利用活菌计数法评估病原细菌对番茄幼苗根部的定殖情况

摘要

来源： Matthysse, A. G. 实验室条件下测定细菌对植物表面的黏附性。J. Vis. Exp.，（2018）

本视频展示了一种用于检测野生型及纤维素缺陷型致病菌对番茄幼苗根部定植能力的实验方案。通过测定紧密黏附的活菌数量，结果显示野生型菌株具有更强的黏附能力及微菌落形成能力，凸显了纤维素在稳定根部定植过程中的重要作用。

方案

1. 使用活细胞计数法测定黏附性

1. 确定结合在沙培植物上的可存活细菌数量
   1. 将植物从容器和沙子中取出。从容器中取出植物时，首先移除容器顶部和底部的密封材料。将容器置于一张无菌纸上，轻轻敲击容器外壁使内容物松动，从而将整个沙子或土壤连同植物作为一个大的锥形圆柱体完整取出。

1. 如有必要，使用刮刀或玻璃棒从容器底部插入，松动容器边缘周围的材料。

2. 当含有植物的沙土柱在纸上自由放置时，将其从中间切开以暴露植物根系。如有需要，可从容器边缘附近以及根系附近分别采集沙样。这有助于确定细菌的扩散（以及积累和生长）情况。
3. 测量根系长度。拿起根系，通过将其浸入定量体积的水或缓冲液中并轻轻振荡，去除附着在根系上较松散的沙粒和细菌（即根际物质）。通过在适宜培养基（如LB琼脂）上进行平板计数，测定所得悬浮液中细菌的活菌数量。这代表了与根系松散结合的细菌数量。
4. 通过超声处理去除紧密结合的细菌，并测定其数量。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
种子	任意	不适用	记录种子批号和品种
沙子	海沙 Fisher Scientific	S25
沙子	Sigma-Aldrich	S9887
锥形容器	Stuewe & Sons, Inc.	Ray-Leach 锥形容器	提供多种不同规格，可根据所培养植物的类型选择合适的尺寸
超声波清洗仪	任意科学仪器供应商	不适用
封口膜	任意科学仪器供应商	不适用