.1 N- &#x304A;&#x3088;&#x3073; C-&#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB; &#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; &#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x81EA;&#x5206;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x306B;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30D5;&#x30EB; &#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x8981; Kv2.1 &#x3068;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vitro &#x7814;&#x7A76;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x305F;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C; t SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5186;&#x6ED1;&#x5316;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; Kv2.1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3059;&#x7279;&#x5B9A; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; C1a&#x3001;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;Kv2.1 N &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5206;&#x6CCC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B7;&#x30EA;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x65B0;&#x5947;&#x73FE;&#x8C61;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; Kv2.1 &#x95A2;&#x4E0E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5B8C;&#x5168;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;kv2.1 &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; exocytotic &#xC62C; &#xBB34;&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xCE7C;&#xB968; &#xCC44;&#xB110; Kv2.1, syntaxin 1A, t-&#xC62C; &#xBB34;, syntaxin 1A/&#xC2A4;&#xB0C5;-25, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, syntaxin&#xC640; kv2.1&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC218; PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84; &#xBE44;&#xC758; &#xCD09;&#xC9C4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD588;&#xB358; &#xCE7C;&#xB968; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; VAMP2, &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC62C; &#xBB34; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; kv2.1&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBA3C;&#xC800; &#xC804;&#xCCB4; &#xC62C; &#xBB34;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xCC29;&#xC218; syntaxin/&#xC2A4;&#xB0C5;-25/VAMP2, &#xCC44;&#xB110; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;. T &#xC62C; &#xBB34;&#xC758; &#xADF8; coexpression&#xC640; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; VAMP2 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB85C; Kv2.1 &#xC0AC;&#xC6A9;, VAMP2 &#xCC44;&#xB110; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; VAMP2 &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; kv2.1&#xC640; coprecipitated vamp2&#xC758; &#xC591;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C;. &#xCD94;&#xAC00;, &#xCCB4; &#xC678; &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC804;&#xCCB4; &#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD568;&#xAED8; Kv2.1 N-&#xC640; C-&#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC62C; &#xBB34; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC2E4;&#xD328; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xCC44;&#xB110; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, &#xC804;&#xCCB4; &#xC62C; &#xBB34;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xCC44;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; Kv2.1 &#xC62C; &#xBB34; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC0C1;&#xD638; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4; &#xC678; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; syntaxin, &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; t-&#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xCC44;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, C1a, kv2.1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; Kv2.1 N-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC740; kv2.1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; neuroendocrine &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84; &#xBE44; &#xCD09;&#xC9C4;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD604;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC62C; &#xBB34;&#xC758; &#xD615;&#xC131; Kv2.1 &#xCC44;&#xB110; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Previamente, hemos demostrado interacciones f&iacute;sicas y funcionales del canal de potasio voltaje Kv2.1 con los componentes de la prote&iacute;na de membrana plasm&aacute;tica de la trampa exocit&oacute;tico complejo, sintaxina 1A y el t-SNARE, sintaxina 1A/SNAP-25, complejo. Lo importante, la interacci&oacute;n f&iacute;sica de Kv2.1 con la sintaxina mostr&oacute; ser involucrados en la facilitaci&oacute;n de la secreci&oacute;n de las c&eacute;lulas PC12, que era independiente de las corrientes de potasio. Recientemente, hemos demostrado que tambi&eacute;n VAMP2, el SNARE vesicular, interacciona f&iacute;sicamente y funcionalmente con Kv2.1. Aqu&iacute;, primero salimos a probar la interacci&oacute;n de la trampa completa, sintaxina/SNAP-25/VAMP2, complejo con el canal. Mediante la interacci&oacute;n de VAMP2 con Kv2.1 en ovocitos de Xenopus como sonda, demostramos que la coexpresi&oacute;n de la t-SNARE complejo con VAMP2 suprimido el efecto VAMP2 de inactivaci&oacute;n del canal y redujo la cantidad de VAMP2 que coprecipitated con Kv2.1. Adem&aacute;s, in vitro desplegable ensayos mostr&oacute; que el complejo SNARE completo no interactuar con Kv2.1 N - y C-termini en t&aacute;ndem, en contraste con los componentes individuales de la trampa. Esto sugiere que se supriman las interacciones de los componentes de la trampa con Kv2.1 sobre su contrataci&oacute;n lazo completo complejo, que no interact&uacute;a con el canal. Otros hallazgos importantes derivados del estudio in vitro son que el complejo t-SNARE, adem&aacute;s de sintaxina, interact&uacute;a con un espec&iacute;fico canal dominio c-terminal, C1a, Kv2.1 queda demostrado que median la facilitaci&oacute;n de la liberaci&oacute;n y que la presencia de Kv2.1 N-terminal tiene una contribuci&oacute;n crucial a estas interacciones. Estos resultados proporcionan informaci&oacute;n importante en la comprensi&oacute;n de los complejos eventos moleculares involucrados en el fen&oacute;meno de la novela de facilitaci&oacute;n de la secreci&oacute;n en las c&eacute;lulas neuroendocrinas por Kv2.1.

Formaci&oacute;n de la trampa completa compleja elimina las interacciones de sus componentes individuales de la prote&iacute;na con el canal de Kv2.1.

&#x5DF2;&#x77E5;&#x8868;&#x793A;&#x6574;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x67A2;&#x548C;&#x5916;&#x5468;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684; Kv1.1 &#x9891;&#x9053; syntaxin 1A&#x3001; &#x80DE;&#x673A;&#x68B0;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x793A;&#x589E;&#x52A0;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x7684; Kv1.1 &#x901A;&#x9053;&#x65F6; coexpressed &#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5B83;&#x51CF;&#x5C11;&#x5355;&#x4E00;&#x901A;&#x9053;&#x7535;&#x5BFC;&#x5B8F;&#x89C2;&#x7535;&#x6D41;&#x5E76;&#x6253;&#x5F00;&#x6982;&#x7387;&#x3002;&#x7531;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x53CD;&#x4E49;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684; syntaxin &#x5DF2;&#x89E3;&#x51B3;&#x5728;&#x6B64;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3001; &#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x3001; &#x751F;&#x5316;&#x3001; &#x53CA;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5316;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x8FD9;&#x79CD;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;syntaxin &#x4E2D;&#x7684; Kv1.1 &#x51FD;&#x6570;&#x8C03;&#x5236;&#x53D1;&#x6325;&#x53CC;&#x91CD;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF1A; &#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x548C;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x91CF;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x6269;&#x5927;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x548C; syntaxin &#x53CC;&#x91CD;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x3002;Syntaxin &#x4E2D;&#x7684; Kv1.1 &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x53CC;&#x91CD;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x770B;&#x4F3C;&#x62EE;&#x6297;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x5FAE;&#x8C03;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x6548;&#x80FD;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;

Syntaxin &#x53CC;&#x901A;&#x9053;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7535;&#x5BFC;&#x884C;&#x52A8;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282; Kv1.1&#x3002;

The Kv1.1 channel that is expressed throughout the central and peripheral nervous system is known to interact with syntaxin 1A, a member of the exocytosis machinery protein complex. This interaction was previously shown to increase the macroscopic currents of the presynaptic Kv1.1 channel when coexpressed in Xenopus oocytes, while it decreased the unitary channel conductance and open probability. This apparent discrepancy has been resolved in this work, using electrophysiological, biochemical, and immunohistochemical analyses in oocytes by overexpression and antisense knockdown of syntaxin. Here, we demonstrate that syntaxin plays a dual role in the modulation of Kv1.1 function: enhancement of the channel's surface expression along with attenuation of single channel ion flux. These findings broaden the scope of channels and transporters that are dually modulated by syntaxin. Although the dual functioning of syntaxin in modulation of Kv1.1 channel activity may seem antagonistic, the combination of the two mechanisms may provide a useful means for fine-tuning axonal excitability and synaptic efficacy.

Syntaxin modulates Kv1.1 through dual action on channel surface expression and conductance.

