大鼠和小鼠的诊断性剖检及特定组织与样本采集

摘要

本文介绍了对小鼠或大鼠进行基本尸体解剖的操作步骤，以及采集基本器官和较难获取的样本类型，用于组织学、微生物学和PCR评估。

摘要

从安乐死动物身上可采集多种样本类型，以帮助诊断或发现动物群体中的感染性病原体。正确采集组织用于后续组织学处理，可能影响检测结果的质量。本文介绍了基本的大体检查操作，包括识别心脏、肝脏、肺、肾脏和脾脏的方法，以及如何采集这些器官。此外，还演示了四种较难的组织/样本采集技术。肺组织的采集与灌注尤其具有挑战性，因为需要用固定液充分膨胀肺组织，才能使组织内部得到良好固定，并实现全面的组织学评估。本文逐步演示了如何取出肺并用固定液进行膨胀，以确保在24小时内实现组织的最佳固定效果。脑组织的采集同样具有挑战性，因其质地柔软且易受损。本文逐步演示了如何暴露并从颅腔中取出脑组织，同时将对组织的损伤降至最低。肠系膜淋巴结是检测多种常见感染性病原体的良好样本类型，因为肠道病毒在淋巴结中的存留时间比在粪便中排泄的时间更长。本文演示了定位并无菌采集肠系膜淋巴结的逐步操作步骤。最后，可通过细菌培养或PCR检测尸检时采集的鼻腔和/或支气管分泌物吸出物，以鉴定呼吸道感染性病原体。本操作描述了如何获取并制备呼吸道吸出物样本，用于细菌培养和PCR检测。

方案

1. 尸检准备工作

1. 任何大体尸检（大体解剖）的重要部分都包括动物的病史及所见病变的描述。
2. 阅读您组织病理学切片的兽医病理学家可能未曾见过该动物，因此依赖您提供背景信息。
3. 在对动物实施安乐死后之前，准确描述您所观察到的现象。例如：“雌性小鼠；笼中五只之一；C57BL/6N；头部向右侧倾斜”或“棕色雄性大鼠；品系未知；动物有搔抓行为；背部近尾部和头部区域出现斑片状脱毛”。
4. 使用清晰、描述性强且客观的语言。如果“轻度”、“中度”和“重度”之间的界限明确，则这些修饰词可能有用。通常不建议使用食物或日常物品来类比描述。
5. 称重和测量动物、病变或器官通常很有帮助。您认为的“脾脏肿大”可能在另一位观察者看来属于正常大小。说明脾脏大小为3cm × 1.5cm则提供了更客观的信息。
6. 摄影记录可能具有极高价值。
7. 在处理活体动物、可能具有传染性的尸体或甲醛等化学物质时，须遵守所有相关的职业健康安全规定并佩戴个人防护装备。

2. 心脏、肺、肝、肾和脾的大体尸检定位与检查

1. 在动物安乐死前，准备好所需的全部用品。至少应包括解剖板或类似的工作台面、镊子、剪刀、容器标签、固定液，以及可能需要的任何培养基或收集管/杯。
2. 简要评估动物的状态、行为和活动情况。观察并记录呼吸模式（如快速、浅表呼吸）以....

讨论

研究结束时的数据采集可能需要对动物进行死后检查。应详细描述所观察到的病变，并记得检查所有组织。这些操作流程主要旨在优化针对传染病监测的剖检和样本采集，但大多数步骤也可轻松调整，用于针对疑似疾病事件或暴发的专项调查，此时可能仅需采用其中一部分操作。许多步骤同样适用于研究结束时更为常见的剖检，此类剖检通常作为整体形态学评估的一部分，并结合采集特定研究样本以供后续分析。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
切板	Thermo Fisher Scientific, Inc.	Cat #36114
小剪刀	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5910, G204	23mm 刀片，3.5" 长度，直型
中号剪刀	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-6808, G207	5"
大剪刀	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-6826, G65"	6.25"
弯头镊子	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-8254 (M1/21004)	4.5"，带齿，轻微弯曲
显微解剖镊	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5238	Hudson-(EWALD)
组织镊	Roboz Surgical Instruments Co.	RS--8160	鼠齿型
火焰灭菌器	Oxford Labware	Bacti-Cinerator #5889-001007
手术刀	Cancer Diagnostics, Inc.	Finger Scalpels #60, Cat#FS0060
移液管	VWR international	Pasteur Pipet 5 3/4", Cat#14672-400
高压灭菌袋	Propper Manufacturing Company	Sterilizer Bag Paper Pouches Cat#021002(3100923)E09110	用于 Pasteur 移液管
移液球	VWR international	Cat#56310-240
Eppendorf 管	Sarstedt Ltd	SafeSeal 微量管 2mL，货号#72.695
Eppendorf 管	Argos	5mL 微量管 货号#T20765-C
注射器	BD Biosciences	1ml-309602 3 ml-300910 5ml-309603 10mL 货号#309604 20mL 货号#309661
针头	BD Biosciences	26G-309625 18G-305195
中性缓冲甲醛	VWR international	20L 10% NBF，货号#16004-128
生理盐水	Thermo Fisher Scientific, Inc.	缓冲血库生理盐水，货号#23-309-178
胰蛋白胨大豆肉汤	BD Biosciences	TSB：脱水粉末，货号#211825
磷酸盐缓冲液	Sigma-Aldrich	HA 缓冲液，货号#P3813-10PAK
小号甲醛杯	VWR international	4oz 货号#36318-852 8oz 货号#36318-860 16oz 货号#36318-858
大号甲醛杯	OakRidge Products	32oz 容器 货号#0432-1100
特大号甲醛杯	VWR international	HDPE 多用途 160oz 容器 货号#89038-282
缝合材料	Henry Schein	编织丝线外科缝合线，货号#100-5000, M766750	用于小鼠肺膨胀
细绳	Staples	货号#QUA-46173	用于大鼠肺膨胀