小鼠精子采集与人工授精

摘要

本方案展示了从小鼠雄性个体的睾丸中提取精子，然后对雌性小鼠进行授精的方法。在需要精确控制发育研究时间以及进行转基因操作时，该程序非常有用。

摘要

鹿鼠属（Peromyscus）啮齿类动物（鹿鼠）是北美最常见的本土哺乳动物。Peromyscus 物种被广泛应用于毒理学、流行病学、生态学、行为学以及遗传学等领域的研究。在此，它们为人工授精技术的演示提供了一个有效的模型。

类似于本视频所展示的方法已在多项鹿鼠研究中使用过，但此前尚未发表详细的实验方案。本文演示了人工授精的基本方法：首先从啮齿类动物体内取出睾丸，然后从附睾和输精管中分离精子。将成熟的精子置于乳状混合液中，在雌性动物排卵时注入其生殖道内。以受精当天记为胚胎发育的第0天，随后可在预定的时间点取出胚胎并进行相应操作。

人工授精可用于多种啮齿类动物，尤其在需要精确胚胎发育时间或难以确定交配时间的情况下至关重要。该技术对于某些物种或品系（包括大多数鹿鼠属 Peromyscus）尤为关键，因为这些动物可能不会立即交配和/或难以判断是否已完成交配。此外，人工授精可为胚胎发育提供精确的时间控制，适用于胚胎发育进程的定位研究和/或转基因实验。由于受精过程可得到保障，因此可减少实验动物的使用数量。该方法对推动鹿鼠属 Peromyscus 的研究体系发挥了重要作用，未来也有望使其他研究领域受益。

方案

人工授精

人工授精取代自然交配，以提高所有雌性动物的妊娠几率。每1只超排卵的雌性或已知处于动情期的雌性，使用2只雄性。将成年雄性小鼠的尾部附睾置于9%的牛奶悬浮液中，用18号针头切开。精子自由游出数分钟后，将附睾从混合液中取出。用显微镜评估悬浮液中精子的密度和活动力。使用钝头的22号、1½英寸长的针头进行精子注射。在距针尖约3/4处形成一个120°的弯曲^th 沿针头方向将针插入阴道，直至弯曲处，并注入0.025–0.05 ml。若有助手协助固定雌性动物于适当位置，则无需使用麻醉剂。

准备

1. 使用4只雄性与6只雌性配对
2. 在动物饲养室处死雄性动物
3. 用奶粉配制约5 ml的9%牛奶溶液
4. 取1.5 ml放入小培养皿中
5. 取出附睾和输精管
6. 放入1.5 ml的9%牛奶溶液中
7. 使用两根18号针头，以长切动作切开附睾和输精管，释放精子
8. 去除残留组织，在显微镜下检查精子

注射

1. 使用钝针以120°角进针
2. 用手固定小鼠并注射混合液。若一人操作固定与注射感到不便，可由两人配合完成。不应使用麻醉剂，因为目前尚无人知晓麻醉可能对实验过程产生何种影响。
3. 每只雌鼠注射0.05ml的精子/乳汁混合液

受体雌性

1. 对受体雌性小鼠进行阴道涂片检查（此时受体雌性小鼠应处于动情前期/动情期）
2. 至第5天仍未达到动情期的雌性小鼠应 可能不应使用

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
培养皿	工具	Fisher Scientific	08-772-30
18 G 针头	工具	BD 生物科学	305195
奶粉	试剂	任何供应商
1 mL 注射器	工具	国家科学公司	S7510-1
镊子	工具	Roboz外科器械公司	RS-5060
剪刀	工具	Roboz外科器械公司	RS-5882
杜尔贝科’磷酸盐缓冲液	试剂	GIBCO，Life Technologies 公司	14200-075
22 G 钝针	工具	给我