E12.5小鼠脑组织的快速冷冻与冷冻切片 关键词：快速冷冻，冷冻切片，E12.5小鼠脑，胚胎脑，组织处理，低温切片，神经发育

摘要

本视频演示了对小鼠胚胎脑组织进行速冻和切片的技术。提供了使用冷冻切片机的实用技巧，包括在切片过程中可采用的故障排除方法，以确保所得组织切片无裂纹及其他变形。

方案

1. 用含 4% 多聚甲醛的 PBS 固定组织，时间根据需要而定。
2. 蔗糖浸渍组织（冷冻保护）
   1. 在 2059 管中配制 30% 蔗糖溶液（w/v，溶于 PBS）。
   2. 用 PBS 清洗组织 3 次（每次约 5 分钟，摇床上操作）。
   3. 将组织放入 30% 蔗糖溶液中。  组织不会下沉。
   4. 将组织置于 4°C 过夜，或直至其下沉。
3. 用适当大小的冷冻模具，并标注信息和方向。
4. 用 O.C.T. 填充冷冻模具（避免产生气泡）。
5. 将组织转移至 O.C.T. 浴中，并用 O.C.T. 包裹组织。
6. 将组织转移至冷冻模具中的 O.C.T. 内。
7. 在显微镜下调整组织的方向。
8. 将液氮倒入塑料培养皿中。
9. 迅速而小心地将带有组织的冷冻模具放入液氮中（不要淹没模具顶部）。
10. 当 O.C.T. 变为完全不透明的白色时，将冷冻组织放入 -80°C 冰箱中保存。
11. 切片前，将组织在约 20°C 条件下平衡至少 30 分钟。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
组织学冷冻模具（Tissue-Tek Cryomold）	Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T. 包埋剂	Ted Pella, Inc.	27050
蔗糖溶液			30% 蔗糖溶液（溶于 PBS，w/v）
多聚甲醛			4% 多聚甲醛（溶于 PBS）