Le canal de Kv1.1 qui s&#39;exprime &agrave; travers le syst&egrave;me nerveux central et p&eacute;riph&eacute;rique est connu pour interagir avec la syntaxine 1 a, un membre de la prot&eacute;ine exocytose de machines complexe. Cette interaction a &eacute;t&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment montr&eacute;e &agrave; accro&icirc;tre les courants macroscopiques du canal Kv1.1 pr&eacute;synaptique lorsque coexpriment dans des ovocytes de Xenopus, alors qu&#39;il diminuait la conductance des canaux unitaire et ouvrir la probabilit&eacute;. Cette apparente contradiction a &eacute;t&eacute; r&eacute;solue dans ce travail, &agrave; l&#39;aide d&#39;&eacute;lectrophysiologiques, biochimiques et analyses immunohistochimiques dans les ovocytes de la surexpression et knockdown antisens de la syntaxine. Ici, nous d&eacute;montrons que syntaxine joue un double r&ocirc;le dans la modulation de la fonction Kv1.1 : mise en valeur de l&#39;expression en surface de la cha&icirc;ne ainsi que l&#39;att&eacute;nuation du flux ionique monocanal. Ces constatations &eacute;largissement la port&eacute;e des canaux et des transporteurs qui sont doublement modul&eacute;es par la syntaxine. Bien que le fonctionnement dual de la syntaxine dans la modulation de l&#39;activit&eacute; des canaux Kv1.1 peut sembler antagoniste, la combinaison des deux m&eacute;canismes peut-&ecirc;tre offrir un moyen utile pour affiner l&#39;excitabilit&eacute; axonale et l&#39;efficacit&eacute; synaptique.

Syntaxine module Kv1.1 par double action sur l&#39;expression superficielle de canal et de la conductance.

Der Kv1.1-Kanal, der w&auml;hrend des zentralen und peripheren Nervensystems ausgedr&uuml;ckt wird ist bekannt, dass die Interaktion mit Syntaxin 1A, Mitglied der Exozytose Maschinen Proteinkomplex. Diese Interaktion war zuvor gezeigt, erh&ouml;hen die makroskopische Str&ouml;me von der pr&auml;synaptischen Kv1.1-Kanal, wenn im Xenopus Oocytes, coexpressed, w&auml;hrend es den einheitlichen Kanal Leitwert sank und Wahrscheinlichkeit zu &ouml;ffnen. Diese offensichtliche Diskrepanz wurde in dieser Arbeit, mittels elektrophysiologische, biochemische und immunhistochemische Analysen in Eizellen durch eine &Uuml;berexpression und antisense Niederschlag von Syntaxin behoben. Hier zeigen wir, dass Syntaxin spielt eine Doppelrolle in der Modulation der Kv1.1-Funktion: Verbesserung der Oberfl&auml;che des Senders Ausdruck zusammen mit D&auml;mpfung von einkanaligen Ion Flussmittel. Diese Erkenntnisse erweitern den Anwendungsbereich der Kan&auml;le und Transporter, die sowohl vom Syntaxin moduliert werden. Obwohl das duale Funktionieren des Syntaxin Modulation des Kv1.1 Channel-Aktivit&auml;ten antagonistischen erscheinen mag, kann die Kombination der zwei Mechanismen f&uuml;r die Feineinstellung axonale Erregbarkeit und synaptische Wirksamkeit ein n&uuml;tzliches Mittel vorsehen.

Syntaxine moduliert Kv1.1 durch dual Aktion auf Kanal Oberfl&auml;che Ausdruck und Leitwert.

Il canale di Kv1.1 che si esprime in tutto il sistema nervoso centrale e periferico &egrave; noto per interagire con Sintaxina 1A, un membro della proteina esocitosi macchinari complesso. Questa interazione &egrave; stata mostrata in precedenza per aumentare le correnti macroscopiche del canale presinaptico Kv1.1 quando coespressi in ovociti di Xenopus, mentre &egrave; diminuita la conduttanza unitaria canale e aprire la probabilit&agrave;. Questa apparente discrepanza &egrave; stato risolto in questo lavoro, usando elettrofisiologiche, biochimiche e analisi immunoistochimica in ovociti di sovraespressione e antisenso atterramento di Sintaxina. Qui, ci dimostrano che Sintaxina svolge un duplice ruolo nella modulazione della funzione Kv1.1: valorizzazione dell&#39;espressione superficiale del canale insieme ad attenuazione del flusso di ioni a canale singolo. Questi risultati ampliano l&#39;ambito di canali e trasportatori che sono doppiamente modulati dalla Sintaxina. Sebbene il funzionamento dual di Sintaxina nella modulazione dell&#39;attivit&agrave; del canale Kv1.1 pu&ograve; sembrare antagonistico, la combinazione dei due meccanismi possa fornire un mezzo utile per la regolazione dell&#39;eccitabilit&agrave; assonale e l&#39;efficacia sinaptica.

Sintaxina modula Kv1.1 attraverso la duplice azione sul canale espressione superficiale e la conduttanza.

&#x4E2D;&#x67A2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x5168;&#x4F53;&#x304C;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B; Kv1.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 a&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x6A5F;&#x68B0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3092;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x5358;&#x4E00;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x304C;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#xFF09; &#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D; Kv1.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;&#x96FB;&#x6D41;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x78BA;&#x7387;&#x3092;&#x958B;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x4EE5;&#x524D;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x76F8;&#x9055;&#x306F;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3001;&#x4F7F;&#x7528;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x305D;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; Kv1.1 &#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3067;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CD;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;: &#x5358;&#x4E00;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6D41;&#x675F;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5897;&#x5F37;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x4E8C;&#x91CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x5E83;&#x3052;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; Kv1.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x62EE;&#x6297;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x4FBF;&#x5229;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x8EF8;&#x7D22;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x5FAE;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; Kv1.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; &#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC911;&#xC559;&#xACFC; &#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xD45C;&#xD604; Kv1.1 &#xCC44;&#xB110; syntaxin 1A, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; exocytosis &#xAE30;&#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD655;&#xB960; presynaptic Kv1.1 &#xCC44;&#xB110; &#xB54C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; coexpressed&#xC758; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB958; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58;&#xAC00; &#xC791;&#xD488;, electrophysiological, &#xC0DD;&#xD654;&#xD559;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC0F; immunohistochemical &#xBD84;&#xC11D; oocytes&#xC5D0;&#xC11C; overexpression&#xC640; syntaxin&#xC758; &#xC13C;&#xC2A4; &#xCD5C;&#xC800;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xADF8; syntaxin Kv1.1 &#xD568;&#xC218; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC774;&#xC911; &#xC5ED;&#xD560;: &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xC774;&#xC628; &#xD50C;&#xB7ED;&#xC2A4;&#xC758; &#xAC10;&#xC1C4; &#xD568;&#xAED8; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xC774;&#xB4E4;&#xC774; &#xBC1C;&#xACAC; &#xCC44;&#xB110;&#xACFC; &#xC774;&#xC911; syntaxin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xB41C; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC758; &#xBC94;&#xC704; &#xD655;&#xB300;. Kv1.1 &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; syntaxin&#xC758; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB300;&#xB9BD; &#xCC98;&#xB7FC; &#xBCF4;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBE44;&#xB85D; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC870;&#xD569; axonal &#xD765;&#xBD84; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xD6A8;&#xB2A5; &#xBBF8;&#xC138; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC218;&#xB2E8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Syntaxin &#xCC44;&#xB110; &#xD45C;&#xBA74; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xC561;&#xC158;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Kv1.1 &#xBCC0;&#xC870;.

El canal de Kv1.1 que se expresa en todo el sistema nervioso central y perif&eacute;rico es conocido para interactuar con la sintaxina 1A, miembro del complejo de la prote&iacute;na de maquinaria de exocitosis. Esta interacci&oacute;n fue demostrada previamente para aumentar las corrientes macrosc&oacute;picas del canal Kv1.1 presin&aacute;ptico cuando coexpressed en ovocitos de Xenopus, mientras que disminuy&oacute; la conductancia del canal unitario y abrir la probabilidad. Esta aparente discrepancia ha sido resuelta en este trabajo, utilizando electrofisiol&oacute;gicos, bioqu&iacute;micas y an&aacute;lisis immunohistochemical en ovocitos por sobreexpresi&oacute;n y antisentido ca&iacute;da de sintaxina. Aqu&iacute;, demostramos que sintaxina desempe&ntilde;a un papel dual en la modulaci&oacute;n de la funci&oacute;n Kv1.1: mejora de la expresi&oacute;n superficial del canal junto con atenuaci&oacute;n del flujo de iones monocanal. Estos resultados ampl&iacute;an el alcance de canales y transportadores que doblemente son moduladas por la sintaxina. Aunque pueda parecer antag&oacute;nico el funcionamiento dual de sintaxina en la modulaci&oacute;n de la actividad del canal de Kv1.1, la combinaci&oacute;n de los dos mecanismos puede proporcionar un medio &uacute;til para ajustar la excitabilidad axonal y eficacia sin&aacute;ptica.

