小鼠小肠移植模型已被公认为研究免疫排斥机制和筛选新型免疫抑制药物的重要工具。然而，由于该模型所涉及的技术极为复杂，其应用受到限制。现在我们介绍一种改良的技术。
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摘要
摘要
自1990年以来，基于他克莫司的免疫抑制方案的发展、外科技术的改进、强效免疫抑制药物的增多、感染预防措施的完善以及患者选择标准的优化，共同促进了各类肠道移植术后移植物和患者的生存率提高。目前，对于出现不可逆性肠功能衰竭且伴有肠外营养相关并发症的患者，应常规考虑进行小肠移植。然而，小肠移植的生存率提升速度较慢，尽管其预后正逐渐接近肾、肝、心和肺移植，但仍逊于其他器官移植。未来进展可能依赖于对移植物免疫学与生理学的深入理解，而动物模型将极大促进这一研究进程。小鼠小肠移植模型在移植肠道免疫学与生理学研究以及早期排斥反应的高效诊断方法探索中具有重要价值，亟需更广泛地应用。然而，该模型的应用受限于其极高的技术难度。我们已开发出一种改良手术技术：在进行门静脉与下腔静脉吻合时，在受体下腔静脉的近端顶点和远端顶点处，分别使用固定缝线与供体门静脉连接。随后，在下腔静脉内部，用连续缝合方式闭合下腔静脉左侧壁与供体门静脉；在打结固定近端顶点的固定缝线后，再于下腔静脉外部，用10-0缝线连续缝合闭合右侧壁与供体门静脉。该方法仅需在下腔静脉单侧进行吻合，操作更为简便，且10-0缝线的尺寸适宜，有助于避免出血和血栓形成。本文将对视频内容中的技术细节进行补充说明。
方案
供体准备与小肠获取：
- 通过腹腔注射戊巴比妥麻醉小鼠，并将其仰卧位置于手术区域。
- 做一条长的腹正中切口。辨认空肠近端并用6-0缝线结扎。在空肠结扎远端，将相连的肠系膜血管用8-0缝线结扎。
- 辨认回肠远端并用6-0缝线结扎。将相连的肠系膜血管在回肠结扎远端用8-0缝线结扎。
- 游离门静脉周围脂肪及附属组织，结扎 并切断胰十二指肠静脉和脾静脉。
- 暴露腹主动脉，并从周围组织中游离出肠系膜上动脉。
- 向下腔静脉注射1 ml肝素（10 U/ml）以实现肝素化。
- 在肝门处分断门静脉，从主动脉上分离并切断肠系膜上动脉，同时保留主动脉Carrel氏补片。
- 在结扎线远端切断空肠和回肠。完整切除整个小肠，随后置于4°C 的生理盐水中保存。
受体准备与移植：
- 通过腹腔注射戊巴比妥使小鼠麻醉，并将其仰卧位置于手术区域。
- 沿腹部正中线做一长切口。用纱布将腹腔内容物牵拉至腹腔外，以暴露腹主动脉和下腔静脉。
- 分离腹主动脉和下腔静脉的分支，并用10-0缝线结扎。
- 分别在腹主动脉近端和下腔静脉远端放置结扎线。
- 用30号针头在受体下腔静脉上做静脉切开，随后用显微剪将切口延长至与供体门静脉等长。
- 用30号针头在受体腹主动脉上做动脉切开，随后用显微剪将切口延长至与供体肠系膜上动脉Carrel补片等长。
- 用生理盐水冲洗腹主动脉和下腔静脉的切口。
- 将供体小肠置于受体腹部左侧，并用纱布覆盖。
- 在受体腹主动脉的近端顶点和远端顶点处，使用供体肠系膜上动脉Carrel补片放置固定缝线。
- 首先用连续缝合完成受体腹主动脉右侧与供体肠系膜上动脉Carrel补片的吻合。
- 为进行供体门静脉与受体下腔静脉的吻合，首先在受体下腔静脉的近端顶点和远端顶点处，使用供体门静脉放置两根固定缝线。
- 在下腔静脉内部，用连续缝合关闭下腔静脉左侧壁与供体门静脉。
- 在近端顶点固定缝线打一个结后，在下腔静脉外部用连续缝合关闭下腔静脉右侧壁与供体门静脉。
- 将供体小肠翻转至受体腹部右侧，用连续缝合关闭受体腹主动脉右侧壁与供体肠系膜上动脉的吻合口。
- 所有吻合完成后，先松开远端结扎线，检查吻合口有无出血。
- 若吻合口无明显出血，则松开近端结扎线。供体小肠迅速充血，颜色变为红色。
- 将移植物回肠的远端以端-侧方式与受体空肠近端用8-0连续缝线进行吻合。
- 将供体空肠近端外置为造口，并用每侧四针8-0缝线将其固定于腹壁右侧皮肤。
- 将肠管还纳至腹腔，并用6-0连续缝线关闭腹腔。
- 将受体小鼠置于温暖环境中。一小时后，小鼠恢复清醒。
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讨论
小肠移植后独特的免疫反应一直是广泛研究的课题，这些研究多采用小鼠小肠移植模型。所涉及的基本免疫反应包括移植物抗宿主反应、宿主抗移植物反应、两种反应的结合、慢性排斥反应以及免疫耐受。几乎所有已被证实或可能具有临床意义的免疫抑制剂，均已在小肠移植模型中对其有效性进行了测试。
我们对小鼠小肠移植技术进行了多方面的改进，以提高手术效率和成功率：
- 供体小肠的肠腔应保持清洁，不得残留任何粪便。
- 供体肠系膜上动脉腹主动脉Carrel片的边缘应修整平滑，并与受体腹主动脉开口大小相匹配。
- 将门静脉与受体下腔静脉吻合时，避免门静脉与肠系膜上动脉发生扭转，因为门静脉长度大于肠系膜上动脉。
- 重建血流时，应将小肠置于腹腔中央，并使肠系膜上动脉和门静脉保持适当张力，以避免血栓形成。
- 将宿主小肠还纳回腹腔时，肠系膜上动脉应保持适当张力，以防关腹后发生血栓。
- 关腹前在腹腔内留置0.1 ml头孢呋辛（20mg/kg），以预防感染。
- 行小肠吻合时，务必防止粪便流入腹腔，以避免术后感染。...
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 | |
|---|---|---|---|---|
| 缝线 | 10-0 和 11-0 | MONOSOF | ||
| 显微镜 | Unversal S3 | Carl Zeiss, Inc. |
参考文献
- SJ, M. iddleleton Is intestinal transplantation now an alternative to home parenteral nutrition. Proc Nutr Soc. 66 (3), 316-320 (2007).
- Lopez Santamaria, M., Hernadez Oliveros, F. Indications, techniques, and outcomes of small bowel transplant. Nutr Hosp. 22, Suppl 2. 113-123 (2007).
- Grant, D. Current results of intestinal transplantation. The International Intestinal Transplant Registry. Lancet. 347 (9018), 1801-1803 (1996).
- Timmermann, W., Gasser, M., Meyer, D., Kellersmann, R., Gassel, H. J., Otto, C., Thiede, A. Progress in experimental intestinal transplantation in small animal models. Acta Gastroenterol Belg. 62 (2), 216-220 (1999).
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