建立眼病模型的玻璃体腔注射法

摘要

玻璃体内注射是视觉科学研究中用于眼部疾病或局部治疗直接给药的常用技术。本视频展示了一种使用1 ml注射器配合玻璃毛细管进行玻璃体内注射的实验方案。同时提供了有关避免大量出血和晶状体损伤的实用技巧。

摘要

玻璃体内注射是视觉科学研究中广泛使用的一种技术，可用于建立眼部疾病动物模型，或作为局部治疗的直接给药方式。本视频介绍了如何使用简单且低成本的工具完成玻璃体内注射操作。实验采用1 ml注射器替代哈密尔顿注射器，并提供了实用技巧，指导如何使用玻璃毛细管制备具有理想尖端的合适注射针头，以及如何将注射器针头与玻璃毛细管紧密连接。

进行一次良好的玻璃体内注射需注意三个方面：1）注射部位不应破坏视网膜结构；2）应避免出血以降低感染风险；3）不应触碰晶状体以防止外伤性白内障。简而言之，最重要的一点是尽量减少对正常眼部结构的干扰。为避免损伤视网膜，选择大鼠眼球的上方鼻侧区域作为注射部位。此外，针头穿刺点位于平坦部，距离大鼠眼球角膜缘约1.5 mm。在注射前，轻轻从穿刺孔挤出少量玻璃体以降低眼内压。采用45°注射角度，可降低大鼠眼发生外伤性白内障的可能性，从而避免相关并发症及晶状体因素的干扰。本操作中无需切开结膜和眼外肌，亦无出血。由于操作快速且创伤轻微，一次成功的玻璃体内注射可在数分钟内完成。

本方案中所述的注射套件专用于玻璃体内注射。然而，本文介绍的方法和材料也可用于向小型哺乳动物的脑、脊髓或其他器官给药的其他注射操作。

方案

1. 使用拉针仪制备玻璃移液管，将其连接至1 ml注射器，并用Parafilm密封连接处。将2 µL溶液吸入移液管尖端，准备进行注射。
2. 通过腹腔注射给予氯胺酮（80 mg/kg）和赛拉嗪（8 mg/kg）（体积比为2:1）以麻醉大鼠。
3. 玻璃体注射前，在大鼠眼睛上滴加一滴0.5%的丙美卡因作为局部麻醉剂。
4. 固定大鼠体位，暴露眼部的上方鼻侧区域。
5. 使用30号针头在平坦部水平穿刺上方鼻侧巩膜。避免接触眼外肌 和血管。
6. 轻压眼球，使少量玻璃体经穿刺孔从玻璃体腔后部流出。
7. 将玻璃移液管尖端以45°角经巩膜穿刺孔插入玻璃体腔。向玻璃体后腔注射2 µL溶液，留针数秒后缓慢退出。避免触碰晶状体和眼内血管。
8. 玻璃体注射后，在大鼠眼部涂抹托百士眼膏以预防感染。

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讨论

良好的玻璃体内注射对于建立动物模型以及实施直接的眼内治疗具有重要意义。首先，注射部位不应破坏视网膜结构；其次，应避免出血以降低感染风险；第三，应避免触碰晶状体，以防发生外伤性白内障。最重要的是，应尽量减少对正常眼内结构的干扰。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
手术显微镜	Olympus Corporation	OME
玻璃移液管	World Precision Instruments, Inc.
移液管拉制仪	David Kopf Instruments
1ml 注射器			一次性使用
30G 针头			一次性使用
氯胺酮	Aldasan		麻醉剂
赛拉嗪	Aldasan		麻醉剂
爱尔凯因	Alcon		0.5% 盐酸丙帕他卡因
托百士	Alcon		软膏，3% 妥布霉素