Sintaxina modula Kv1.1 por doble acci&oacute;n sobre la expresi&oacute;n superficial de la canal y la conductancia.

&#x4E3A; K(+) &#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; Kv2.1&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x8BAE;&#x4EE5;&#x5F71;&#x54CD;&#x901A;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684; N &#x548C; C &#x603B;&#x7AD9;&#x57DF;&#x95F4;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8BC1;&#x660E;&#x6CA1;&#x6709;&#x901A;&#x9053;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x76F4;&#x63A5;&#x5F71;&#x54CD; N/C &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x89C4;&#x7BA1;&#x56E0;&#x7D20;&#x5927;&#x591A;&#x6570; Kv2.1 &#x901A;&#x9053;&#x4EA4;&#x4E92;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x5176; C &#x603B;&#x7AD9;&#x3002;&#x4E5F;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;VAMP2&#xFF0C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x504F;&#x9AD8;&#x65F6;&#x7684;&#x6C34;&#x75B1;&#x7F51;&#x7F57;&#x662F;&#x8BB0;&#x5F55;&#x4E0B;&#x6765;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5F71;&#x54CD; Kv2.1 &#x6D47;&#x6CE8;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5176; N &#x603B;&#x7AD9;&#x552F;&#x4E00;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x76EE;&#x6807;&#x5DF2;&#x6620;&#x5C04;&#x5377;&#x5165; Kv2.1 N/C &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5730;&#x70B9;&#x9644;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE; VAMP2 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; N &#x603B;&#x7AD9;&#x8981;&#x6C42; C &#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; N &#x603B;&#x7AD9;&#x4ECE;&#x5916;&#x9762;&#xFF0C;&#x8BA9; VAMP2 &#x8FDB;&#x5165;&#x73AF;&#x7ED5;&#x4F34;&#x968F;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9996;&#x5148;&#x786E;&#x5B9A; Kv2.1 N &#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x975E;&#x5E38;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x672A;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x4F20;&#x8FBE;&#x4E0E; VAMP2&#xFF0C;&#x548C;&#x5176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&quot;&#x575E;&#x5FAA;&#x73AF;&quot;Kv2.1 N &#x603B;&#x7AD9;&#x3001; VAMP2 &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Kv2.1 C &#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;C1a &#x7684;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x63A5;&#x4E0B;&#x6765;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3001; &#x751F;&#x5316;&#x3001; &#x751F;&#x7406;&#x3001; &#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5206;&#x6790;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x8BA1;&#x7B97;&#x751F;&#x7269;&#x5B66; (&#x4ECE;&#x5934;&#x5EFA;&#x6A21;&#x3001; &#x575E;&#xFF0C;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6620;&#x5C04;&#x4E0A; VAMP2 &#x548C; Kv2.1 &#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x91CD;&#x6392;&#x7684; Kv2.1 &#x80DE;&#x8D28;&#x57DF;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; VAMP2 &#x5E72;&#x6270;&#x575E;&#x5FAA;&#x73AF;&#x548C; C1a&#xFF0C;&#x6D47;&#x6CE8;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E5F;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6; Kv &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x8282; Kv2.1 &#x706D;&#x6D3B;&#x3002;

&#x91CD;&#x6392;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x951A;&#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x89E3;&#x8C03;&#x5236;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7684; Kv &#x901A;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x57DF;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;

Interdomain interactions between intracellular N and C termini have been described for various K(+) channels, including the voltage-gated Kv2.1, and suggested to affect channel gating. However, no channel regulatory protein directly affecting N/C interactions has been demonstrated. Most Kv2.1 channel interactions with regulatory factors occur at its C terminus. The vesicular SNARE that is also present at a high concentration in the neuronal plasma membrane, VAMP2, is the only protein documented to affect Kv2.1 gating by binding to its N terminus. As its binding target has been mapped near a site implicated in Kv2.1 N/C interactions, we hypothesized that VAMP2 binding to the N terminus requires concomitant conformational changes in the C terminus, which wraps around the N terminus from the outside, to give VAMP2 access. Here, we first determined that the Kv2.1 N terminus, although crucial, is not sufficient to convey functional interaction with VAMP2, and that, concomitant to its binding to the "docking loop" at the Kv2.1 N terminus, VAMP2 binds to the proximal part of the Kv2.1 C terminus, C1a. Next, using computational biology approaches (ab initio modeling, docking, and molecular dynamics simulations) supported by molecular biology, biochemical, electrophysiological, and fluorescence resonance energy transfer analyses, we mapped the interaction sites on both VAMP2 and Kv2.1 and found that this interaction is accompanied by rearrangements in the relative orientation of Kv2.1 cytoplasmic domains. We propose that VAMP2 modulates Kv2.1 inactivation by interfering with the interaction between the docking loop and C1a, a mechanism for gating regulation that may pertain also to other Kv channels.

Rearrangements in the relative orientation of cytoplasmic domains induced by a membrane-anchored protein mediate modulations in Kv channel gating.

Interdomaine interactions entre termini intracellulaire de N et C ont &eacute;t&eacute; d&eacute;crites pour diff&eacute;rents canaux k, y compris le Kv2.1 voltage-d&eacute;pendants et a propos&eacute; d&#39;affecter le blocage du canal. Toutefois, aucune prot&eacute;ine r&eacute;gulatrice de canal qui concernent directement les interactions N/C n&#39;a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e. La plupart interactions de canal de Kv2.1 avec des facteurs de r&eacute;gulation se produisent &agrave; son extr&eacute;mit&eacute; C terminale. Le collet v&eacute;siculaire qui est &eacute;galement pr&eacute;sent &agrave; une concentration &eacute;lev&eacute;e dans la membrane plasmique neuronale VAMP2, est la seule prot&eacute;ine document&eacute;e pour affecter Kv2.1 Gate en se liant &agrave; son terminus de N. Comme sa cible de la liaison a &eacute;t&eacute; localis&eacute; pr&egrave;s d&#39;un site impliqu&eacute; dans les interactions Kv2.1 N/C, nous avons suppos&eacute; que la liaison de VAMP2 jusqu&#39;au terminus de N exige des changements conformationnels concomitantes dans la partie C terminale, qui entoure l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de l&#39;ext&eacute;rieur, pour donner un acc&egrave;s VAMP2. Ici, nous avons d&#39;abord d&eacute;termin&eacute; que le terminus de Kv2.1 N, bien qu&#39;indispensable, n&#39;est pas suffisant pour transmettre l&#39;interaction fonctionnelle avec VAMP2 et celle, concomitante &agrave; sa liaison &agrave; la &laquo; boucle d&#39;amarrage &raquo; au terminus Kv2.1 N, VAMP2 se lie &agrave; la partie proximale du terminus Kv2.1 C, C1a. Ensuite, en utilisant des approches de biologie computationnelle (simulations de dynamique de mod&eacute;lisation, d&#39;amarrage et mol&eacute;culaire ab initio) pris en charge par la biologie mol&eacute;culaire, biochimie, &eacute;lectrophysiologique et analyses de fluorescence par r&eacute;sonance &eacute;nerg&eacute;tique transfert, nous mapp&eacute; les sites d&#39;interaction &agrave; la fois VAMP2 et Kv2.1 et trouv&eacute; que cette interaction est accompagn&eacute;e de r&eacute;arrangements de l&#39;orientation relative des Kv2.1 domaines cytoplasmiques. Nous proposons que le VAMP2 module Kv2.1 inactivation en interf&eacute;rant avec l&#39;interaction entre la boucle d&#39;amarrage et C1a, un m&eacute;canisme de d&eacute;clenchement de r&egrave;glement qui peut se rapportent &eacute;galement aux autres canaux Kv.

R&eacute;arrangements dans l&#39;orientation relative des domaines cytoplasmiques induite par une modulation m&eacute;diate prot&eacute;ines membranaires ancr&eacute;es &agrave; blocage de canaux Kv.

