作者没有什么可透露的。

克里斯托弗休斯:在体外血管生成的研究模型（面试）

连续斯托弗休斯描述自己的文化系统的效用，研究在体外培养的血管生成。他解释说，成纤维细胞分泌的关键，但身份不明，可溶性因子，使血管内皮细胞，形成文化的船只，分公司，形成正确的流明，并接受anastamosis的重要性。

Christopher C.W. Hughes describes the utility of his culture system for studying angiogenesis in vitro.  He explains the importance of fibroblasts that ...

大家好，我是 Christopher Hughes 博士。我是加州大学欧文分校的教授，我的实验室致力于血管生成。我们对调节血管生成过程的基因特别感兴趣。我们根据 Nelson 的工作优化了体外检测，在这个检测中，我们可以查看血管生成过程中发生的所有不同过程，我们在 tedex 珠子、小珠子上涂覆内皮细胞。然后我们将它们包埋在纤维蛋白凝胶中。我们提供生长因子。在几天的时间里，内皮细胞从珠子中发芽。它们迁移、排列、增殖、形成管状、分支并形成吻合口。因此，到大约 10 天时，我们就有了一个完整的毛细管，就像文化中的网络一样。嗯，envivo 和血管生成检测的一些问题，例如，在小鼠中进行的检测是，它很多，不是很容易纵系统。当你在动物体内发生这种事情时，很难想象，你无法真正看到血管生成。如果你想在我们的体外培养中纵系统，很容易对内皮细胞进行基因纵，打开和关闭基因，并观察其对发芽血管生成的影响。而在整个动物中做到这一点要困难得多。你必须进行淘汰赛或淘汰赛。所以这是两个主要优势。它很容易纵，而且很容易可视化。因此，多年来，已经开发了许多不同的体外发育不全测定法，它们都有其优点和缺点。特别是一个众所周知的基质凝胶测定，其中内皮细胞被放置在称为基质胶的细胞外基质的顶部。问题是，内皮细胞制造出类似脐带的结构，但它们从未真正形成适当的镀铝血管。你看不到发芽，你看不到吻合。有胶原蛋白凝胶模型，这可能很好。有很多你看不到内皮细胞的增殖。您往往不会看到吻合术。我们开发的纤维蛋白凝胶检测是基于 Nelson Kar 在 90 年代中期发表的模型。我们现在已经大大改善了这一点，因此我们可以看到血管生成的所有阶段。我们可以观察最初的发芽和迁移。我们看到细胞增殖，我们看到管腔形成，我们开始分支，最后我们得到吻合，在体外形成一个完整的血管网络。所以，我们相信，如果您想观察血管生成的所有这些不同阶段，这种检测确实是最好的体外系统。我们这种体外检测的另一个优点是，我们可以进行激光捕获、显微解剖，我们可以旋转培养物，使其变得非常平坦，然后使用激光捕获显微解剖显微镜。我们实际上可以取出单个细胞，特别是我们对尖端细胞感兴趣。因此，我们将这些细胞切除，我们可以查看基因表达，特别是在尖端细胞与躯干细胞中，实际上是制造管腔的细胞。我们的假设是这两个细胞群之间会存在不同的基因表达。我们可以看看，在体内系统中几乎不可能做到这一点。因此，我们认为这是使用这种体外检测的另一个主要优势。正如我提到的 Nelson Recon 所提到的，他们在这方面所做的早期工作使用了微血管内皮细胞。有很多想法认为，微血管内皮细胞，您希望用于此类检测的细胞，因为在体内，真正形成新血管的是微血管 EC。我们决定尝试使用 ve.这些是人类脐静脉内皮细胞，原因有几个。其中之一是这些细胞非常容易获得。你可以去医院，你可以从产房里拿到脐带，你可以很容易地分离细胞。而且这些细胞已经用于培养多年。他们的特征非常好。因此，我们设置了这种检测方法并对其进行了优化，以便我们可以出于这些原因使用这些细胞。有趣的是，事实证明，这些大血管内皮细胞似乎以微血管内皮细胞和培养物的形式出现。它们丢失了大量通常由大血管 ec 表达的基因，并开始表达通常与微血管内皮细胞相关的基因。