冈比亚按蚊（A. gambiae）的饲养方案

摘要

本视频展示了在实验室中饲养冈比亚按蚊的一般技术。通过该生物体从幼虫到蛹再到吸血成虫的整个生命周期，演示了实验室蚊虫饲养的各个环节。

摘要

本方案描述了在昆虫饲养室中进行蚊虫饲养的步骤。昆虫饲养室需维持在28°C和约80%的湿度，并保持12小时光照与12小时黑暗的循环条件。进行该操作时，您需要蚊虫饲养笼、10%无菌蔗糖溶液、纸巾、烧杯、Whatman滤纸、玻璃饲喂器、人血和血清、水浴锅、Parafilm封口膜、蒸馏水、干净的塑料托盘、蚊虫食物（如下所述）、覆盖托盘用的蚊帐、真空泵以及用于收集成虫的收集装置。

方案

蚊虫食物：

1. 食物A：碾碎的鱼食（Aquaricare）。需加入少量。
2. 食物B：碾碎的猫粮（Purina）。需加入少量。
3. 食物C：猫粮（Purina）。需加入两片。

血液：

可用于饲养蚊子的血液包括动物或人血。用注射器采集新鲜血液后，放入无菌的15 ml Falcon离心管中，每10 ml血液加入1 ml CPD（抗凝剂），轻轻混匀，然后在室温下以2000 rpm离心5分钟。弃去上清液，注意去除含有其他血细胞（如白细胞）的白膜层。将红细胞沉淀用移液管重悬于等体积的RPMI培养基中，并在此培养基中再洗涤三次。最后一次洗涤后，将沉淀的红细胞重悬于等体积的RPMI培养基中，4°C保存（可保存8–10天）。喂食前，将RPMI中的红细胞以2000 rpm离心5分钟，使细胞成团，然后将压紧的红细胞重悬于血清（O+型人血清）中，制备成40%的血细胞比容。喂食过程中血液必须始终保持在37°C。

第1天：

1. 使用3至5日龄的成年雌蚊进行血液饲喂以促使其产卵。
2. 血液饲喂采用人工膜（Parafilm）饲喂法，步骤如下：
   
   
   1. 将红细胞（血液制备方法见上文）与热灭活血清混合，配制约为40%的血细胞比容（压积红细胞占40%，血清占60%），并将该混合液加入玻璃饲喂器中。
   2. 将饲喂器连接至温水循环装置（37°C），并放置于蚊笼上方，使蚊子能够接触到膜表面进行吸血。
   3. 让蚊子自由吸血约30分钟。

第3天：

1. 雌蚊在吸血后两天会产卵。将一小片滤纸折成圆锥形，放入盛有蒸馏水的小烧杯中，确保滤纸湿润。将烧杯置于蚊笼内过夜，使蚊子产卵。

第4天：

1. 将含有蚊卵的滤纸放入盛有约 300 ml 蒸馏水的塑料托盘中。向托盘中加入少量食物 A，随后在接下来的几天中让卵孵化成幼虫。

第5至8天：

1. 每日用两片食物C喂养生长中的幼虫，并监测其密度和种群数量。在第八天（5日龄幼虫），将幼虫种群从1个托盘稀释至约10个托盘，每个托盘中加入少量食物A和两片食物C。（约30分钟）

第 9 - 12 天：

1. 幼虫每天喂食食物C。在第12天（9日龄幼虫）更换新鲜水，并添加食物（一小撮食物B和两片食物C）。此阶段开始出现蛹的发育。培养盘上方覆盖网罩，以防止成虫逃逸。（约8–10分钟）

第13 - 15天：

在接下来的2至3天内，让蛹羽化为成虫。每天需小心移开网罩，为幼虫/蛹提供食物，以避免成虫逃逸。

第16天：

1. 通过连接真空泵的吸虫器将成虫收集到饲养笼中。饲养笼由一个小型100 ml的瓶子构成，瓶内装有一根浸有10%蔗糖（经高压灭菌）的棉芯，并在底部铺有纸巾，以吸收在操作饲养笼时可能溢出的糖液。（约30–40分钟）

第 17 - 21 天：

1. 随后将成虫（包括雄性和雌性）置于昆虫饲养室中饲养4-5天，并喂食10%蔗糖溶液，之后再次进行血液饲喂以启动下一个繁殖周期。同一批蚊子可多次用于产卵。
2. 不再需要用于实验或饲养的蚊子可通过将笼子放入冰箱冷冻处死。使用过的饲养盘和笼子需清洗并干燥后方可再次使用。

注意：蚊虫饲养方法可能存在一些差异，不同实验室可能采用不同的技术。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
食物A		Aquaricare		研磨的鱼食。需加入少量。
食物B		Purina		研磨的猫粮。需加入少量。
食物C		Purina		猫粮。需加入两片。
RBC				制备的红细胞：含40%红细胞压积的人血清
RPMI	培养基
CPD				抗凝剂
血清				O+型人血清
蚊子饲喂装置
石蜡膜
Anopheles gambiae				蚊子
10%蔗糖				蚊子食物
昆虫饲养室