利用 StemCell Technologies 公司的 RosetteSep 试剂盒从人血液中富集自然杀伤细胞

摘要

自然杀伤细胞是一类数量较少的淋巴细胞。本文展示了如何使用 StemCell Technologies 公司的试剂盒，通过阴性筛选法从人血中分离这些细胞。所获得的细胞具有活性，且未与抗体接触，因此可直接用于多种实验操作。

摘要

自然杀伤细胞（NK细胞）是一类属于先天免疫系统的大型颗粒性细胞毒性淋巴细胞，在抗肿瘤和抗感染免疫中发挥重要作用，同时也参与妊娠早期过程以及移植排斥反应。这些细胞存在于外周血中，可从中分离获得。细胞分离可采用阳性或阴性选择方法。阳性选择使用特异性针对目标细胞表面标志物的抗体，而阴性选择则使用针对除目标细胞外所有其他细胞表面标志物的多种抗体混合物。后一种技术的优势在于目标细胞不会结合抗体，从而降低了非预期细胞活化或分化风险。在本视频方案中，我们演示如何利用StemCell Technologies公司的RosetteSep试剂盒，通过阴性选择法从人外周血中分离NK细胞。该操作包括在机构审查委员会批准的保护人类受试者方案下采集人外周血，并将其与一种抗体混合物共同孵育，该混合物中的抗体可结合除NK细胞外其他所有外周血单个核细胞（如T淋巴细胞、单核细胞等）表面的标志物。该抗体混合物中的抗体还与结合红细胞表面血型糖蛋白A的抗体偶联，因此所有非目标细胞和红细胞将被交联形成复合物。将血液与抗体混合物稀释后，覆盖于Histopaque密度梯度液上并进行离心。NK细胞（>80% 纯度）可于Histopaque与稀释血浆之间的界面处收集。类似原理的抗体混合物也可用于富集其他细胞群体，例如人T淋巴细胞。

方案

每种Rosette Sep分离试剂盒均附有详细的实验方案，可在StemCell Technologies网站在线获取¹。

讨论

利用该技术分离的细胞可使用其他细胞分离试剂盒进一步分为不同的细胞群。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
用于人自然杀伤细胞的玫瑰花结分离试剂盒	试剂	Stem Cell Technologies	15065
无菌 PBS，1×	试剂	GIBCO, by Life Technologies	14040-058
胎牛血清（FCS, FBS）	试剂	GIBCO, by Life Technologies	16140-071
Histopaque-1077	试剂	Sigma-Aldrich	10771
添加2% FCS的PBS及Histopaque溶液必须在实验开始前恢复至室温。