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第1部分:操作现场的制备
- 操作现场消毒用75％异丙醇。
- 确保加热垫，并在合适的温度是。一个推荐系统是一个Gaymar循环水泵连接到一个治疗垫，保持在37 ° C ± 1 ° C。重要的是要在手术过程中保持正常体温，以避免在心率迅速下降。
- 在炎热珠手术前灭菌消毒外科手术工具。对于此过程，您将需要手术器械:钝剪刀，当然弯钳× 2，罚款45 ° × 2，角度弹簧剪刀，胸部拉钩和持针器，直角钳。
- 棉花施药应在出血的情况下的手。
第2部分:对小鼠的制备和插管
- 小鼠是麻醉诱导室与2％异氟醚0.5 -1.0升/分钟100％O 2的混合。
- 卷发器是用来刮胡子的皮草，从领口到中期胸部水平。
- 鼠标被放置在一个加热垫上面的仰卧姿势，以保持体温。
- 橡皮筋的是放置在动物的前牙颈部延长。一方面在使用弯钳，舌头轻轻地操纵到了一边。另一方面，进行气管插管，使用了PE 90管。气管内管，然后连接到一个哈佛量循环灭鼠呼吸机在125-150次/分钟骑自行车和潮气量的0.1 -0.3毫升。在手术过程中，麻醉维持在1.5-2％异氟醚为0.5 - 1.0 L / min的100％O 2 。麻醉正确的验证鼠标钉床（趾捏反射）施加压力。
- 与70％的酒精优碘溶液消毒手术野。此过程重复三次。
- 为了防止在操作过程中手术野的污染，无菌的悬垂放置在鼠标离开只有手术视野暴露。
- 无菌手套是用来为每个单独的鼠标。
第3部分:横向主动脉结扎
- 部分开胸手术显微镜下进行第二肋骨和胸骨缩回使用胸部拉钩。
- 精尖45 °直角钳轻轻分开从主动脉弓的胸腺和脂肪组织。
- 鉴定横向主动脉，6.0丝线缝合的小片放在之间的无名和左侧颈总动脉（图1） 。
- 两个松散的绳结绑在横向主动脉和小片的一个27 ½计钝针平行放置的横向主动脉。迅速并列第一结对针，第二针及时摘除，以产生一个直径0.4毫米收缩。在深水对照组小鼠，整个过程是相同的主动脉结扎除外。
- 胸部拉钩将被删除，2秒重新膨胀肺的呼吸机捏过的流出。
- 肋骨被关闭使用6.0普理灵缝线间断缝合模式。
- 皮肤是封闭使用一个6.0普理灵缝合与连续缝合模式。
第4部分:手术后恢复
- 手术后的镇痛，丁丙诺啡（0.1毫克/公斤）腹腔注射小鼠。如果有手术后的脱水的迹象，无菌生理盐水腹腔注射。
- 麻醉逐渐降低至关闭位置，气管插管，自主呼吸的迹象出现时，将删除。
- 鼠标移动到俯卧位，并允许恢复加热垫。
第5部分:确认成功的横向主动脉结扎
- 一个星期后，交咨会，鼠标重新麻醉，以确定横向主动脉结扎引起的压力超负荷的程度。如上所述，麻醉维持在1.5-2％异氟醚为0.5 - 1.0 L / min的100％O 2和体温保持在37 ° C ± 1 ° C。
- 一个20 MHz多普勒探头被放置在一个45度角检测流速对颈部的左，右两侧。一个基于计算机的多普勒信号处理器（梧桐仪器，休斯敦，得克萨斯州）5使用多普勒信号显示和存储。
- 根据实验的协议所需的压力超负荷的程度，与右颈（RC）/左侧颈（立法会）在一定范围内流动比率只小鼠作进一步分析。例如，一个中等程度的压力超负荷导致的比例为5-8，而更严格的收缩resultin克在严重压力超负荷导致了8-10的比例（图5.3A）。深水动物（操作，但不结扎），然而，预计有〜1（图5.3B）的比例。
6:代表结果
以下交咨会在野生型小鼠的生存，是典型的手术约80-90％。成功的横向主动脉手术结扎会导致左，右颈总动脉之间的一个多普勒血流速度比5-10（RC / LC）（图1）。假手术组小鼠（图2A），随压力超负荷的小鼠相比，预计开发在1-2周，心脏扩张，心肌肥厚，6至8星期之后，根据缢（图2B）的松紧程度在野生型小鼠在第一个月后，交咨会的死亡率通常较低（<20％），虽然转基因小鼠可能会表现出不同的的存活率。6,7
图1。使用横向主动脉结扎多普勒速度测量确认。代表权的多普勒速度信号（RC）和左侧颈（立法会）动脉后TAC 6天。这些录音表现出一个成功的结扎〜6.8的RC / LC流动比率。
图2。以下交咨会的代表整个心脏图像 。 一个假手术野生型小鼠心脏。B。野生型小鼠心脏16周后，交咨会。每行= 1毫米。