Dom&auml;nen&uuml;bergreifende Interaktionen zwischen intrazellul&auml;re N und C-Termini wurden f&uuml;r verschiedene K(+) Kan&auml;le, einschlie&szlig;lich der Spannung-Gating Kv2.1 und riet dazu, Kanal Anspritzung beeinflussen beschrieben. Jedoch ist kein Kanal regelndes Protein unmittelbar betrifft N/C Wechselwirkungen nachgewiesen. Die meisten Kv2.1 Kanal Interaktionen mit regulatorischen Faktoren auftreten, seine C-Terminus. Die vesikul&auml;re SNARE, die auch bei einer hohen Konzentration in den neuronalen Plasmamembran, VAMP2, ist das einzige Protein dokumentiert um Kv2.1 Anspritzung von Bindung zu seinen N-Terminus zu beeinflussen. Wie seine Bindungsziel nahe einer Website in Kv2.1 N/C Interaktionen verwickelt zugeordnet wurde, vermutete, dass wir, dass VAMP2 Bindung an das N-Terminus gleichzeitige Konformationsver&auml;nderungen in der C-Terminus, die umflie&szlig;t das N-Terminus von au&szlig;en erfordert, VAMP2 Zugang zu verschaffen. Hier haben wir zun&auml;chst festgestellt, dass das Kv2.1 N-Terminus, obwohl entscheidend, nicht ausreicht, funktionelle Interaktion mit VAMP2 und die damit einhergehende seine Bindung an die &quot;docking-Schleife&quot; im Kv2.1-N-Terminus, VAMP2 Bindung an den proximalen Teil von den Kv2.1 C-Terminus, C1a zu vermitteln. Mit Bioinformatik Ans&auml;tzen (ab initio Modellierung, docking und Molekulare Dynamik-Simulationen) von Molekularbiologie, biochemische, elektrophysiologische, und Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer Analysen unterst&uuml;tzt, wir die Interaktion-Seiten auf VAMP2 und Kv2.1 zugeordnet und festgestellt, dass diese Interaktion von Umlagerungen in der relativen Orientierung des Kv2.1 zytoplasmatische Dom&auml;nen begleitet wird. Wir schlagen VAMP2 moduliert Kv2.1 Inaktivierung durch Eingriffe in die Interaktion zwischen den docking-Schleife und C1a, einen Mechanismus f&uuml;r die Anspritzung Verordnung, die auch auf andere Kv-Kan&auml;le beziehen kann.

Umlagerungen in der relativen Orientierung zytoplasmatische Dom&auml;nen durch eine Membran verankerte Proteine vermitteln Modulationen im Kv Kanal Anspritzung induziert.

Interazioni tra domini intracellulari termini N e C sono state descritte per vari canali K(+), tra cui il Kv2.1 di tensione-gated e suggerito per influire sul canale gating. Tuttavia, non &egrave; stata dimostrata alcuna proteina normativo canale che incide direttamente sulle interazioni N/C. La maggior parte delle interazioni del canale Kv2.1 con fattori normativi si verificano al suo capolinea C. Il rullante vescicolare che &egrave; anche presente in alta concentrazione nella membrana del plasma neuronale, VAMP2, &egrave; la proteina sola documentata per interessare Kv2.1 gating legandosi al suo capolinea N. Come suo obiettivo vincolante &egrave; stato mappato nei pressi di un sito implicato nelle interazioni Kv2.1 N/C, abbiamo ipotizzato che VAMP2 associazione fino al capolinea N richiede cambiamenti conformazionali concomitante in C terminale, che avvolge il capolinea N dall&#39;esterno, per dare accesso VAMP2. Qui, in primo luogo abbiamo determinato che il capolinea Kv2.1 N, sebbene fondamentale, non &egrave; sufficiente a trasmettere l&#39;interazione funzionale con VAMP2 e che, concomitante alla sua associazione per il ciclo&quot;docking&quot; al capolinea Kv2.1 N, VAMP2 si lega alla parte prossimale del Kv2.1 C terminale, C1a. Successivamente, utilizzando approcci di biologia computazionale (ab initio modellazione, docking e molecolare simulazioni dinamiche) sostenuti dalla biologia molecolare, biochimica, elettrofisiologico e analisi di fluorescenza resonance energy transfer, mappati i siti di interazione sia VAMP2 e Kv2.1 e trovato che questa interazione &egrave; accompagnata da riarrangiamenti nell&#39;orientamento relativo dei domini citoplasmatici Kv2.1. Proponiamo che VAMP2 modula Kv2.1 inattivazione interferendo con l&#39;interazione tra il ciclo di docking e C1a, un meccanismo per gating regolamento che possa riguardano anche altri canali Kv.

Riarrangiamenti nell&#39;orientamento relativo dei domini citoplasmatici, indotta da un modulazioni mediare proteine di membrana ancorate nel canale di Kv gating.

&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E; N &#x304A;&#x3088;&#x3073; C &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x96FB;&#x4F4D; Kv2.1 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3068;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x958B;&#x9589;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5; N/C &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;.&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E; Kv2.1 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E9;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x305D;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3001;VAMP2&#x3001;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; Kv2.1 &#x305D;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6587;&#x66F8;&#x5316;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; Kv2.1 N/C &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;VAMP2 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306B; VAMP2 &#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5916;&#x5074;&#x304B;&#x3089;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x3092;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x4F75;&#x7528;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x307E;&#x305A; Kv2.1 N &#x672B;&#x7AEF;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x304C;&#x3001;VAMP2 &#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; Kv2.1 N &#x672B;&#x7AEF;&#x300C;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x300D;&#x306B;&#x3001;VAMP2 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B; C1a Kv2.1 C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x4ED8;&#x968F;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4F1D;&#x3048;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x5224;&#x65AD;&#x3002;&#x6B21;&#x306B;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;, &#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x4F1D;&#x9054;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8A08;&#x7B97;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1; (&#x30A2;&#x30D6;&#x30A4;&#x30CB;&#x30B7;&#x30AA; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3001;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5B50;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;VAMP2 &#x3068; Kv2.1 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4F34;&#x3046; Kv2.1 &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068; C1a &#x4ED6; Kv &#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x3082;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x898F;&#x5236;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; VAMP2 &#x304C; Kv2.1 &#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Kv &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x958B;&#x9589;&#x306B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x578B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x8ABF;&#x65B9;&#x5F0F;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3002;

&#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; N &#xBC0F; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xAC04;&#xC758; &#xC6B0;&#xC120; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; K(+) &#xCC44;&#xB110;, &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; kv2.1&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE0; &#xCC44;&#xB110; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC9C1;&#xC811; N/C &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xCC44;&#xB110; &#xADDC;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; Kv2.1 &#xCC44;&#xB110; &#xC0C1;&#xD638; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC778;&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xC62C; &#xBB34;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; VAMP2, &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; kv2.1&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xC5EC; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBB38;&#xC11C;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; Kv2.1 N/C &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xADFC;&#xCC98; &#xB9E4;&#xD551;&#xB41C;&#xB85C; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; VAMP2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; VAMP2 &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC678;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xC8FC;&#xC704;&#xB97C; &#xAC10;&#xC2F8;&#xB294; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBA3C;&#xC800; Kv2.1 N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xBE44;&#xB85D; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;&#xB294; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xC9C0; VAMP2, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;, Kv2.1 N &#xC885;&#xC810;&#xC5D0; &quot;&#xB3C4;&#xD0B9; &#xB8E8;&#xD504;&quot; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;, VAMP2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; C1a Kv2.1 C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xADFC; &#xC704; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0C1;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC74C;, &#xB9E4;&#xD551;&#xB41C; vamp2&#xC640; kv2.1&#xC5D0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC804;&#xC0B0; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD; (ab initio &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;, &#xB3C4;&#xD0B9;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBD84;&#xC790; &#xC5ED;&#xD559; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;) &#xBD84;&#xC790; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;, &#xC0DD;&#xD654;&#xD559;, electrophysiological, &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xBD84;&#xC11D; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xACE0;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; Kv2.1 &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3D9;&#xBC18; &#xBC1C;&#xACAC;. VAMP2 &#xB3C4;&#xD0B9; &#xB8E8;&#xD504;&#xC640; C1a, &#xB610;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; k v &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADDC;&#xC815; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xC5EC; Kv2.1 &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBCC0;&#xC870; &#xD55C;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;.

Kv &#xCC44;&#xB110; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC5D0; &#xB9C9; &#xC815;&#xBC15; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC911;&#xC7AC; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4;.

