将荧光标记的神经前体细胞注射至人脑类器官以建立移植模型

摘要

来源： Ibanez-Rios, M.I., 等一种人脑类器官神经细胞移植模型。 J. Vis. Exp. (2023)

本视频展示了使用细胞-基质混合物将荧光标记的神经前体细胞（NPCs）注射到人脑类器官中的过程。该方法可重复且无需使用动物，能够实现对类器官结构最小干扰的移植操作。该技术为神经移植及中枢神经系统（CNS）疾病建模提供了有价值的实验平台。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 将标记细胞注射到脑类器官中

注意： 本研究中，脑类器官是根据生产商说明书使用商业试剂盒制备的。此步骤可替换为感兴趣的脑类器官。本方案此部分所用材料必须预先冷却，以避免可溶性基底膜基质在高于 4 °C 的温度下发生凝胶化。

1. 将接触溶解后基底膜基质的胰岛素注射器、枪头和离心管置于 −20 °C 冷却。
2. 在冰上解冻适量的溶解基底膜基质，具体体积取决于将要进行的注射次数（约每注射2 μL）。此过程大约需要30分钟。
3. 在 aliquot 解冻的同时，对细胞进行传代、收集并计数。
4. 计算每次注射所需的体积。若进行多次注射，将细胞的总体积置于1.5 mL离心管中，并加入最多1 mL的DMEM/F12。
   注意： 应使用稍大一些的体积，以弥补损失或移液误差导致的额外注射需求。
5. 将细胞置于冰上，同时准备下一步操作。
6. 解冻后，将溶解的基底膜基质用预冷的 DMEM/F12 稀释至终浓度为 3 mg/mL。
7. 从冰上取下单细胞悬液，在 4 °C 条件下于 300 × g 离心 5 分钟。
   注意： 若无冷藏离心机，通常可在室温下离心，一般可耐受。
8. 轻轻完全移除培养基，注意不要扰动细胞沉淀。用移液枪轻柔吹打，将细胞沉淀重悬于稀释的可溶性基....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
DMEM F12/Glutamax	Thermo	10565018
基底膜基质（生长因子减少型，GFR）	Corning	356231	无酚红，无LDEV