Sample Preparation for Metabolomics: A Method to Prepare Cell Samples for Metabolite Profiling

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Research Article

代谢组学的样品制备:一种制备用于代谢物分析的细胞样品的方法

April 30, 2023

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

In This Article

Abstract Protocol Disclosures Reprints and Permissions

该视频介绍了一种制备乳腺癌细胞样品以进行代谢物分析的技术。乳腺癌细胞用雌二醇处理，雌二醇与雌激素受体 α 结合并导致代谢物组成发生变化。

1. 代谢组学检测样品制备

细胞培养和处理
1. 在生长培养基中每 10 cm 板接种 400,000 个 MCF7 细胞。对于每种处理，准备三个样品。每个样品中使用两个板，以接收足够的细胞进行检测。第 3 天，去除培养基，向细胞中加入 5 ml 新鲜培养基，含或不含 ^10-8 M 雌二醇或 E2。处理细胞 24 小时（37 °C，加湿的 5% CO₂ 气氛）。
样本采集
1. 向板中加入 5 ml 冰冷的 1x PBS，短暂倾斜板数次后吸出 PBS。重复两次，并在最后一次洗涤后去除尽可能多的 PBS。
2. 向每个板中加入 750 μl 预冷丙酮并刮擦细胞。将来自两个板的丙酮细胞混合到冰上的 2 ml 试管中。
3. 用于归一化的细胞计数
  1. 对于每次处理，使用两个额外的板进行细胞定量。要从板中分离细胞，向每个板中加入 2 ml HE 缓冲液（1x HBSS、10 mM HEPES、0.075% NaHCO₃和 1 mM EDTA）并孵育 5 分钟。
  2. 通过在 HE 缓冲液中移液细胞来收集和充分混合细胞。使用总共 20 μl 细胞溶液，使用血细胞计数器计数细胞数。
将样品储存在 -80 °C，然后送到代谢组学中心，以使用气相色谱质谱（GC-MS）分析鉴定和定量代谢物。

No conflicts of interest declared.

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission

Play Video