通过闭塞内淋巴管手术诱导内淋巴积水

摘要

本视频展示了如何通过手术阻塞豚鼠的内淋巴管以产生内淋巴积水。

摘要

通过闭塞和阻断豚鼠的内淋巴管来手术诱导内淋巴积水（ELH），是一种被广泛接受的该病症动物模型，也是人类梅尼埃病的重要相关模型。1965年，Robert Kimura 和 Harold Schuknecht 首次描述了一种用于阻断内淋巴管的硬膜内入路方法（Kimura 1965）。尽管该方法有效，但由于需要穿透脑部保护膜，导致实验动物出现较高水平的并发症和死亡率，因而存在明显缺陷。因此，Andrews 和 Bohmer 开发了一种硬膜外入路方法，可显著减少与中枢神经系统（CNS）穿透相关的并发症发生率（Andrews and Bohmer 1989）。

此处所述的硬膜外入路首先需要在枕部区域做一正中切口，以暴露其下方的肌肉层。我们仅在右侧进行操作。在适当牵开覆盖的组织后，于右侧枕部肌肉层做一横向切口，以暴露右侧颞枕缝线。随后使用耳科钻头在缝线下方偏外侧的骨质区域（图1）进行钻孔，直至乙状窦显露。将乙状窦向内侧牵开后，即可暴露容纳内淋巴囊的内淋巴管骨盖。在骨盖内侧进一步向内淋巴囊区域钻孔，即可显露内淋巴管，随后用骨蜡填塞该管以造成阻塞，最终形成内淋巴积水（ELH）。

在接下来的几周内，该动物将表现出进行性、波动性的听力下降以及内淋巴积水的组织学证据。

方案

第一部分：麻醉与手术准备

1. 使用肌内注射氯胺酮 60 mg/kg 和赛拉嗪 12 mg/kg 对来自查尔斯河国际实验室公司（美国马萨诸塞州威尔明顿）的成年雌性邓肯-哈特利豚鼠进行麻醉。
2. 在眼睛上涂抹石蜡润滑剂，以防止因干燥导致角膜损伤。
3. 将动物从头顶至肩部以及两耳之间的区域剃毛。
4. 以无菌方式对剃毛区域进行皮肤准备，先使用 7.5% 聚维酮碘，随后使用 70% 乙醇。
5. 将动物置于带有加热毯的手术台上，并放置于一个可抬高头部并使颈部屈曲的平台。动物头部应背向外科医生。必须充分屈曲颈部，以便充分暴露枕骨嵴。
6. 以无菌方式覆盖手术巾。

第二部分：骨性枕部的切口与暴露

1. 沿预期切口部位（枕部背侧中线皮肤切口）注射含肾上腺素的布比卡因（Marcaine）0.25%，可引起局部血管收缩，减少出血，并在动物苏醒后提供持久的术后镇痛效果。
2. 在头皮枕部沿背侧中线做皮肤切口。
   
   图1：皮肤切口沿背侧中线进行，如上图所示。
3. 为获得充分暴露，使用小型弯止血钳分别夹住切口两侧皮肤并向外侧牵拉。
4. 沿颈部肌肉做水平切口以暴露骨性枕骨。此阶段动物可能出现抽搐，即使麻醉充分，也可能因枕大神经被切断所致。在枕下区域做水平切口时存在脊髓横断的风险。可通过确保手术刀片下方始终能触及深层骨组织来避免此类并发症。
5. 当枕下肌群被切开至骨面后，使用第三把止血钳牵拉上方肌肉边缘，该止血钳由手术助手固定。
6. 使用Lempert骨膜剥离器暴露颞枕缝。

第3部分：钻开颞枕缝

1. 暴露颞枕缝后（图2），使用带有1.5 mm金刚砂钻头的耳科钻头，沿缝向下方外侧钻磨。
2. 在颅骨外板下方，将可见到板障（位于颅骨内外板之间的松质骨）的海绵状结构。当板障被完全磨除后，颅骨内板随之显露，同时可见淡蓝色的乙状窦。
3. 明确乙状窦的边界，但不穿透该血管。
4. 当覆盖乙状窦的骨质被充分磨薄后，改用更高倍显微镜放大，并使用直头钩针小心去除覆盖乙状窦的残余骨质。

图2 钻孔区域部分覆盖颞枕缝。

第4部分：导管阻塞

1. 将去骨化的乙状窦向内侧牵拉，以暴露面神经乳突段（operculum）。
2. 使用直径0.5 mm的金刚砂钻头在面神经乳突段内侧钻孔，进入球囊（endolymphatic sac）及内淋巴管（endolymphatic duct）。
3. 随后用直头刮匙将骨蜡填塞至内淋巴管内。
4. 颅骨缺损处用明胶海绵（Gelfoam，辉瑞公司，纽约，纽约州）加固。
5. 使用4-0 POLYSORB（美国外科公司，诺沃克，康涅狄格州）缝线将肌肉层缝合。随后无缝过渡至皮下缝合技术以关闭皮肤切口。该缝合方式无需术后拆线，且可避免动物抓挠手术部位导致缝线脱落。

第5部分：术后护理

将豚鼠放入孵育箱中以维持体温，并每30分钟检查一次，直至其清醒并能够维持胸卧位。检查动物的呼吸频率和体色。本中心分别使用恩诺沙星（0.2 mL，22.7 mg/mL，皮下注射）和布托啡诺（0.05 mL，0.3 mg/mL，皮下注射）进行术后感染预防和镇痛。镇痛药在手术当天给予一次，在术后第一天和第二天各给予两次。尽管无菌手术无需使用抗生素，但可在术后第三天开始给予为期五天、每日两次的预防性抗生素治疗。

并发症及处理

1. 呼吸抑制：术者应始终注意动物的呼吸情况。若呼吸变慢或停止，应立即暂停手术，并目视检查胸廓是否有运动。若动物出现呼吸困难或费力呼吸，需检查口腔和气道是否被阻塞。
2. 乙状窦穿通：使用明胶海绵（Gelfoam）加压并结合吸引器头直至出血停止。
3. 硬脑膜穿通：用明胶海绵（Gelfoam）覆盖缺损处。
4. 前庭损伤：钻孔位置不得超出乙状窦外侧1 mm。否则可能损伤后半规管，导致豚鼠实验数据无效。

讨论

在内淋巴管手术阻塞后的数周内，实验动物会出现波动性感音神经性听力损失，该结果通过听觉诱发电位脑干反应进行测定。图3展示了一次听觉脑干反应（ABR）记录的示例。左耳作为未手术的对照耳。

图3： 术后28周豚鼠在16 kHz频率下的ABR听阈水平。左耳（未手术耳）的听阈为30 dB SPL，右耳（手术耳）的听阈接近70 dB。

耳蜗的组织学检查还显示前庭阶膜扩张（图4）。
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