一种用于研究共培养中微生物相互作用的体外实验方法

摘要

来源：Temkin, M. I. 等．用于研究微生物相互作用的高通量共培养实验．J. Vis. Exp. (2019)

本视频演示了一种 体外 研究微生物间相互作用的检测方法 Corynebacterium propinquum 和 金黄色葡萄球菌 在共培养中。

方案

1. 靶标生物接种

注意：过夜培养后，应确保培养物呈浑浊状态。某些细菌培养物可能会在培养管底部形成絮状沉淀。需涡旋振荡培养管以分散团块，并评估培养物的浑浊度。

1. 通过向一个空的12孔板的每个孔中加入1.8 mL脑心浸液（BHI）肉汤，准备目标板 以及200 µL的目标菌过夜培养物。
   注意： 目标生物是指通过共培养相互作用实验来确定其抑制状态的生物。在本实验中，目标生物为 金黄色葡萄球菌 从人鼻腔灌洗样本中分离的 spp.
2. 拆开无菌接种环包装，将其放入目标培养板中。轻轻搅动各孔中的培养物，注意避免培养物交叉污染邻近孔位。
3. 提起接种环，确保每个接种环尖端都带有稀释后的目标菌液液滴。
4. 通过将接种印模置于未接种的生物测定板上，轻轻摇动印模，使培养液滴接种到每个孔中，从而制备单培养对照板。移除接种印模后，生物测定板各孔中应可见一滴培养液。
   1. 如果由于培养基表面不平整导致接种环未能接种到某些孔，可使用移液器吸取3 µL稀释后的过夜培养物，滴加到这些孔的右侧。
5. 按照上述方法接种生物测定板（参见步骤1.4.1），但需调整印章位置，使其尖端与12孔板的右侧对齐。接种各孔时，确保印章不接触已存在的细菌菌落。
6. 小心取下印章，并将其放回目标板中。
7. 对每个生物测定板重复接种操作，直至所有板均已接种。
8. 将生物测定板倒置于适宜温度下孵育7天。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
12孔细胞培养板，带盖，无菌	Greiner bio-one	665 180
细菌用琼脂	VWR	J637
脑心浸出液肉汤	Dot Scientific	DSB11000-5000