Drosophila melanogaster 睾丸的分离

摘要

Drosophila melanogaster 的睾丸可通过解剖针从成年雄性个体中快速高效地分离。经过练习，可在一至两天内分离出足量的睾丸组织，用于高通量测序或更传统的分子生物学方法对 DNA 或 RNA 进行分析，或用于基于抗体或酶学检测的蛋白质分析。

摘要

Drosophila melanogaster 的睾丸是研究干细胞维持与分化、减数分裂以及体细胞-生殖细胞相互作用的重要模型。通常从羽化后0-3天的成年雄性果蝇中分离睾丸。野生型果蝇的睾丸因其呈黄色而易于与其他组织区分，但实验室常用遗传背景的 white 突变体果蝇的睾丸在形状和颜色上均与果蝇肠道相似。在具有黑色背景的玻璃显微镜载片上进行解剖可显著提高睾丸的辨识度。使用解剖针从果蝇体内取出睾丸。与使用镊子解剖睾丸的方法相比，本方法速度更快，熟练操作者每小时可解剖200-300只野生型果蝇，获得400-600个睾丸。而 white 突变体果蝇或睾丸尺寸较小的突变体果蝇的睾丸较难解剖，通常每小时可获得200-400个睾丸。

方案

1. 制备带有黑色背景的玻璃显微镜载玻片：将20#白纸裁剪成与显微镜载玻片相同尺寸。使用永久性记号笔（例如 Sharpie）将纸的一面涂成黑色。在黑色面涂上白胶（Elmer's），然后将纸粘贴到载玻片上。该载玻片可重复使用。使用¾英寸标签胶带（Fisherbrand）将载玻片（玻璃面朝上）固定在 CO₂ 果蝇操作垫上，以固定其位置。
2. 收集0至3日龄的雄性果蝇。
3. 准备一桶冰、磷酸盐缓冲液（PBS）和解剖针。
4. 使用CO₂气流麻醉50–100只果蝇，并将其从培养瓶或小管转移至显微镜载玻片附近的果蝇操作垫上。
5. 用移液器吸取约50 μl冰浴PBS，滴在载玻片中央。
6. 用解剖针轻轻挑起一只雄性果蝇——先将解剖针浸入PBS中，然后轻轻触碰果蝇腹面（即靠近翅膀处），再将其放入PBS液滴中。
7. 将一根解剖针置于果蝇胸部与腹部之间中部位置，用力下压。另一根解剖针插入第六（A6）与第七（A7）腹节之间（从底部数第二和第三条条纹处），将腹部从胸部拉离。
8. 将睾丸与其他器官（尤其是肠道）分离。特别是在white突变体中，睾丸与肠道外观相似。关键区别在于：睾丸总是成对出现；每侧睾丸具有螺旋状结构，且颜色比肠道更白。
9. 将分离出的睾丸保存在装有冰浴PBS的聚丙烯微量离心管中。

代表性结果：

图1. 雄性生殖系统的背侧视图，来自 flybase.org/reports/FBim0000074.html。Flybase 来源说明：“改编自 Miller (1950) 第508页图38A。A. Miller. 黑腹果蝇成虫的内部解剖与组织学。载于 M. Demerec 编，《果蝇生物学》，第6章，第420–534页。冷泉港实验室出版社，影印版，1994年。©1994 冷泉港实验室出版社版权所有。经冷泉港实验室出版社（CSHL Press）许可使用。详见 http://www.cshlpress.com。”

讨论

我们提供一种从成年雄性黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）中分离睾丸的实验方案。由于该技术需要双手协调操作，熟练程度只能通过练习获得。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
解剖针	工具	Fisher Scientific	S17346
普通载玻片	工具	Fisher Scientific	12-553
显微镜光源	工具	Schott AG	KO-1500
CO2 垫板	工具	Genesee Scientific	59-172
台式 Flowbuddy 完整系统	工具	Genesee Scientific	59-122WCU
气泡加湿器	工具	Salter Labs	7100
球状填充针	工具	Genesee Scientific	54-119
¾” 标签胶带	耗材	Fisher Scientific	15-901-5B