在大鼠模型中静脉注射重组腺相关病毒载体

摘要

来源：Grames, M. S., 等．大鼠腺相关病毒静脉注射方法与技巧及中枢神经系统转导评估．J. Vis. Exp. (2017)

本视频演示了在大鼠尾静脉中注射重组腺相关病毒（AAV）的操作。病毒经侧尾静脉注射后进入血液循环，流经心脏并到达脑部，在脑内进入神经元，促进靶蛋白的表达，从而用于神经治疗应用。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 准备大鼠

1. 将氧气流量调至 1 L/min，并将异氟烷麻醉剂浓度设为 5%。通过检查所有连接管路和三通阀方向，确保麻醉气体正常通入诱导室。
2. 将大鼠放入气体麻醉诱导室中，持续约 3 分钟，直至大鼠失去反应。
3. 通过夹捏足趾确认麻醉深度是否充分；夹捏后足部或腿部应无任何运动。
4. 将异氟烷麻醉剂浓度降至 2% 以维持麻醉，并调节三通阀，使麻醉气体流向麻醉面罩。
5. 将大鼠的鼻部置于麻醉面罩内，并调整大鼠体位，使其侧卧。
6. 定位尾部外侧静脉。
   注意： 尾部外侧静脉位于尾部横截面的约 10 点和 2 点位置，尾部背侧顶端为 12 点位置。当大鼠侧卧时，尾部外侧静脉应朝上。
7. 用酒精消毒棉片擦拭注射区域。注射部位位于尾部长度的下三分之二处。

2. 注射载体

1. 用一根手指在注射区域稍上方牢固地按住尾巴，手指正对侧尾静脉，以使静脉扩张。
2. 将针头斜面朝上，与可见的尾静脉平行对齐。
3. 刺穿尾静脉上方的皮肤，操作时务必小心，避免伤及另一只手所按压的尾静脉。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1 mL 注射器	BD	309626	附带 25g 针头。注射时需更换为 27–30g 针头
30g 针头	BD	305106
异氟烷	Piramal Healthcare	66794-013-25	异氟烷 USP 250 mL
麻醉面罩	Kopf Instruments	906
纱布	Henry Schein	100-2524	2" x 2" (5 cm x 5 cm)
气体麻醉蒸发器	SurgiVet	4214322	Classic T3
气体麻醉废气清除装置	SurgiVet	32373B10	Enviro-PURE
加热垫	Sears	17280
70% 乙醇	Decon Laboratories, Inc.	2401	140 proof
70% 异丙醇	VWR	89108-160