原位主动脉移植：一种研究慢性血管病变发生的大鼠模型

摘要

本视频展示了大鼠原位主动脉移植模型，作为一种研究移植血管病变（TVP）发生的简单模型。

摘要

研究慢性排斥反应的模型对于探讨移植性血管病变（TVP）发生过程中的病理生物学和病理生理学过程至关重要。

用于心血管慢性排斥反应研究的常用动物模型是在实验啮齿类动物中进行的异位心脏移植模型。自Ono和Lindsey（3）发表该技术以来，此模型已广泛应用于各类实验中。为了分析血管中的病变，需要对心脏进行切片，并测量所有血管。

研究心血管领域慢性排斥反应的另一种方法是主动脉移植模型（1, 2）。在原位主动脉移植模型中，可对主动脉进行简便的组织学评估（2）。PVG至ACI模型特别适用于CAV研究，因为急性血管排斥反应在此模型中并非主要的混杂因素，且环孢素A（CsA）治疗无法阻止CAV的发展，这与临床情况相似（4）。该模型需要为期7天的CsA治疗，以防止急性排斥反应，并实现长期存活，同时促进TVP的发生。

该模型还可用于研究异种移植模型中的急性细胞排斥反应和中层坏死（5）。

方案

从 Charles River（地址：Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld）购买体重约为 250–300 g 的大鼠。
移植实验以 PVG 大鼠作为供体，ACI 大鼠作为受体。

大鼠在常规条件下饲养，自由摄取标准大鼠饲料和水。

所有手术器械在使用前均经过灭菌处理。

供体制备：

使用诱导室通过异氟烷（2.5%-3%）麻醉大鼠。

1. 剃除大鼠腹部和胸部的毛发，将大鼠仰卧放置，并在其口鼻部覆盖面罩以维持麻醉状态。
2. 使用聚维酮碘对腹部和胸部区域进行广泛消毒，随后使用80%乙醇，重复此步骤三次。
3. 通过夹捏后肢足部检查反射，以确认大鼠已达到足够的麻醉深度。
4. 打开腹腔并切开腹主动脉，造成大鼠失血处死。
5. 小心打开胸腔，找到降胸主动脉。
6. 将胸主动脉从周围组织（如脂肪、神经和食管）中仔细分离出来。
7. 使用打孔器切取一段1.5 cm长的主动脉，避免对主动脉组织造成损伤。
8. 用冷的无菌生理盐水彻底灌洗主动脉移植物，并将移植物储存在4°C环境中。

接收者：

使用诱导室通过异氟烷（2.5%-3%）麻醉大鼠。手术过程中维持体温。

1. 剃除腹部区域毛发，并涂抹眼膏以防止麻醉期间眼睛干涩。
2. 将大鼠仰卧放置，并在其口鼻部覆盖面罩以维持麻醉状态。
3. 使用聚维酮碘消毒腹部区域，随后使用80%乙醇，重复此步骤三次。
4. 通过夹捏后肢足部检查反射，确认大鼠已达到充分麻醉状态。
5. 沿腹中线做切口，分两步分离皮肤和肌肉，打开腹腔。
6. 将肠管置于盛有预温无菌生理盐水的无粉手套中，并将手套包裹肠管以防止水分流失。
7. 清除覆盖在腹主动脉上的脂肪组织。
8. 从肾下区域开始解剖腹主动脉至其分叉处，注意避免损伤血管分支。
9. 如有必要，结扎腹主动脉的分支。
10. 首先在已解剖出的腹主动脉肾下段使用显微外科夹闭夹，以阻断血流。
11. 接着，在腹主动脉分叉附近放置第二个血管夹。
12. 在血流完全阻断后，切除一段短的腹主动脉。
13. 取出保存在冰上0.9%无菌生理盐水中的供体主动脉移植物，将其修剪至适当长度并置于缺损处。
14. 将供体主动脉与受体主动脉连接，使用8-0 Prolene缝线（Ethicon, Norderstedt, Germany）进行连续缝合。先从近端端对端吻合开始。
15. 完成远端端对端吻合后，小心打开远端血管夹。
16. 若打开远端血管夹后无出血，再小心打开近端血管夹。若缝合处出现出血，应重新夹闭血管夹，找到出血点并用单针缝合止血。
17. 腹主动脉远端应可见明显搏动。
18. 随后将肠管复位回腹腔内。
19. 使用预温的无菌生理盐水冲洗腹腔。
20. 使用6-0 Prolene缝线（Ethicon, Norderstedt, Germany）连续缝合腹壁肌层。
21. 使用5-0 Prolene缝线（Ethicon, Norderstedt, Germany）连续缝合皮肤。
22. 在大鼠仍处于麻醉状态下，皮下注射4–5 mg/kg卡洛芬（Carprofen）。
23. 为为此类手术提供充分镇痛，术后3天内将安乃近（metamizol）加入饮水（每100 ml水中加入50 mg安乃近）以进行疼痛管理。

讨论

基于多种原因，我们发现与异位心脏移植模型相比，原位主动脉移植模型是研究移植血管病变（TVP）发展的更为准确的方法：
在外科技术方面，主动脉移植模型是一种易于实施的方法，仅需完成端对端吻合；而异位心脏移植模型则对外科医生的技术要求更高，被认为是一种更为复杂且容易出错的操作，需要在两条主要血管上完成端对侧吻合。

由于移植性血管病变可在单一确定直径的血管中进行检查，而非在大量大小和结构差异显著的心脏小血管中进行探索，因此组织学标本的分析与测量得到了极大简化，避免了因血管异质性给研究者获取客观可信结果带来的困难。 受体的胸主动脉可作为正常的对照，其在直径和形态学外观上提供了易于操作且可靠的比较对象；而在异位心脏移植模型中，心外膜或心肌内血管因存在较大的个体间差异，难以进行有效比较。

除了这些发现之外，主动脉同种异体移植物也不太容易发生可能由手术操作引起的破坏性组织学改变。纤维化或梗死可能发生在异位心脏移植组织及其中嵌入的血管内，从而影响其结构，使其不适合进行评估。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
手术显微镜（25倍放大）
异氟烷
剃毛器
聚维酮碘
冰冻0.9%生理盐水
预热的0.9%无菌生理盐水
眼膏
手套
显微外科剪刀
镊子
夹钳
8-0缝线（Prolene）
6-0缝线（Prolene）
5-0缝线（Prolene）
卡洛芬
美他佐辛
棉签