Se han descrito interacciones entre dominios intracelulares termini N y C para diversos canales de k, incluyendo el Kv2.1 de voltaje-bloqueados y sugiri&oacute; que afectan la compuerta del canal. Sin embargo, no se ha demostrado ninguna prote&iacute;na reguladora del canal que afectan directamente a las interacciones de N/C. Mayor&iacute;a de las interacciones de canal de Kv2.1 con factores reguladores ocurre en su terminal C. La trampa vesicular que tambi&eacute;n est&aacute; presente en una alta concentraci&oacute;n en la membrana plasm&aacute;tica neuronal, VAMP2, es la &uacute;nica prote&iacute;na documentada para afectar Kv2.1 compuerta atando a su N-terminal. Como su destino de enlace ha sido asignado cerca de un sitio implicado en las interacciones Kv2.1 N/C, presumimos que VAMP2 vinculante a la terminal N requiere cambios conformacionales concomitantes en la terminal C, que se envuelve alrededor de la terminal N desde el exterior, para dar acceso VAMP2. Aqu&iacute;, primero determinamos que la terminal de Kv2.1 N, aunque crucial, no es suficiente para transmitir la interacci&oacute;n funcional con VAMP2 y que, concomitante a su uni&oacute;n al &quot;lazo de acoplamiento&quot; en la terminal de Kv2.1 N, VAMP2 ATA a la parte proximal de la terminal de Kv2.1 C, C1a. A continuaci&oacute;n, utilizando los enfoques de la biolog&iacute;a computacional (simulaciones de din&aacute;mica molecular, acoplamiento y ab initio modelado) apoyados por biolog&iacute;a molecular, bioqu&iacute;mica, electrofisiol&oacute;gico y an&aacute;lisis de transferencia de energ&iacute;a de resonancia de fluorescencia, asigna los sitios de interacci&oacute;n VAMP2 y Kv2.1 y hab&iacute;a encontrado que esta interacci&oacute;n es acompa&ntilde;ada por los cambios en la orientaci&oacute;n relativa de Kv2.1 dominios citopl&aacute;smicos. Proponemos que VAMP2 modula inactivaci&oacute;n Kv2.1 al interferir con la interacci&oacute;n entre el acoplamiento lazo y C1a, un mecanismo de regulaci&oacute;n que puede pertenecen tambi&eacute;n a otros canales Kv que bloquean.

Cambios en la orientaci&oacute;n relativa de dominios citopl&aacute;smicos inducida por un mediato modulaciones de la prote&iacute;na de membrana-ancladas en Kv canal compuerta.

&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28; (&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;) &#x7EC4;&#x6210;&#x53D8;&#x5316;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x5E94;&#x5BF9;&#x635F;&#x4F24;&#x3001; &#x7A81;&#x8D77;&#x548C;&#x8F74;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x4E0E;&#x5206;&#x5B50;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x673A;&#x5236;&#x5DF2;&#x5927;&#x91CF;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7531;&#x4E8E;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#xFF0C;&#x6574;&#x4E2A;&#x795E;&#x7ECF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x63D0;&#x53D6;&#x7684;&#x53EF;&#x9760;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x673A;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x65B0;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5927;&#x9F20;&#x5468;&#x56F4;&#x795E;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5B75;&#x5316;&#x7684;&#x6E17;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x548C;&#x6EB6;&#x8840; nonaxonal &#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x5269;&#x4F59;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x4E30;&#x5BCC;&#x6750;&#x6599;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x795E;&#x7ECF;&#x5206;&#x518C;&#x5931;&#x6563;&#x77ED;&#x7F51;&#x6BB5;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x7684;&#x5236;&#x5907;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x8FD9;&#x9879;&#x65B0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x964D;&#x4F4E;&#x8840;&#x6E05;&#x548C;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C61;&#x67D3;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8F74;&#x7A81;&#x5185;&#x5BB9;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x5916;&#x5468;&#x795E;&#x7ECF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;

Localized changes in the composition of axonal cytoplasm (axoplasm) are critical for many biological processes, including axon guidance, responses to injury, neurite outgrowth, and axon-glia interactions. Biochemical and molecular studies of these mechanisms have been heavily focused on in vitro systems because of the difficulty of obtaining subcellular extracts from mammalian tissues in vivo. As in vitro systems might not replicate the in vivo situation, reliable methods of axoplasm extraction from whole nerve would be helpful for mechanistic studies on axons. Here we develop and evaluate a new procedure for preparation of axoplasm from rat peripheral nerve, based on incubation of separated short segements of nerve fascicles in hypotonic medium to separate myelin and lyse nonaxonal structures, followed by extraction of the remaining axon-enriched material. We show that this new procedure reduces serum and glial cell contamination and facilitates proteomic analyses of axonal contents.

Axoplasm isolation from peripheral nerve.

Changements localis&#xE9;s dans la composition du cytoplasme axonal (axoplasme) sont essentielles pour de nombreux processus biologiques, y compris le guidage axonal, les r&#xE9;ponses &#xE0; des blessures, la croissance des neurites, et des axones des cellules gliales-interactions. Des &#xE9;tudes biochimiques et mol&#xE9;culaires de ces m&#xE9;canismes ont &#xE9;t&#xE9; fortement ax&#xE9;e sur des syst&#xE8;mes in vitro en raison de la difficult&#xE9; d&#x26;#39;obtenir des extraits de tissus de mammif&#xE8;res subcellulaires in vivo. Comme dans les syst&#xE8;mes in vitro pourrait ne pas reproduire la situation in vivo, des m&#xE9;thodes fiables d&#x26;#39;extraction axoplasme de nerf entier serait utile pour les &#xE9;tudes m&#xE9;canistiques sur les axones. Ici, nous d&#xE9;velopper et d&#x26;#39;&#xE9;valuer une nouvelle proc&#xE9;dure pour la pr&#xE9;paration de axoplasme du nerf p&#xE9;riph&#xE9;rique chez le rat, bas&#xE9; sur l&#x26;#39;incubation d&#x26;#39;s&#xE9;par&#xE9;s segements courts de faisceaux nerveux dans un milieu hypotonique &#xE0; s&#xE9;parer de la my&#xE9;line et lyser structures nonaxonal, suivie par l&#x26;#39;extraction de l&#x26;#39;axone reste-mat&#xE9;riau enrichi. Nous montrons que cette nouvelle proc&#xE9;dure permet de r&#xE9;duire la contamination de cellules gliales et le s&#xE9;rum et facilite les analyses prot&#xE9;omiques de contenu axonales.

Isolement axoplasme de nerfs p&#xE9;riph&#xE9;riques

Lokalisierte &Auml;nderungen in der Zusammensetzung der axonalen Zytoplasma (Axoplasm) sind entscheidend f&uuml;r viele biologische Prozesse, einschlie&szlig;lich Axon Anleitung, Antworten zu Verletzungen, Neurit Auswuchs und Axon-Glia Interaktionen. Biochemische und Molekulare Studien dieser Mechanismen haben stark konzentriert auf in-vitro-Systemen wegen der Schwierigkeit, subzellulare Ausz&uuml;ge aus in-vivo S&auml;ugetier-Gewebe zu erhalten. Wie in Vitro Systeme m&ouml;glicherweise nicht repliziert die in-vivo Situation, zuverl&auml;ssige Methoden der Axoplasm Extraktion von ganzen Nerv w&auml;re hilfreich f&uuml;r mechanistische Studien &uuml;ber Axone. Hier wir Entwicklung und Bewertung ein neues Verfahrens zur Vorbereitung der Axoplasm aus Ratte peripherer Nerven, basierend auf einer Bebr&uuml;tungszeit von getrennten kurze Segmente der Nerv Faszikeln hypotones Medium zu trennen Myelin und Nonaxonal Strukturen, gefolgt durch Extraktion des verbleibenden Axon angereicherten Materials aufzul&ouml;sen. Wir zeigen, dass dieses neue Verfahren Serum und Gliazelle Kontamination reduziert und Proteomic Analysen axonale Inhaltsverzeichnis erleichtert.

Axoplasm Isolation von peripheren Nerven.

