本文描述了一种胚胎大鼠脑组织聚集体培养体系的实验方案。聚集体中的多能前体细胞可发育并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。
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本文内容
摘要
摘要
一种能够重现中枢神经系统（CNS）前体细胞发育并分化为成熟神经元和胶质细胞的体外系统，将为神经科学家研究轴突-胶质相互作用、多能前体细胞的特性与分化，以及少突胶质细胞谱系在细胞和分子水平的发育进程提供强有力的平台。本文介绍一种源自胚胎大鼠前脑的中枢神经系统聚集体培养系统，该系统可在无血清培养基中维持培养达3-4周，本实验室将其作为研究神经元-胶质细胞相互作用及中枢神经系统髓鞘形成的模型。本视频将演示如何从E16大鼠脑组织中分离并培养此类中枢神经系统聚集体。此外，通过同一脑组织解剖操作，还可便捷地获得高度富集的常规解离神经元培养物，用于中枢神经系统神经元的多种研究，或用于与其他细胞的共培养实验。
方案
解剖前的准备
手术器械：使用高压灭菌器对所有解剖剪刀和镊子进行灭菌
盖玻片清洗：
- 将所有盖玻片（24孔板用直径15 mm）浸入1 L烧杯中的33% HCl中，至少浸泡24 h
- 用流水冲洗10 min，期间偶尔晃动，以去除所有残留的HCl
- 用Millipore水漂洗
- 沥干水分
- 将盖玻片浸泡于95–98%乙醇中
- 将盖玻片转移至平皿中的洁净纸巾上，并使其自然晾干
- 将盖玻片转移至玻璃烧杯中，用铝箔包裹后进行高压灭菌
注意：此步骤后盖玻片可储存备用 - 将单个盖玻片放入培养板中，准备进行包被
盖玻片包被：
- 将聚-D-赖氨酸（PDL，10 mg/ml 溶于含 0.5% 牛血清白蛋白的 PBS 中，分装后于 -20°C 保存）的 100 倍浓缩液用 PBS 稀释，并经滤膜（0.22 μm）过滤除菌
- 用 1 ....
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讨论
早期研究报道，在旋转介导的悬浮聚集体培养中可形成突触和成熟的髓鞘1。本文所述的中枢神经系统（CNS）聚集体培养系统结合了多能前体细胞在三维聚集体中的无血清生长特性与传统二维培养的便利性，便于在体外分析细胞的发育、迁移和分化过程。in vitro。该系统可进行修改，用于神经前体细胞研究以及神经元-胶质细胞相互作用的探讨。例如，可将遗传修饰的细胞（如少突胶质细胞前体细胞）2加入聚集体培养中。也可研究小胶质细胞和巨噬细胞等免疫细胞或各种试剂对神经元和胶质细胞发育与分化的影响。最近，纯化的视网膜神经节细胞再聚集体已被用于在不含其他细胞的条件下与少突胶质细胞共培养，以研究中枢神经系统的髓鞘形成3。与先前报道一致4，Matrigel在促进细胞黏附、加速 neurite（神经突）生长及胶质细胞分化方面优于多聚赖氨酸（PDL）。因此，本实验方案中采用Matrigel作为细胞聚集体的基质。
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致谢
本研究部分由德克萨斯农工大学（Texas A&M 大学
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参考文献
- Matthieu, J. M. Myelination in rat brain aggregating cell cultures. Neuroscience. 3, 565-56 (1978).
- Chen, Y. ing Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protocols. 2, 1044-10 (2007).
- Watkins, T. A., Emery, B., Mulinyawe....
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重印与许可
