通过闭塞内淋巴管手术诱导内淋巴积水

摘要

本视频展示了如何通过手术阻塞豚鼠的内淋巴管以产生内淋巴积水。

摘要

通过闭塞和阻断豚鼠的内淋巴管来手术诱导内淋巴积水（ELH），是一种被广泛接受的该病症动物模型，也是人类梅尼埃病的重要相关模型。1965年，Robert Kimura 和 Harold Schuknecht 首次描述了一种用于阻断内淋巴管的硬膜内入路方法（Kimura 1965）。尽管该方法有效，但由于需要穿透脑部保护膜，导致实验动物出现较高水平的并发症和死亡率，因而存在明显缺陷。因此，Andrews 和 Bohmer 开发了一种硬膜外入路方法，可显著减少与中枢神经系统（CNS）穿透相关的并发症发生率（Andrews and Bohmer 1989）。

此处所述的硬膜外入路首先需要在枕部区域做一正中切口，以暴露其下方的肌肉层。我们仅在右侧进行操作。在适当牵开覆盖的组织后，于右侧枕部肌肉层做一横向切口，以暴露右侧颞枕缝线。随后使用耳科钻头在缝线下方偏外侧的骨质区域（图1）进行钻孔，直至乙状窦显露。将乙状窦向内侧牵开后，即可暴露容纳内淋巴囊的内淋巴管骨盖。在骨盖内侧进一步向内淋巴囊区域钻孔，即可显露内淋巴管，随后用骨蜡填塞该管以造成阻塞，最终形成内淋巴积水（ELH）。

在接下来的几周内，该动物将表现出进行性、波动性的听力下降以及内淋巴积水的组织学证据。

方案

第1部分：麻醉与手术准备

1. 一只成年雌性Duncan-Hartley豚鼠（购自查尔斯河国际实验室公司，Wilmington，MA）通过肌内注射给予氯胺酮60 mg/kg和赛拉嗪12 mg/kg进行麻醉。
2. 在动物眼睛上涂抹石油润滑剂，以防止因干燥导致的角膜损伤。
3. 从头顶到肩部以及两耳之间区域进行剃毛。
4. 剃毛区域先以7.5%聚维酮碘进行无菌准备，随后使用70%乙醇。
5. 将动物置于带有加热毯的手术台上，并放置于一个可抬高头部并屈曲颈部的平台。动物头部应背向外科医生。为充分暴露枕骨嵴，必须实现足够的颈部屈曲。
6. 以无菌方式覆盖动物。

第二部分：骨性枕部的切口与暴露

1. 沿预期切口部位（枕部背侧中线皮肤切口）应用含肾上腺素的布比卡因（Marcaine）0.25%。该处理可引起局部血管收缩，减少出血，并在动物苏醒后提供持久的术后镇痛效果。
2. 在头皮枕部沿背侧中线做皮肤切口。
   
   图1：皮肤切口沿背侧中线进行，如上图所示。
3. 为获得充分暴露，使用小型弯止血钳分别夹住切口两侧，将皮肤向侧方牵开。
4. 沿颈部肌肉做水平切口以暴露骨性枕骨。此阶段即使麻醉充分，动物仍可能因枕大神经被切断而出现抽搐。在枕下区域做水平切口时存在脊髓横断的风险。可通过确保手术刀片下方始终能触及深层骨组织来避免此类并发症。
5. 当枕下肌群被切开至骨面后，使用第三把止血钳牵开上方肌肉边缘。该止血钳由手术助手固定维持位置。
6. 使用Lempert骨膜剥离器暴露颞枕缝。

第3部分：钻开颞枕缝

1. 暴露颞枕缝后（图2），使用带有1.5 mm金刚砂钻头的耳科钻头，沿缝向下方外侧钻磨。
2. 在颅骨外板下方，将可见到板障（位于颅骨内外板之间的松质骨）的海绵状结构。当板障骨质被完全磨除后，颅骨内板随之显露，同时可见淡蓝色的乙状窦影。
3. 明确乙状窦的边界，但不穿透该血管。
4. 当覆盖乙状窦的骨质已充分磨薄后，改用更高倍显微镜放大，并用直头钩针小心去除覆盖乙状窦的残余骨质。

图 2 待钻孔区域部分覆盖于颞枕缝之上。

第4部分：导管阻塞

1. 将游离的乙状窦向内侧牵拉，以暴露其覆盖的鼓室盖。
2. 使用0.5 mm金刚砂钻头在耳盖内侧钻孔，进入内淋巴囊和内淋巴管。
3. 然后使用直头探针将骨蜡填塞至内淋巴管中。
4. 随后使用明胶海绵（Gelfoam，辉瑞公司，纽约，纽约州）加强颅骨缺损部位。
5. 使用4-0 POLYSORB（United States Surgical，Norwalk，CT）缝线将肌肉组织对合。随后无缝过渡至皮下缝合技术以关闭皮肤切口。此种缝合方式无需术后拆线，亦可避免动物抓挠手术部位导致缝线被扯出的风险。

第5部分：术后护理

将豚鼠放入孵育箱中以维持其体温，并每30分钟检查一次，直至其苏醒并能够维持胸卧位。检查动物的呼吸频率和体色。本中心分别使用恩诺沙星（0.2 mL，22.7 mg/mL，皮下注射）和布托啡诺（0.05 mL，0.3 mg/mL，皮下注射）进行术后感染预防和镇痛。镇痛药在手术当天给药一次，在术后第一天和第二天各给药两次。尽管无菌手术无需使用抗生素，但可在术后第三天开始给予为期五天、每日两次的预防性抗生素治疗，其中术后第三天给药一次。

并发症及处理

1. 呼吸抑制：术者应始终注意动物的呼吸情况。若呼吸变慢或停止，应立即暂停手术，并目视检查胸廓是否有运动。若动物出现呼吸困难或费力呼吸，需检查口腔和气道是否被阻塞。
2. 乙状窦穿通：使用明胶海绵（Gelfoam）加压并结合吸引器头直至出血停止。
3. 硬脑膜穿通：用明胶海绵（Gelfoam）覆盖缺损处。
4. 前庭损伤：钻孔位置不得超出乙状窦外侧1 mm。否则可能损伤后半规管，导致豚鼠实验数据无效。

讨论

在内淋巴管手术阻塞后的数周内，实验动物会出现波动性感音神经性听力损失，通过听觉诱发电位脑干反应进行评估。图3展示了一次听觉脑干反应（ABR）记录的示例。左耳作为未手术的对照耳。

图3： 一只豚鼠术后28周在16 kHz频率下的ABR听阈水平。左耳（未手术耳）的听阈为30 dB SPL，右耳（手术耳）的听阈接近70 dB。

耳蜗的组织学检查还显示Reissner膜扩张（图4）。