Localizzate le modifiche nella composizione del citoplasma assonale (assoplasma) sono fondamentali per molti processi biologici, tra cui orientamento assone, risposte a lesioni, escrescenza dei neuriti e assone-glia Interazioni. Studi di biochimici e molecolari di questi meccanismi sono stati fortemente concentrati su sistemi in vitro a causa della difficolt&agrave; di ottenere sottocellulari estratti da tessuti di mammiferi in vivo. Come in vitro sistemi non potrebbero replicare la situazione in vivo, affidabili metodi di estrazione assoplasma dall&#39;intero nervo sarebbe utile per gli Studi meccanicistici su assoni. Qui abbiamo sviluppare e valutare una nuova procedura per la preparazione di assoplasma da nervi periferici ratto, basato sull&#39;incubazione di separati brevi segmenti di fascicoli nervosi in mezzo ipotonico per separare la mielina e lyse nonaxonal strutture, seguite da estrazione del restante materiale arricchita di assone. Dimostriamo che questa nuova procedura riduce il siero e la contaminazione delle cellule gliali e facilita l&#39;analisi proteomic Sommario assonale.

Isolamento assoplasma dai nervi periferici.

&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x66F4;&#xFF08;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x50B7;&#x5BB3;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3057;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D44;&#x7E54;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x306E;in vitro&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002; in vivo&#x306E;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3067;&#x8907;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x4E0A;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306B;&#x5BCC;&#x3080;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;nonaxonal&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x4F4E;&#x5F35;&#x57F9;&#x5730;&#x4E2D;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x675F;&#x306E;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x77ED;&#x3044;segements&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x3092;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6E05;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6DF7;&#x5165;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x5185;&#x5BB9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5206;&#x96E2;

&#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; axonal &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; (axoplasm)&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xACFC;&#xC815;, &#xCD95; &#xC0AD; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xBD80;&#xC0C1;&#xACFC; axon &#xBA85;&#xACFC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xBB34; &#xAC81; &#xAC8C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; subcellular &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30;&#xC758; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4; &#xC678;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC0C1;&#xD669; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; axoplasm &#xCD94;&#xCD9C;&#xC758; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC5D0; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xD3C9;&#xAC00; axoplasm myelin&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; nonaxonal &#xAD6C;&#xC870;, &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xCD95; &#xC0AD; &#xB18D;&#xCD95; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBBF8;&#xD589;&#xC744; lyse &#xACE0;&#xC628; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xACBD; fascicles&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC9E7;&#xC740; &#xC5F4;&#xAD50;&#xD658;&#xAE30;&#xC758; &#xBD80; &#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC950; &#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC808;&#xCC28;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0C8; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xD608; &#xCCAD; &#xBC0F; &#xAD50; &#xC138;&#xD3EC; &#xC624;&#xC5FC; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC0F; axonal &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC758; proteomic &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; axoplasm &#xACA9;&#xB9AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cambios localizados en la composici&#xF3;n del citoplasma axonal (axoplasma) son fundamentales para muchos procesos biol&#xF3;gicos, incluyendo el direccionamiento del ax&#xF3;n, las respuestas a las lesiones, el crecimiento neur&#xED;tico, y las interacciones ax&#xF3;n-glia. Los estudios bioqu&#xED;micos y moleculares de estos mecanismos han sido fuertemente centrado en sistemas in vitro debido a la dificultad de obtenci&#xF3;n de extractos subcelulares de tejidos de mam&#xED;feros in vivo. Al igual que en sistemas in vitro no se puede reproducir la situaci&#xF3;n in vivo, m&#xE9;todos confiables de la extracci&#xF3;n de axoplasma de los nervios en su conjunto ser&#xED;a muy &#xFA;til para los estudios sobre los mecanismos de los axones. Aqu&#xED; desarrollar y evaluar un nuevo procedimiento para la preparaci&#xF3;n de axoplasma de nervio perif&#xE9;rico de rata, basado en la incubaci&#xF3;n de separados segements cortos de fasc&#xED;culos nerviosos en medio hipot&#xF3;nico para separar la mielina y lisar las estructuras nonaxonal, seguido por extracci&#xF3;n de los restantes ax&#xF3;n material enriquecido. Se demuestra que este nuevo procedimiento reduce la contaminaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas glial y el suero y facilita los an&#xE1;lisis prote&#xF3;micos de contenidos axonal.

Axoplasma Aislamiento de los nervios perif&#xE9;ricos

&#x57FA;&#x7840;&#x5BF9;&#x795E;&#x7ECF;&#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x8C03;&#x67E5;&#x7A81;&#x51FA;&#x4E86;&#x8F74;&#x7A81;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x83B7;&#x53D6;&#x5173;&#x8054;&#x4E2D;&#x53D7;&#x4F24;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x8F74;&#x7A81;&#x8FD0;&#x8F93;&#x86CB;&#x767D;&#x5408;&#x594F;&#x7684;&#x5168;&#x9762;&#x89C6;&#x56FE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6210;&#x5206;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x540E;&#x9F20;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7ECF;&#x6324;&#x538B;&#x4F24;&#x7684;&#x8FDE;&#x5B57;&#x3002;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31;/&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x7684; iTRAQ &#x6807;&#x8BB0;&#x80BD;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x548C;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x7ED3;&#x624E;&#x7F51;&#x7AD9;&#x63ED;&#x793A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x594F;&#x8FD0;&#x987A;&#x884C;&#x548C;&#x9006;&#x884C;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#x4E0D;&#x5141;&#x8BB8;&#x7B80;&#x5355;&#x8D4B;&#x503C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7C7B;&#x522B; &#xFF1B;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E3B;&#x6210;&#x5206;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x6790;&#x4E0E;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x805A;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x6700;&#x7A81;&#x51FA;&#x7684;&#x635F;&#x4F24;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6218;&#x7565;&#x89C4;&#x907F;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#x548C;&#x5141;&#x8BB8;&#x4ECE;&#x5B9A;&#x91CF; neuroproteomics &#x5B9E;&#x9A8C;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E0A;&#x6709;&#x610F;&#x4E49;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x63D0;&#x53D6;&#x3002;299 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7A81;&#x51FA;&#x8868;&#x660E;&#x4E86;&#x4E3B;&#x6210;&#x5206;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x6790;&#x3001; &#x54EA;&#x4E9B;&#x5173;&#x8054;&#x4E0E;&#x9006;&#x884C; 145 &#x548C; 154 &#x4E0E;&#x987A;&#x884C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x635F;&#x4F24;&#x540E;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x53D8;&#x5316;&#x65E2;&#x987A;&#x884C;&#x548C;&#x9006;&#x884C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x53D7;&#x4F24;&#x7684;&#x5916;&#x5468;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x548C;&#x5F3A;&#x8C03; RNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x5E73;&#x79FB;&#x673A;&#x6784;&#x5728;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;

&#x8F74;&#x7A81;&#x8FD0;&#x8F93;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x8C03;&#x52A8;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x673A;&#x68B0;&#x5230;&#x75C5;&#x53D8;&#x90E8;&#x4F4D;&#x5728;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7ECF;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x4FEE;&#x590D;&#x3002;

Investigations of the molecular mechanisms underlying responses to nerve injury have highlighted the importance of axonal transport systems. To obtain a comprehensive view of the protein ensembles associated with axonal transport in injured axons, we analyzed the protein compositions of axoplasm concentrated at ligatures following crush injury of rat sciatic nerve. LC-MS/MS analyses of iTRAQ-labeled peptides from axoplasm distal and proximal to the ligation sites revealed protein ensembles transported in both anterograde and retrograde directions. Variability of replicates did not allow straightforward assignment of proteins to functional transport categories; hence, we performed principal component analysis and factor analysis with subsequent clustering to determine the most prominent injury-related transported proteins. This strategy circumvented experimental variability and allowed the extraction of biologically meaningful information from the quantitative neuroproteomics experiments. 299 proteins were highlighted by principal component analysis and factor analysis, 145 of which correlate with retrograde and 154 of which correlate with anterograde transport after injury. The analyses reveal extensive changes in both anterograde and retrograde transport proteomes in injured peripheral axons and emphasize the importance of RNA binding and translational machineries in the axonal response to injury.

Axonal transport proteomics reveals mobilization of translation machinery to the lesion site in injured sciatic nerve.

