在SJL小鼠中诱导实验性自身免疫性垂体炎

摘要

本视频展示了如何在SJL小鼠中诱导自身免疫性垂体炎，以及如何通过组织病理学评估其严重程度。

摘要

通过将垂体蛋白与佐剂混合后注射到易感小鼠体内，可实验性地复制自身免疫性垂体炎¹。小鼠模型使我们能够研究疾病的发生发展过程，通常能很好地模拟人类中发生的相似病理过程。对于某些自身免疫性疾病（如1A型糖尿病），已存在可自发产生类似人类疾病的小鼠模型（如NOD小鼠）。然而，对于许多其他自身免疫性疾病，仍需通过实验手段诱导模型产生。常用的方法之一是向小鼠体内注射源自目标器官的优势抗原。例如，研究自身免疫性甲状腺炎的研究人员会向小鼠注射甲状腺球蛋白²，而研究重症肌无力的研究人员则注射乙酰胆碱受体³。如果某种特定自身免疫性疾病的自身抗原尚未明确，则研究人员会注射来自该自身免疫反应靶器官的粗制蛋白提取物。对于自身免疫性垂体炎，致病性自身抗原仍待鉴定⁴，因此目前使用粗制垂体蛋白制剂进行诱导。在本视频文章中，我们将演示如何在SJL小鼠中诱导实验性自身免疫性垂体炎。

方案

实验方案

一旦制备好垂体免疫原（参见配套文章），将其皮下注射至SJL小鼠（The Jackson Laboratories，货号 000686）。7天后重复进行第二次相同注射。随后利用小鼠采集 体内 以及死后结果。

步骤1. 将垂体免疫原皮下注射至SJL小鼠

首先通过腹腔注射 0.5 ml 浓度为 20 mg/ml 的 2,2,2-三溴乙醇（Avertin，TCI America，T-1420）对小鼠进行麻醉。随后，在皮下注射 100 μl 垂体乳剂，该乳剂如 JoVE 2181 文章所述，含有 1 mg 垂体提取物和 0.25 mg 完全弗氏佐剂。乳剂分别注射于左侧背侧后肢区域（50 μl）和右侧腹股沟区域（50 μl）。在第 7 天，将垂体乳剂再次注射至对侧部位（右侧背侧后肢区域注射 50 μl，左侧腹股沟区域注射 50 μl）。在初次免疫后的前 3 天内每天观察小鼠，之后每周观察一次，直至处死动物，通常在初次免疫后第 28 天进行处死。

步骤2. 样本采集 体内 结果：血液检测

在小鼠仍存活时用于评估实验结果的最常用组织是血液。通常在首次免疫后14天采集血液，以检测血清中垂体抗体或其他标志物（如细胞因子和趋化因子）的....

讨论

已有四种技术被报道用于在实验动物中诱导垂体炎。本文所述技术，即垂体蛋白与弗氏佐剂混合后注射，是最早的一种方法，可追溯至1967年⁶，并在近年得到进一步改进¹。其他技术包括：1992年注射可溶性风疹病毒糖蛋白⁷；2002年通过立体定位将腺病毒直接注射至垂体腺内⁸；以及2010年将一种大鼠品系的垂体腺移植至另一种大鼠品系的肾包膜下⁹。使用弗氏佐剂方法的主要优势在于其侵入性较小、结果更一致，尤其能够更准确地诱导出与人类疾病高度相似的垂体炎。本视频文章所描述的技术可建立一种可重复的垂体炎模型，供研究人员用于深入理解这一引人关注的疾病。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
SJL小鼠（The Jackson Laboratories）		品系 000686
2,2,2-三溴–乙醇（Avertin）	TCI America	T-1420
贝克斯特德’固定剂