微流控芯片中细菌细胞的制备

摘要

来源： Sutlief, A. L., 等活细胞剪切应力分析 铜绿假单胞菌 使用自动化高通量微流控系统。 J. Vis. Exp. (2019).

本视频演示了用于细菌培养物剪切应力研究的微流控板的制备过程。在用培养基对通道进行预处理后，将细菌细胞引入实验通道并孵育以使其附着。随后去除残留的培养基和培养物，为后续的剪切应力实验做好准备。

方案

1. 培养基制备

1. 配制含0.25%葡萄糖的最低培养基（MM）。配制1 L含0.25%葡萄糖的MM培养基时，将200 mL无菌M9盐溶液、2 mL无菌1 M硫酸镁（MgSO₄）、100 µL无菌1 M氯化钙（CaCl₂）和12.5 mL无菌20%（w/v）葡萄糖加入水中（dH₂O），定容至最终体积1 L。
2. 使用无菌操作技术将所需培养基转移至无菌瓶中。根据所用通道数量准备相应体积的培养基。通常，每个通道需要200 µL用于灌注、300 µL用于接种，以及1300 µL用于24小时实验。
3. 将培养基瓶置于设定为实验温度的培养箱或水浴中。使用前应使培养基达到实验温度，以避免微通道中产生气泡。

2. 过夜培养及实验培养物的制备 铜绿假单胞菌 表达增强型绿色荧光蛋白的PA01菌株（PA01-EGFP）。

1. 取15 mL实验培养基加入无菌侧口烧瓶中，并接种自接种有PA01-EGFP的琼脂平板上的一至两个菌落。将培养物置于37 °C、180–220 rpm的摇床培养箱中培养12–16小时。
2. 测定过夜培养物的OD₆₀₀。当OD₆₀₀大于0.80时，用新鲜MM培养基将过夜培养物稀释至终OD值为0.8。将实验培养物置于37 °C....

结果

图1：微流控系统的各个组件。从左到右依次列出各个组件：1. CCD相机，2. 带有自动载物台、自动荧光模块和自动对焦模块的高分辨率倒置显微镜，3. 板载载物台，4. 成像系统接口，5. 手动显微镜载物台控制装置，6. 蒸汽捕集器，7. 成像系统控制器（含温度控制器），8. 硬件控制器，9. 荧光控制器，10. 不间断电源，11. 用于图.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
氯化铵，ACS级	VWR	BDH9208-500G	最低培养基成分的一部分
BioFlux 1000 48孔低剪切力微孔板	Fluxion Biosciences	910-0047
BioFlux 1000Z 微流控成像系统	Fluxion Biosciences	BF 1000Z
二水合氯化钙，ACD级	VWR	97061-904	最小培养基成分的一部分
无水葡萄糖，ACS级	VWR	BDH9230-500G	最小培养基成分的一部分
硫酸镁 ACS 级	VWR	EM-MX0070-1	最小培养基成分的一部分
磷酸二氢钾，ACS 级	VWR	BDH9268-500G	最低培养基成分的一部分
铜绿假单胞菌 GFP	ATCC	15692GFP	铜绿假单胞菌 用于本研究的经GFP修饰的细菌菌株PA01。
氯化钠，ACS级	VWR	BDH9286-500G	最小培养基成分的一部分
磷酸二氢钠，无水，试剂级	VWR	97061-942	最低培养基成分的一部分