Les enqu&#xEA;tes sur les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui sous-tendent les r&#xE9;ponses aux l&#xE9;sions nerveuses ont soulign&#xE9; l&#x26;#39;importance des syst&#xE8;mes de transport axonal. Pour obtenir une vue d&#x26;#39;ensemble des ensembles de prot&#xE9;ines associ&#xE9;es au transport axonal dans les axones l&#xE9;s&#xE9;s, nous avons analys&#xE9; les compositions de prot&#xE9;ines de axoplasme concentr&#xE9;s &#xE0; ligatures apr&#xE8;s une l&#xE9;sion par &#xE9;crasement du nerf sciatique du rat. Analyses LC-MS/MS de peptides iTRAQ-&#xE9;tiquet&#xE9;s de axoplasme distale et proximale vers les sites de ligature a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; des ensembles de prot&#xE9;ines transport&#xE9;es dans les deux directions ant&#xE9;rogrades et r&#xE9;trogrades. Variabilit&#xE9; de la r&#xE9;plique ne permet pas l&#x26;#39;affectation directe des prot&#xE9;ines &#xE0; des cat&#xE9;gories de transport fonctionnels, d&#x26;#39;o&#xF9;, nous avons effectu&#xE9; une analyse en composantes principales et analyse factorielle avec le regroupement &#xE0; la suite de d&#xE9;terminer les plus importants li&#xE9;s aux blessures prot&#xE9;ines transport&#xE9;es. Cette strat&#xE9;gie contourn&#xE9; la variabilit&#xE9; exp&#xE9;rimentale et a permis l&#x26;#39;extraction d&#x26;#39;informations biologiquement significatif &#xE0; partir des exp&#xE9;riences neuroprot&#xE9;omique quantitatives. 299 prot&#xE9;ines ont &#xE9;t&#xE9; mis en &#xE9;vidence par analyse en composantes principales et l&#x26;#39;analyse factorielle, dont 145 en corr&#xE9;lation avec r&#xE9;trograde et dont 154 en corr&#xE9;lation avec le transport ant&#xE9;rograde apr&#xE8;s une blessure. Les analyses r&#xE9;v&#xE8;lent des changements importants dans prot&#xE9;omes de transport &#xE0; la fois ant&#xE9;rogrades et r&#xE9;trogrades dans bless&#xE9;s axones p&#xE9;riph&#xE9;riques et de souligner l&#x26;#39;importance des m&#xE9;canismes de liaison d&#x26;#39;ARN et de translation dans la r&#xE9;ponse axonale &#xE0; des blessures.

Prot&#xE9;omique transport axonal r&#xE9;v&#xE8;le la mobilisation des machines de traduction au site de l&#xE9;sion au nerf sciatique bless&#xE9;s

Untersuchungen &uuml;ber die molekularen Mechanismen Antworten zu Nervenverletzung haben die Bedeutung der axonale Transportsysteme hervorgehoben. Erhalten Sie einen umfassenden &Uuml;berblick &uuml;ber die Protein-Ensembles zugeordnete axonale Transport im verletzten Axone, analysierten wir die Protein-Kompositionen von Axoplasm an Ligaturen nach Crush-Verletzung der Ratte Ischiasnerv konzentriert. LC-MS/MS-Analysen von iTRAQ beschriftete Peptide aus Axoplasm distale und proximale auf die Verbindung, die Websites offenbart Protein-Ensembles in Anterograde und retrograde Richtungen transportiert. Variabilit&auml;t der Wiederholungen erlaubte nicht die einfache Zuordnung von Proteinen zu funktionalen Transport Kategorien; Daher f&uuml;hrten wir Hauptkomponentenanalyse und Faktorenanalyse mit nachfolgenden clustering, um die bekanntesten im Zusammenhang mit Verletzungen transportierten Proteine zu bestimmen. Diese Strategie experimentelle Variabilit&auml;t umgangen und erlaubt die Extraktion von biologisch sinnvolle Informationen aus den quantitativen Neuroproteomics-Experimenten. 299 Proteine wurden durch Hauptkomponentenanalyse und Faktorenanalyse, 145 der welche korrelieren mit retrograde und 154 der welche korrelieren mit Anterograde Transport nach Verletzung hervorgehoben. Die Analysen zeigen umfangreiche Ver&auml;nderungen sowohl Anterograde und retrograde Transport Proteome in verletzten peripheren Axone und betonen die Bedeutung der RNA binden und translational Maschinen die axonale Reaktion auf Verletzungen.

Axonale Transport Proteomics enth&uuml;llt Mobilisierung &Uuml;bersetzung Maschinen zur L&auml;sion Site in verletzten Ischiasnerv.

Le indagini dei meccanismi molecolari sottostanti risposte a lesione del nervo hanno evidenziato l&#39;importanza dei sistemi di trasporto assonale. Per ottenere una visione completa degli Ensemble proteina associati al trasporto assonale in assoni feriti, abbiamo analizzato le composizioni della proteina dell&#39;assoplasma concentrato a legature a seguito di lesioni di schiacciamento del nervo sciatico di ratto. LC-MS/MS analisi di peptidi iTRAQ-contrassegnati da assoplasma distale e prossimale per la legatura siti rivelato Ensemble proteina trasportati sia anterograda che retrograde direzioni. Variabilit&agrave; delle repliche non permetteva semplice assegnazione delle proteine a categorie di trasporto funzionale; quindi, abbiamo effettuato analisi delle componenti principali e analisi fattoriale con successivo clustering per determinare le pi&ugrave; importanti proteine trasportate correlati a lesioni. Questa strategia eluse variabilit&agrave; sperimentale e ha permesso l&#39;estrazione di informazione biologicamente significative da esperimenti quantitativi neuroproteomics. 299 proteine sono state evidenziate dall&#39;analisi delle componenti principali e l&#39;analisi fattoriale, 145 dei quali in correlazione con retrogrado e 154 del quale correlazione con trasporto anterograda dopo l&#39;infortunio. Le analisi rivelano vasti cambiamenti in sia anterograda e retrograda trasporto ai proteomi in assoni periferici feriti e sottolineano l&#39;importanza di RNA binding e macchinari traslazionale nella risposta al danno assonale.

Trasporto assonale proteomics rivela mobilizzazione del macchinario di traduzione per il sito di lesione nervo sciatico feriti.

