耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的皮下感染

摘要

小鼠皮肤和软组织感染模型用于评估耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的毒力功能及宿主免疫应答。本文介绍了一种用于皮肤和软组织感染的皮下感染模型。

摘要

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）对全球公共卫生构成严重威胁，目前在美国，MRSA引起的皮肤和软组织感染已占所有软组织感染病例的一半以上。在各类软组织感染中，肌炎、化脓性肌炎和坏死性筋膜炎与社区来源的MRSA感染相关的报道日益增多。为了深入理解MRSA与宿主免疫系统之间的相互作用如何导致更严重的感染，建立动物模型至关重要，这有助于研究宿主和细菌两方面的因素。已有多种感染模型被用于评估金黄色葡萄球菌（S. aureus）在浅表皮肤感染过程中的致病机制。本文中，我们描述了一种皮下感染模型，可用于观察皮肤、皮下组织及肌肉的病理变化。

方案

1. 准备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）用于感染（感染前两天）

1. 从保存的菌种中挑取一环耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），接种至血琼脂（胰蛋白酶大豆琼脂，TSA）平板上。
2. 观察血琼脂平板上的溶血表型（菌落周围出现透明溶血环）。
3. 挑选一个溶血表型与其他实验一致的菌落。
4. 将该菌落接种至含有3 mL Todd Hewitt肉汤（THB）的15 mL带盖试管中，必要时加入相应的抗生素。
5. 在37°C、220 rpm振荡条件下培养过夜。

2. 感染前小鼠的准备（感染前一天）

1. 根据小鼠体型大小，剃除小鼠背部约 3 x 4 cm 面积的毛发。
2. 在剃毛区域涂抹约 5 mm³ 的脱毛膏（购自当地药店）。
3. 使脱毛膏在皮肤表面作用约 1 分钟。
4. 用 ddH₂O 浸湿纸巾。
5. 用湿润的纸巾擦去脱毛膏。

3. 准备用于感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（感染当天）

1. 将过夜培养的细菌培养物用10 mL预热的THB在50 mL带螺帽试管中按1:500至1:1000的比例稀释。
2. 在37°C、220 rpm振荡条件下培养约2.5小时，直至A_....

讨论

1. 小鼠皮肤和软组织感染模型是一种强大的工具 体内 病原体毒力评估。该病原体的致病性 S. aureus 皮肤和软组织感染中的感染情况可能因多种参数而异，包括接种量、细菌生长阶段、接种深度、小鼠年龄以及小鼠的遗传背景 ^{7, 8}在使用该模型研究毒力功能时，必须严格控制这些参数，以确保实验结果的一致性。我们已在多种小鼠品系中研究了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的皮肤感染，包括SKH1（无毛小鼠）、C57Bl/6、BALB/c和CD1。不同品系小鼠的感染结果存在差异。 ⁷，这与其他研究报道一致，即小鼠的遗传构成是决定MRSA感染严重程度的重要因素 ¹在本实验中，我们采用 CD1 小鼠，因为该小鼠品系已被证明非常适合用于相关研究 S. aureus 毒力因子 ⁵ 且比其他菌株更便宜。
2. 为确保实验结果的一致性，每次实验前必须检测用于感染的菌落是否具有溶血表型。 在绵羊血琼脂上呈现的β-溶血表型（菌落周围出现透明区域）反映了α-毒素的表达 S. aureus 分.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
THB	VWR international	95025-314
DPBS	Invitrogen	21-031-CV
1 ml 注射器	BD Biosciences	309602
27G1/2 针头	BD Biosciences	305109
羊血琼脂（TSA）	VWR international	90004-328