它们完全有能力形成毛细管，就像产生管腔的新芽，使全世界看起来像文化中真正的毛细管。因此，它们易于使用，易于使用，并且它们可以执行我们希望它们执行的作。它们发芽，并制造出合适的镀铝容器。当我们想定量这种检测时，我们真的有几种方法可以进行。我们可以查看真正的定量标准，例如新芽的数量、新芽的长度、新芽的直径、分支点的数量、吻合口的数量，但我们也可以查看定性标准。因此，我们可以看看它们是否正在形成管腔？这实际上可能是我们最感兴趣的。在我们所做的许多分析中，他们是正确的管腔形成。这实际上更像是一种定性评估，尽管随着血管变大，人们实际上也可以测量这些管腔的直径。所以我们在这些培养物中使用成纤维细胞。我们将磁珠嵌入纤维蛋白凝胶中，然后将成纤维细胞接种在凝胶上。成纤维细胞对于正常发芽和管腔形成绝对是必不可少的。在没有成纤维细胞的情况下，我们会发芽。然而，内皮细胞往往不会彼此保持粘附。发生的事情是，他们彼此远离。因此，你在这个芽上开发的任何结构都容易分崩离析。几天后，内皮细胞发生凋亡。所以看起来成纤维细胞正在制造一种对血管生成至关重要的因子，至少在这个体外系统中是这样。我们一直非常想知道这些因素是什么。我们发现成纤维细胞会分泌一些东西到培养基中，因此我们可以从成纤维细胞中提取条件培养基，这将支持正常的发芽和管腔形成。所以我们肯定在处理一个可溶性因子。所以很明显，我们非常想知道成纤维细胞正在产生什么，这对该系统中的血管生成非常重要。我们已经尝试了所有常见的嫌疑人，VEGF，碱性 fg F 都是，都在培养物中，添加更多并不能替代成纤维细胞。我们还尝试了血管生成素 one、TGF β、H、GF 等。到目前为止，我们还没有找到关键因素。所以我们现在正在做的是从成纤维细胞中纯化条件培养基中的因子。因此，我们将条件培养基放在各种色谱柱、阳离子、交换、大小排除上，我们得到了其中具有活性的分数。我们现在正在跟踪该活动，我们获取这些馏分，找出哪些是活性的，然后我们可以在凝胶上运行这些馏分，确保凝胶上只有一个相对较少的条带，然后我们可以将它们切下来并通过质谱对它们进行测序。而且，这给了我们很多有趣的日子。我们现在有相当多的候选基因，我们正在单独测试它们，看看它们是否真的是我们正在寻找的因素。因此，我们已经测试了许多已知的血管生成因子，我们知道 veg GF 和碱性 FGF 实际上对于该测定中的正确发芽至关重要。但它们并不是故事的全部。正如我提到的，有一些衍生因素很重要，我们研究这个问题的一种方式是，我们研究了肿瘤细胞，这些细胞在体内具有高度血管生成性，它们在小鼠中产生大肿瘤，并且高度血管化。我们观察了这些肿瘤细胞，它们表达非常高水平的 VEGF，我们已将其放入我们的培养物中。因此，我们用这些肿瘤细胞代替了成纤维细胞，它们不支持该检测中稳健的血管生成。这非常有趣。这表明，其他人也提出了这一点，即肿瘤、S 基质（即组织中的成纤维细胞和其他支持细胞）与内皮细胞之间存在串扰。很可能肿瘤细胞会产生一些直接作用于内皮细胞的因子，但它们也会产生其他因子，这些因子刺激成纤维细胞和其他基质细胞，从而产生因子，这些因子也支持强大的血管生成。

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生物学

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis (Interview)

University of California, Irvine (UCI).  连续斯托弗休斯描述自己的文化系统的效用，研究在体外培养的血管生成。他解释说，成纤维细胞分泌的关键，但身份不明，可溶性因子，使血管内皮细胞，形成文化的船只，分公司，形成正确的流明，并接受anastamosis的重要性。

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