&#x795E;&#x7D4C;&#x640D;&#x50B7;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x8F38;&#x9001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x632B;&#x6EC5;&#x5F8C;&#x306B;&#x5B57;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3057;&#x3066;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7D44;&#x6210;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9060;&#x4F4D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;iTRAQ&#x6A19;&#x8B58;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;LC-MS/MS&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x9806;&#x884C;&#x6027;&#x3068;&#x9006;&#x884C;&#x4E21;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x8F38;&#x9001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8907;&#x88FD;&#x3055;&#x306E;&#x3070;&#x3089;&#x3064;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B4;&#x30EA;&#x3078;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x200B;&#x200B;&#x3066;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x50B7;&#x5BB3;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x8F38;&#x9001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x4E3B;&#x6210;&#x5206;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x52D5;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3057;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;neuroproteomics&#x5B9F;&#x9A13;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x610F;&#x5473;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 299&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x640D;&#x50B7;&#x5F8C;&#x306E;&#x9806;&#x884C;&#x6027;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x9006;&#x884C;&#x3068;154&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;145&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x4E3B;&#x6210;&#x5206;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x9806;&#x884C;&#x6027;&#x3068;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x640D;&#x50B7;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x3057;&#x3066;RNA&#x7D50;&#x5408;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7FFB;&#x8A33;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x8EF8;&#x7D22;&#x8F38;&#x9001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x8CA0;&#x50B7;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x7FFB;&#x8A33;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC870;&#xC0AC; axonal &#xAD50;&#xD1B5; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBD80;&#xC0C1;&#xB41C; axons axonal &#xC804;&#xC1A1; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14;&#xC758; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xC810;&#xC744; &#xC5BB;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; axoplasm &#xD569;&#xC790; &#xC950; &#xC88C; &#xACE8; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC758; &#xD638;&#xAC10; &#xBD80;&#xC0C1; &#xB2E4;&#xC74C;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC870;&#xC131;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. ITRAQ &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; axoplasm &#xC6D0;&#xC2EC; &#xBC0F; &#xC778;&#xC811; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xACF5;&#xAC1C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14; &#xCC38;&#xAC00;&#xC790;&#xC640; &#xC5ED;&#xD589; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC1A1; &#xACB0; &#xCC30;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; LC-MS/MS &#xBD84;&#xC11D;. &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC94;&#xC8FC;; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD560;&#xB2F9;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC8FC;&#xC131;&#xBD84; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xBD80;&#xC0C1; &#xAD00;&#xB828; &#xC218;&#xC1A1;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xC815; &#xC774;&#xD6C4;&#xC758; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1; &#xC694;&#xC18C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218;&#xD589;. &#xC774; &#xC804;&#xB7B5;&#xACFC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xD53C;&#xD560; &#xC218; &#xC591;&#xC801; neuroproteomics &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xBBF8; &#xC788;&#xB294; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 299 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC8FC;&#xC131;&#xBD84; &#xBD84;&#xC11D;&#xACFC; &#xC694;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D;, &#xC5ED;&#xD589;&#xACFC; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC0C1;&#xAD00;&#xC758; 145 &#xACE0; &#xBD80;&#xC0C1; &#xD6C4; &#xC804;&#xC1A1; &#xCC38;&#xAC00;&#xC790;&#xC640; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC0C1;&#xAD00;&#xC758; 154&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xC870; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC1C; &#xBAA8;&#xB450; &#xCC38;&#xAC00;&#xC790; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC640; &#xBD80;&#xC0C1;&#xB41C; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC804;&#xC1A1; proteomes RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xD658; &#xAE30;&#xACC4; &#xBD80;&#xC0C1; axonal &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Axonal &#xC804;&#xC1A1; proteomics&#xC758; &#xBD80;&#xC0C1;&#xC774; &#xC88C; &#xACE8; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC758; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC88;&#xC5ED; &#xAE30;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC6D0;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Las investigaciones sobre los mecanismos moleculares que subyacen a las respuestas a la lesi&#xF3;n del nervio se ha destacado la importancia de los sistemas de transporte axonal. Para obtener una visi&#xF3;n global de los conjuntos de prote&#xED;nas asociadas con el transporte axonal en los axones lesionados, se analizaron las composiciones de prote&#xED;nas de axoplasma se concentraron en las ligaduras despu&#xE9;s de una lesi&#xF3;n por aplastamiento del nervio ci&#xE1;tico de la rata. LC-MS/MS an&#xE1;lisis de p&#xE9;ptidos iTRAQ-etiquetados de axoplasma distal y proximal a la ligadura de los sitios revelaron conjuntos de prote&#xED;nas que se transportan en ambas direcciones anter&#xF3;grada y retr&#xF3;grada. La variabilidad de las repeticiones no se permite la asignaci&#xF3;n directa de las prote&#xED;nas a las categor&#xED;as de transporte funcionales, por lo que se realiz&#xF3; un an&#xE1;lisis de componentes principales y an&#xE1;lisis factorial con la agrupaci&#xF3;n despu&#xE9;s de determinar las lesiones m&#xE1;s importantes relacionados con las prote&#xED;nas transportadas. Esta estrategia de eludir la variabilidad experimental y permite la extracci&#xF3;n de informaci&#xF3;n biol&#xF3;gica significativa por parte de los experimentos neuroproteomics cuantitativos. 299 prote&#xED;nas fueron destacados por el an&#xE1;lisis de componentes principales y an&#xE1;lisis factorial, 145 de los cuales se correlacionan con la retr&#xF3;grada y 154 de las cuales se correlacionan con el transporte anter&#xF3;grado despu&#xE9;s de la lesi&#xF3;n. Los an&#xE1;lisis muestran grandes cambios en los proteomas de transporte, tanto anter&#xF3;grado y retr&#xF3;grado de los axones perif&#xE9;ricos lesionados y hacer hincapi&#xE9; en la importancia de los mecanismos de uni&#xF3;n del RNA y de la traducci&#xF3;n en la respuesta a una lesi&#xF3;n axonal.

Prote&#xF3;mica transporte axonal revela la movilizaci&#xF3;n de maquinaria de traducci&#xF3;n a la zona de la lesi&#xF3;n en el nervio ci&#xE1;tico lesionado

&#x9006;&#x884C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4ECE;&#x8F74;&#x7A81;&#x7D22;&#x739B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5185;&#x5728;&#x518D;&#x751F;&#x673A;&#x5236;&#x5DF4;&#x80FA;&#x5916;&#x56F4;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x4E0D;&#x662F;&#x5341;&#x5206;&#x6E05;&#x695A;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x6307;&#x8BC1;&#x5927;&#x7EA6; 900 &#x78F7;&#x9178;&#x9006;&#x884C;&#x635F;&#x4F24;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x548C;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x635F;&#x4F24;&#x4F53;&#x5185;&#x53CD;&#x5E94;&#x5927;&#x7EA6; 4500 &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5927;&#x7EA6; 400 &#x5197;&#x4F59;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x4FE1;&#x4EE4;&#x7F51;&#x7EDC;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5230; 39 &#x5377;&#x5165;&#x5BF9;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x4E2A;&#x522B;&#x4EFB;&#x804C;&#x4EBA;&#x6570;&#x8FC7;&#x591A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x96C6;&#x7EBF;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; Abl&#x3001; AKT&#x3001; p38&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6444;&#x52A8;&#x5F71;&#x54CD;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7A81;&#x8D77;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;Abl &#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x96C6;&#x7EBF;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x6270;&#x52A8;&#x4E86;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x5355;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6444;&#x52A8;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x795E;&#x7ECF;&#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5197;&#x4F59;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5230;&#x635F;&#x4F24;&#x54CD;&#x5E94;&#x9C81;&#x68D2;&#x6027;&#x3002;

&#x4E2D;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x9006;&#x884C;&#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Retrograde signaling from axon to soma activates intrinsic regeneration mechanisms in lesioned peripheral sensory neurons; however, the links between axonal injury signaling and the cell body response are not well understood. Here, we used phosphoproteomics and microarrays to implicate approximately 900 phosphoproteins in retrograde injury signaling in rat sciatic nerve axons in vivo and approximately 4500 transcripts in the in vivo response to injury in the dorsal root ganglia. Computational analyses of these data sets identified approximately 400 redundant axonal signaling networks connected to 39 transcription factors implicated in the sensory neuron response to axonal injury. Experimental perturbation of individual overrepresented signaling hub proteins, including Abl, AKT, p38, and protein kinase C, affected neurite outgrowth in sensory neurons. Paradoxically, however, combined perturbation of Abl together with other hub proteins had a reduced effect relative to perturbation of individual proteins. Our data indicate that nerve injury responses are controlled by multiple regulatory components, and suggest that network redundancies provide robustness to the injury response.

Signaling to transcription networks in the neuronal retrograde injury response.

Signalisation r&#xE9;trograde de l&#x26;#39;axone vers le soma active des m&#xE9;canismes de r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration intrins&#xE8;ques dans l&#xE9;s&#xE9;s neurones sensoriels p&#xE9;riph&#xE9;riques, mais les liens entre la signalisation des l&#xE9;sions axonales et la r&#xE9;ponse du corps cellulaire ne sont pas bien comprises. Ici, nous avons utilis&#xE9; phosphoprot&#xE9;omique et des micror&#xE9;seaux d&#x26;#39;impliquer environ 900 phosphoprot&#xE9;ines des blessures r&#xE9;trograde de signalisation dans les axones du nerf sciatique de rat in vivo et environ 4500 dans les transcriptions de la r&#xE9;ponse in vivo &#xE0; des blessures dans les ganglions de la racine dorsale. Analyses computationnelles de ces ensembles de donn&#xE9;es identifi&#xE9; environ 400 r&#xE9;seaux de signalisation redondants axonales connect&#xE9;s &#xE0; 39 facteurs de transcription impliqu&#xE9;s dans la r&#xE9;ponse des neurones sensoriels de l&#xE9;sions axonales. Perturbation exp&#xE9;rimentale de l&#x26;#39;individu surrepr&#xE9;sent&#xE9;s prot&#xE9;ines de signalisation, y compris les moyeux Abl, AKT, p38, et la prot&#xE9;ine kinase C, affect&#xE9; la croissance des neurites dans les neurones sensoriels. Paradoxalement, cependant, des perturbations combin&#xE9; de Abl ainsi que les prot&#xE9;ines du moyeu d&#x26;#39;autres ont eu un effet r&#xE9;duite par rapport &#xE0; la perturbation des prot&#xE9;ines individuelles. Nos donn&#xE9;es indiquent que les r&#xE9;ponses des blessures nerveuses sont contr&#xF4;l&#xE9;s par de multiples composants de r&#xE9;gulation, et de sugg&#xE9;rer que les licenciements du r&#xE9;seau offrent la robustesse de la r&#xE9;ponse des blessures.

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Izhak Michaelevski

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