代谢组学样品制备：用于代谢物谱分析的细胞样品制备方法

摘要

来源：Zhao, Y. C. et. al., 乳腺癌中雌激素受体信号通路对代谢调控的系统生物学研究。J. Vis. Exp. (2016)。

本视频介绍了一种用于代谢物分析的乳腺癌细胞样本制备技术。乳腺癌细胞经雌二醇处理后，雌二醇会与雌激素受体α结合，从而引起代谢物组成的变化。

方案

1. 代谢组学检测样品制备

1. 细胞培养与处理
   1. 将400,000个MCF7细胞接种至每个10 cm培养皿中，使用生长培养基。每种处理准备三个样本，每个样本使用两个培养皿以获得足够数量的细胞用于检测。第3天更换培养基，向细胞中加入5 ml新鲜培养基，培养基中含或不含10^-8 M雌二醇（Estradiol或E2）。在37 °C、5% CO₂ 的湿化培养箱中处理细胞24小时。
2. 样本收集
   1. 向培养皿中加入5 ml预冷的1×PBS，轻轻倾斜培养皿数次后吸去PBS。重复洗涤两次，最后一次洗涤后尽可能吸尽残留PBS。
   2. 向每个培养皿中加入750 µl预冷丙酮，刮取细胞。将两个培养皿中的丙酮细胞悬液合并至一个2 ml离心管中，并置于冰上。
   3. 细胞计数用于归一化
      1. 每种处理另取两个额外培养皿用于细胞定量。为使细胞脱离培养皿，向每个培养皿中加入2 ml HE缓冲液（1×HBSS、10 mM HEPES、0.075% NaHCO_3, 和1 mM EDTA），孵育5分钟。
      2. 用移液器反复吹打使细胞在HE缓冲液中充分混匀。取总共20 µl细胞悬液，使用血细胞计数板对细胞数量进行计数。
3. 在送至代谢组学中心进行代谢物鉴定与定量分析前，将样本保存于-80 °C。分析方法为气相色谱-质谱联用（GC-MS）。