代谢学样本制备：为代谢物分析准备细胞样本的方法

Abstract

资料来源：赵，Y.C等人，由雌激素受体在乳腺癌中发出信号的代谢调节系统生物学。(2016).

这段视频描述了一种为代谢物分析准备乳腺癌细胞样本的技术。乳腺癌细胞用雌二醇治疗，雌二醇与雌激素受体α结合，导致代谢物成分发生变化。

Protocol

1. 代谢学测定样品制备

1. 细胞培养与治疗
   1. 种子 400，000 MCF7 细胞每 10 厘米板在生长介质。每次治疗准备三个样本。在每个样本中使用两个板来接收足够的细胞进行检测。在第 3 天，取出介质，并在细胞中加入 5 毫升新鲜介质，无论有没有 10^-8 M 雌二醇或 E2。将细胞处理24小时（加湿5%CO₂大气中的37°C）。
2. 样本收集
   1. 将 5 毫升冰冷 1 倍 PBS 添加到板中，在短暂倾斜板数次后吸气 PBS。重复两次，并在上次洗涤后尽可能多地删除 PBS。
   2. 在每个盘子中加入 750μl 的预冷血清酮，然后刮伤细胞。将两个板中的蛋酮细胞组合成冰上的2毫升管。
   3. 正常化的细胞计数
      1. 对于每次治疗，使用两个额外的板细胞定量。要从板中去附加细胞，在每个板中加入 2 毫升 HE 缓冲（1 倍 HBSS、10 m HEPES、0.075% NaHCO₃和 1 mM EDTA），并孵育 5 分钟。
      2. 通过在 HE 缓冲区中管状细胞收集和混合好细胞。使用总共 20 μl 细胞溶液使用血细胞计计算细胞号。
3. 将样品储存在 -80 °C，然后发送到代谢学中心，使用气相色谱质谱 （GC-MS） 分析识别和量化代谢物。