通过移液器和反向插管法在小鼠中进行鼻内给药以实现鼻脑药物递送

摘要

来源：Kanazawa, T., et al. 在吸入麻醉下评估鼻脑药物递送的新型鼻内给药方法。J. Vis. Exp. (2018)

本视频演示了在麻醉小鼠中通过鼻内给药方式递送放射性标记药物，以实现药物从鼻腔到脑部的输送。视频解释了药物如何穿过鼻腔上皮，并经由神经通路到达脑组织，以及纤毛运动如何影响药物在鼻腔内的滞留与清除。此外，视频还介绍了一种替代性的反向插管方法，该方法通过食管插入导管，使药物逆着纤毛运动方向输送，从而增强药物滞留并提高转运效率。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 在吸入麻醉下用于鼻内给药的实验动物

1. 将实验小鼠饲养在不锈钢笼具中，置于12小时光照/12小时黑暗循环（光照时间：上午8:00至晚上8:00）环境下，温度控制在23 ± 1°C，相对湿度为50% ± 10%，并 随意摄取 食物和水的获取
2. 在实验开始前，先以4%浓度的异氟烷诱导，随后用2%异氟烷通过吸入法对小鼠进行麻醉。通过检测表面翻正反射消失来确认麻醉达到所需水平。

2. 给药溶液的制备

1. 将[¹⁴C]-菊粉（50 μM，每只小鼠0.5 μCi/mL）用磷酸盐缓冲液稀释，配制成给药溶液，并在4 °C保存至使用。

3. 小鼠鼻内给药

1. 使用可临时开启的吸入式面罩的微量移液器法（图1）
   1. 在2%异氟烷吸入麻醉下，用胶带将小鼠四肢固定于软木板上，使其呈仰卧位（图1A）。
   2. 在小鼠处于吸入麻醉固定状态下，每隔30秒交替向左右鼻孔注入1至2 μL给药溶液，每只小鼠累计给予总体积为25 μL的溶液（图1B和C

结果

图1：使用移液器结合可临时打开的吸入面罩进行鼻内给药。 照片显示一只固定的小鼠（A）在给药前佩戴闭合的面罩，（B）打开面罩进行鼻内给药时的特写图像，以及（C）整体视图。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
ddY 小鼠	Japan SLC, Inc.		雄性，4-6周龄，20-30 g
异氟烷	辉瑞	v002139
异氟烷装置设置	SHINANO制造有限公司	SN-487-OTAir，SN-489-4
异氟烷面罩	SHINANO制造有限公司		对于小型啮齿类动物
异氟烷面罩（可开启型）	SHINANO制造株式会社		特殊订单
麻醉箱	SHINANO制造有限公司	SN-487-85-02
动物实验剪刀-1	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	B-27H
动物实验剪刀-2	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	B-13H
镊子-1	FINE SCIENCE TOOLS 公司	11272-30	Dumont #7 Dumoxel
镊子-2	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	A-12-1
套管管（PE-50）	Becton, Dickinson and Company	5069773	内径：0.58 mm，外径：0.965 mm
导管管（SP-10）	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	KN-392	内径：0.28 mm，外径：0.61 mm
夏弗	MARUKAN, LTD.	DC-381
体视显微镜	奥林巴斯株式会社	SZ61
27G 1/2 英寸 13 毫米针头	TERUMO CORPORATION	NN-2738R
1 mL 注射器	TERUMO CORPORATION	SS-01T
注射泵	神经科学	NE-1000
微型刮勺	Shimizu Akira Inc.	91-0088
微量移液器（0.5–10 μL）	Eppendorf AG	Z368083
移液芯片	Eppendorf AG	0030 000.811
胶带	TimeMed Labeling System, Inc.	T-534-R	用于固定小鼠
[¹⁴C]-菊粉	American Radiolabeled Chemicals Inc.	ARC0124A	0.1 mCi/mL
EtOH	和光纯药工业株式会社	054-00461