小鼠下腔静脉血栓完全淤滞模型

摘要

小鼠下腔静脉完全阻断型血栓形成模型可产生可量化的静脉壁组织和血栓。该模型已证实可用于评估静脉壁与阻塞性血栓之间的相互作用，以及急性向慢性炎症转变的过程。

摘要

静脉血栓栓塞症（VTE）包括深静脉血栓形成（DVT）和肺栓塞（PE）。在美国，由于其高发病率和高死亡率，VTE已成为一个严重的公共卫生问题^1-2。继心脏病和卒中之后，VTE是第三大常见血管疾病³。仅在美国，每年估计有90万人受到影响，其中约30万人死于该病³。因此，建立一种可靠的体内动物模型以研究该疾病的发病机制十分必要。

采用小鼠下腔静脉血栓完全淤滞模型具有多项优势。该小鼠模型可使用极小体积且来源有限的试验试剂，从而显著降低成本。尤为可期的是，利用基因敲除小鼠可明确特定炎症因子和凝血因子的功能。目前的分子检测技术可对血管壁、血栓、全血及血浆样本进行定量分析。然而，该模型的主要局限在于手术操作空间狭小以及血管脆性较高。此外，由于下腔静脉样本重量较小（平均0.005克），在进行组织、血栓及血液检测（如实时聚合酶链式反应（RT-PCR）、蛋白质印迹法（western blot）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、酶谱分析（zymography）、血管壁与血栓细胞分析，以及全血和血浆检测）时，需增加动物数量以确保统计分析的准确性^4-8。

静止模型的主要缺点是缺乏血流，这会抑制施用的全身治疗药物对血栓和静脉壁的最大作用效果。

方案

1. 小鼠麻醉操作步骤

1. 将动物从笼中取出，放入麻醉前诱导室，以 5% 异氟烷和 100% 氧气进行气体诱导，流速为 0.5 升/分钟（通过蒸发器控制）。
2. 小鼠在麻醉诱导室中镇静后，从室内取出，使用电动剪毛器剃除腹侧腹部毛发；若使用脱毛剂，则可保留在诱导室内处理（1 分钟）。
3. 动物在持续镇静状态下称重，眼睛涂抹无菌眼用软膏，随后置于循环温水加热装置上，呈仰卧位，在通过鼻罩给予异氟烷和氧气的全身麻醉下继续操作。此时将氧气流速调低至 0.2 升/分钟。
4. 用氯己定溶液喷洒腹部（二乙酸氯己定具有快速杀菌作用且作用持久），再用无菌纱布擦拭三次，或持续擦拭直至手术区域清洁。

2. 小鼠显微外科及术后恢复操作

1. 使用虹膜剪在皮肤和腹壁上做一条2 cm的腹正中切口，暴露腹腔。用无菌生理盐水浸湿的2×2英寸纱布将肠管推向动物左侧。放置小鼠固定器，以便观察下腔静脉（IVC）。
2. 此时，手术剩余过程中采用2%异氟烷和100%氧气，流速为0.2升/分钟，维持麻醉深度。
3. 使用无菌棉签和超精细半弯虹膜组织镊进行钝性分离。操作小鼠组织时需格外小心，因其极为脆弱。进入腹腔后，用无菌生理盐水浸湿的4×4英寸纱布将肠管牵开并外置到无菌手术巾上，从而暴露下腔静脉（IVC）。
4. 从肾静脉至髂动脉分叉处的所有下腔静脉后侧分支均用电凝烧灼，侧支则用....

讨论

小鼠下腔静脉完全阻断型血栓形成模型可用于多种品系及不同年龄的小鼠。该模型最适合体重至少为20克的小鼠。这一静脉血栓动物模型可使研究人员研究静脉壁与闭塞性静脉血栓之间的炎症相互作用。根据我们的经验，为在各组之间对血栓重量、静脉壁炎症细胞计数、静脉壁蛋白、静脉壁基因表达以及全血或血浆活性检测分析获得具有统计学意义的结果，每组需要10只或更多动物。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
异氟烷气体
Prolene 7-0 缝线
Vicryl 5-0 缝线
皮肤粘合剂
眼用润滑膏
Nolvasan 溶液或抑菌溶液
体视显微镜
MediCapture
棉签
2×2 纱布
加热垫
麻醉机
玻璃珠器械灭菌器
显微外科器械
腹部固定器