大体积（20升以上）近海海水样品过滤

摘要

本视频记录了从水体中过滤微生物生物量的过程，过滤体积较大（≥20 L），微生物直径范围在0.22μm至2.7μm之间。

摘要

该流程始于沿海海水样品的采集，用于后续的微生物群落、营养盐和痕量气体分析。本方法中的样品采自位于萨尼奇湾运行的 HMS John Strickland 船只甲板。本视频记录了从水体中过滤获取直径介于 0.22 μm 至 2.7 μm 之间的微生物生物量（体积 ≥20 L）的操作过程。使用配备四个旋转头的单台泵装置可同时过滤两份 20 L 的样品。在长时间出海任务中，过滤操作于现场完成；而在单日往返任务中，则在返回后立即进行。记录通过每个 Sterivex 滤器单元的水量至关重要。为防止采样间隔期间形成生物膜，所有过滤设备在使用后必须立即用稀盐酸和去离子水冲洗，并进行高压灭菌。该过程约需 5 小时，另加 1 小时用于清理。

方案

1. 过滤装置的组装
   1. 组装过滤装置时，使用镊子将一张 GF/D 级滤膜放入预过滤器外壳单元中。用手轻轻拧紧外壳。通常情况下，切勿过度拧紧，否则装置在开始抽滤时会发生泄漏。
   2. 将原装瓶盖替换为已灭菌的瓶盖及连接的导管，小心地将内部导管插入试剂瓶中，避免接触导管。如有必要，使用镊子引导导管进入试剂瓶。
   3. 将外部导管穿过蠕动泵。
   4. 将预过滤器外壳单元连接至两根外部导管的末端（即每个试剂瓶配两个单元）。使用钳子拧紧连接处。
2. 海水过滤
   1. 开始过滤海水时，打开泵并将流速设置为 1。观察水流方向，确保水按正确方向被泵送。
   2. 让 500 ml 水自由流经预过滤器单元，流入 1 L 烧杯中。
   3. 关闭泵，将一个 Sterivex 滤器连接至预过滤装置自由端的雄性鲁尔接头处。用手牢固地拧紧预过滤器外壳。
   4. 观察预过滤器外壳以及外壳与通向试剂瓶的导管连接处是否有泄漏。若发生泄漏，关闭泵，松开并重新拧紧预过滤器外壳，再重新开启泵。
   5. 用 4 L 的烧瓶收集滤液。当烧瓶装满后，将滤液倒入洁净的试剂瓶中。务必记录每张滤膜所通过的液体体积。收集的滤液可进一步处理，例如用于病毒的过滤。
   6. 继续过滤，直至试剂瓶中无剩余水。通常每 20 L 试剂瓶的过滤时间在 4–5 小时之....

讨论

使用后必须用湿毛巾擦拭工作台和泵，以清除残留的盐水痕迹，否则会腐蚀设备。尽管该操作步骤简单，但所需时间可能较长，具体取决于待过滤样品中生物量或碎屑的浓度。

....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
蠕动泵		Masterflex (Cole Palmer)	77913-20, 77200-62, 77200-04
Tygon LFL 软管		Masterflex (Cole Palmer)	06429-24	用于过滤装置
软管夹		Cole-Parmer	0683204	用于过滤装置
1/4” x 3/16” 管道接头		Cole-Parmer	31702-20	用于过滤装置
聚丙烯预滤器外壳		ADVANTEC	501200	用于过滤装置
金属鲁尔接头（软管端转雄性鲁尔锁）		Cole-Parmer	31507-27	用于过滤装置
2“ 磁铁			用于过滤装置
三通瓶盖				用于过滤装置
GV 0.22 μm STERIVIX 滤器		EMD Millipore	SVGV01R5
直径 47 mm、孔径 2.7 μm 的 GF/D 滤膜		Whatman, GE Healthcare	1823047
裂解缓冲液	试剂			0.75 M 蔗糖，40 mM EDTA，50 mM Tris（pH 8.3）
0.1 % HCl	试剂			用于过滤后冲洗
高压灭菌水	试剂			用于过滤后冲洗