神经诱导是大脑形成的第一个步骤。该过程是一种由亨森结（组织中心）指导邻近组织获得神经命运的机制，即发育形成神经系统。本视频演示了在鸡胚中进行神经诱导实验的方法。
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本文内容
摘要
摘要
鸡胚是研究早期胚胎发育的宝贵工具。其透明性、易操作性和可及性，使其成为研究神经系统形成及初始图式建立的理想模型。本视频演示了如何将组织中心组织移植到宿主中，该方法是将鸡胚中的组织中心——亨森结（Hensen's node）移植至具有发育潜能的宿主外胚层。组织中心移植物通过释放神经诱导信号，指导其上方未分化的组织转变为神经命运。这一机制被称为神经诱导，是羊膜动物脑和脊髓形成的第一步。该方法主要用于在鸡胚中鉴定潜在的神经诱导分子。本视频展示了神经诱导实验的各个步骤：首先，取出供体胚胎并固定于培养皿中；随后，准备宿主胚胎以进行新培养法（New culture）操作；接着，切下移植物并移植至宿主明区边缘区域；宿主胚胎继续培养18–22小时；最后，将样品固定并进行后续处理（如原位杂交）。该方法最初由瓦丁顿（Waddington）建立。
关键词：鸡胚，神经诱导，组织中心，亨森结，移植物，外胚层，原位杂交，Waddington 1,2和加莱拉3,4.
方案
一、示意图概述：
本视频展示了鸡胚神经诱导实验的各个步骤。首先，将宿主胚胎移植到新培养体系中 [NI1]。随后，将供体胚胎置于生理盐水中，并用荧光染料DiI标记亨森结（Hensen’s node，即鸡胚中的“组织者”）[NI2]。从供体胚胎中切除亨森结 [NI3]，并将其移植至宿主胚胎 [NI4, NI5]。之后将宿主胚胎培养最多22小时，在此期间，供体组织已在宿主的外胚层区域诱导形成异位轴结构 [NI6]。培养结束后，固定宿主胚胎并进行光氧化处理，过程中使用DAB：通过该化学反应，来源于供体的细胞在光氧化前在FITC荧光下呈红色 [NI7]，与DAB反应后则变为棕色 [NI8]。随后对胚胎进行原位杂交处理，使用神经标记物进行检测 [NI8]；结果显示，在供体移植物存在的情况下，宿主来源的组织已形成神经组织，该组织呈现蓝色。
1：为New培养法准备宿主胚胎
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讨论
本视频展示了进行神经诱导检测的各个步骤；该检测主要用于鉴定鸡胚中潜在的神经诱导分子，因此可广泛应用于多种研究，范围从胚胎学显微操作1-4; 6到揭示新的信号级联通路7,8，其最终目标均为理解脑及其余神经系统形成过程中的初始步骤。
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致谢
D.P. 获得美国国家药物滥用研究所颁发的露丝·柯施坦因奖（Ruth Kirschstein Award 1F32 DA021977-01A1）。本工作得到Margaret M. Alkek基金会对RHF的资助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 | |
|---|---|---|---|---|
| 卵 | 动物 | 查尔斯河实验室 | 优质可育 | 受精后，HH3+期（14小时） |
| 体视显微镜 | 显微镜 | 徕卡显微系统 | MZ9.5 或类似物 | |
| 杂交孵育箱 | 仪器设备 | Robbins Scientific，SciGene | M1000 | 与倒置的Pyrex培养皿和500 ml ddH₂O联用2烧杯 |
| Marsh 自动培养箱 | 仪器设备 | 里昂 | RX | |
| Pyrex 培养皿 | ||||
| 钟表匠’s 玻璃 50毫米 | 工具 | VWR 国际 | 66112-060 | |
| 玻璃环 | 工具 | 物理植物设施 | 切割4毫米厚的玻璃管（外径27毫米，内径25毫米）。无需精细抛光。 | |
| 弯头镊子 (1) | 工具 | 电子显微镜科学公司 | 72991-4C | |
| 镊子（2） | 工具 | Fine Science Tools | 11002-13 | 使用磨刀石将末端磨平，并加入100 μl矿物油 |
| 精细剪刀 | 工具 | Fine Science Tools | 14161-10 | |
| 塑料培养皿 | 工具 | Falcon BD | 353001 | |
| 橡胶球囊 | 工具 | 电子显微镜科学公司 | 70980 | |
| DiI | 试剂 | Invitrogen | D-282 | |
| 吸液管组件 | 工具 | Sigma-Aldrich | A5177-5EA | |
| 显微技术–电极拉制仪 | 仪器设备 | Sutter Instrument Co. | Sutter Instruments P-97 Flaming/Brown 微量移液器 | |
| 巴斯德毛细吸管 | 工具 | 电子显微镜科学公司 | 70950-12 | 火焰下圆边 |
| 培养室 | 工具 | 先锋塑料 | 030C | |
| 微毛细管 | 工具 | Sigma-Aldrich | P1049-1PAK | |
| 显微解剖刀 | 工具 | Fine Science Tools | 10056-12 | 用于原位杂交前穿刺组织空腔 |
| 0.2 mm直径的微型针 | 工具 | Fine Science Tools | 26002-20 | 将1份固化剂与9份基质混合，37°C过夜孵育 |
| 焦碳酸二乙酯（DEPC） | 试剂 | 电子显微镜科学公司 | 15710 | |
| Sylgard 184 硅弹性体固化剂与基础剂 | 道康宁 | 0001986475 | 将1份固化剂与9份基质混合，37°C过夜孵育 | |
| 焦碳酸二乙酯（DEPC） | Acros Organics | 10025025 | 向1升PBS中加入1毫升DEPC；振荡混匀；高压灭菌 | |
| 16% PFA | 电子显微镜科学公司 | 15710 |
参考文献
- Waddington, C. H. Experiments on the development of chick and duck embryos, cultivated in vitro. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 221, 179-230 (1932).
- Waddington, C. H. Induction by the primitive streak and its derivatives in the chick. J. Exp. Biol
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