本方案中描述的小鼠自体血注射脑出血模型采用双次注射技术，以最大限度降低血液沿针道反流的风险，泵系统中不使用抗凝剂，并且消除了系统中的所有死腔和可扩张的管路。
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摘要
摘要
研究脑出血（ICH）后损伤的病理生理学机制需要一种可重复的动物模型。尽管脑出血占所有中风病例的10-15%，但目前仍缺乏特异有效的治疗方法。小鼠自体血注射模型通过立体定位将动脉血注入基底节区，模拟人类自发性高血压性脑出血。随后可在活体中研究出血后的反应，并对神经行为学缺陷进行量化，从而描述继发性病理变化并评估潜在治疗药物。本方案所述操作采用双次注射技术，以最大限度降低血液沿针道反流的风险，泵送系统中不使用抗凝剂，并消除系统中所有死腔和可扩张的管路。
方案
1. 仪器设备的准备
- 用 75% 乙醇擦拭立体定位仪框架和泵，以尽量减少细菌污染。
- 对 Hamilton 注射器和熔融石英针进行灭菌。
注意：若采用化学灭菌法，使用前务必用无菌水冲洗数次。 - 用 75% 乙醇擦拭石蜡纸表面，并静置晾干。
2. 注射前小鼠的准备
注意：请在手术前至少 7 天将小鼠运送至动物设施，以便它们适应新环境并减少应激。
- 称重小鼠以获取术前基线数据。
- 使用30%氧气、70%氧化亚氮和4%异氟烷诱导麻醉，直至小鼠对尾部夹捏无反应。
- 术后通过腹腔注射给予小鼠0.1 mg/kg的丁丙诺啡以进行镇痛。
- 剃除头皮毛发。
- 用无菌凡士林涂抹眼睛。
- 使用聚维酮碘溶液擦拭头皮三次进行消毒，然后让头皮自然干燥。
- 使用无菌外科手术刀在头皮正中矢状位做1 cm长的切口。
注意：切口应足够大，以充分暴露颅骨解剖标志。 - 从尾部基底起始处向远端1 cm范围内剃除1 cm长的毛发，并用聚维酮碘溶液擦拭三次进行消毒。
- 将小鼠固定于立体定位仪上。
注意：必须确保小鼠在立体定位仪中固定牢固，颅骨表面与仪器底座平行，前囟点暴露良好，并在其右侧留出至少3 mm的操作空间。
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讨论
本研究采用自体尾动脉血在小鼠中建立脑内出血的手术模型，可重复地模拟自发性基底节区出血。小鼠脑出血模型的优势在于可利用转基因动物研究发病机制；然而，由于小鼠体型较小，神经外科手术操作较大型动物更具技术难度。
胶原酶模型和自体血注射模型是两种已建立的实验性脑出血（ICH）模型。尽管胶原酶模型操作简便且出血高度可重复2，但其所用的细菌蛋白会降解基底膜，可能影响对固有炎症反应的研究。此外，在药理学（例如神经保护）实验中，胶原酶破坏的血脑屏障（BBB）可能非生理性地促进药物进入脑组织。近年来还开发出一种华法林相关性ICH模型3，可用于研究该类患者的出血扩展情况。自体血注射模型的优点包括：存在与占位效应相关的机械性损伤、体系无菌且不含外源性蛋白、可消除抗凝状态以研究自发性出血后自然的凝血与炎症通路，以及对出血量大小实现精确控制。由于所有小鼠的出血量相同，因此可在相对较小的样本量下，精确研究治疗干预对组织和功能结局的影响。
本文所述手术方法与其他已发表的自体血注射模型类似(4-7)，本方案中的多个.......
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披露
未声明任何利益冲突。
致谢
本研究由宾夕法尼亚大学转化医学与治疗研究所的博士后奖学金、宾夕法尼亚大学医学与工程研究所的培训项目资助（T32HL007954），以及康涅狄格大学健康中心 Marlene L. Cohen 和 Jerome H. Fleisch 学者奖（LHS）和美国国立卫生研究院 NS-029331 项目（FAW）资助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 用于小鼠神经外科手术的立体定位仪（St–lting，51925） | |||
| 微量输注泵及控制器（UMP-3 和 Micro4，World Precision Instruments，佛罗里达州萨拉索塔） | |||
| 小鼠保温垫（St–lting，50300） | |||
| 吸入式小鼠麻醉系统（Braintree Scientific，EZ-AF9000） | |||
| 25 μL 气密型硼硅酸盐玻璃哈密尔顿注射器，带涂层推杆，无针头 | |||
| （Hamilton 公司，内华达州里诺，1702RN 注射器：765401，卡套：30949，垫片：30946） | |||
| 熔融石英针头，截断至 2 cm 长度（Hamilton，17739） | 注：若每次手术前均进行灭菌处理，哈密尔顿注射器和熔融石英针头可多次重复使用。这些材料对防止血液凝固至关重要。 | ||
| 无菌外科手套 | |||
| 外科手术服、头帽和口罩 | |||
| 聚维酮碘（Betadine） | |||
| 75% 乙醇 | |||
| 无菌 27 号针头（一次性使用） | |||
| 无菌 1 cc 注射器（一次性使用） | |||
| 无菌手术刀片 | |||
| Cidex（戊二醛消毒液） | |||
| 无菌水 | |||
| 丁丙诺啡和异氟烷 | |||
| 无菌纱布 | |||
| 石蜡蜡纸方块 | |||
| 兽用外科胶（Vetbond，3M，明尼苏达州圣保罗） |
参考文献
- Hua, Y., Schallert, T., Keep, R. F., Wu, J., Hoff, J. T., Xi, G. Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat. Stroke. 33, 2478-2484 (2002).
- James, M., Warner, D., Laskowitz, D. Preclinical Models of Intracerebral Hemorrhage: A Translational Perspective. Neuro....
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