糖尿病大鼠热伤害性感受阈值的快速测定

摘要

在此，我们介绍一种快速、可靠且简便的方法，用于确定大鼠或小鼠出现伤害性防御行为的最低温度。 即 的 热伤害感受性阈值 （TNT）。该方法施加缓慢递增的热刺激，可对TNT进行精确且可重复的评估，同时对动物造成的应激最小，甚至几乎没有。

摘要

疼痛性糖尿病神经病变（PDN）的特征是 痛觉过敏，即对有害刺激的敏感性增加，以及 痛觉过敏，即 对通常无害刺激的过度敏感¹. 糖尿病性痛觉过敏和异常性疼痛已在多种不同的啮齿类动物糖尿病模型中得到研究²。然而，正如 Bölcskei 所述 等，测定“疼痛在动物模型中具有挑战性，因其具有主观性³此外，用于测定对有害热刺激行为反应的传统方法通常缺乏可重复性和药物敏感性。³例如，通过使用Ankier的热板法⁴以恒定的高强度热刺激（52–55 °C）诱发动物后肢和/或前肢的退缩、畏缩和/或舔舐行为，并将这些反应的潜伏期作为反射潜伏期进行量化。然而，对热刺激呈现痛觉过敏的动物在使用这些高于阈值的温度时，其反射潜伏期的差异并不具有可重复性。^3,5. 作为一种最近描述的方法，Bölcskei 等⁶此处描述的实验方法可用于快速、灵敏且可重复地测定小鼠和大鼠的热痛觉阈值（TNTs）。该方法主要通过对小鼠或大鼠足底皮肤施加缓慢升高的热刺激来实现。该方法在研究如疼痛性糖尿病神经病变（PDN）等痛觉过敏状态下的抗伤害感受效应时尤为敏感。下述实验步骤基于Almási等人先前详细发表的方法。 等 ⁵ 和 Bölcskei 等 ³此处所述实验程序已获莱特州立大学实验动物护理和使用委员会（LACUC）批准。

方案

小鼠和大鼠的甩尾潜伏期（TNTs）通过增量式热板镇痛仪 [iHPAM，IITC 公司生命科学部（美国加利福尼亚州伍德兰希尔斯）] 进行测定。该设备由多个部件组成：一块铝制加热板（10 × 20 cm），其下方设有加热系统，上方配有聚甲基丙烯酸甲酯（Plexiglas）观察室；一个温度控制单元、用于数据采集的软件（IITC 部件号：Soft Series 8）、一台个人计算机（PC）以及一个用于远程启动、停止或重置设备的脚踏开关。加热系统还允许通过设备前方的小键盘手动启动、停止或重置加热过程。iHPAM 可设置多种加热速率以及待机/切断温度。

1. 仪器设置

1. 在测试动物之前，目视检查设备，以确认所选的加热速率例如，6 °C/min），初始待机温度和最终截止温度（例如，分别为 28 °C 和 55 °C。
2. 检查所有连接。若需保存结果的电子副本，必须将仪器连接至运行 Software Series 8 的计算机。 Alternatively，也可通过仪器的串行端口打印结果的纸质副本。
3. 测试设备。踩下脚踏开关一次，以确保软件系列8能够记录数据：初始待机温度、最终截止温度以及达到截止温度所需的时间（秒）。
4. 作为进一步的对照测试，参与实验的研究人员可能需要亲自体验该设备。在感知到疼痛（46–48 °C）时将手从金属板上移开，不得对皮肤造成伤害，也不应引起后续不适。

讨论

与经典的热板法测定热痛觉过敏类似^4,13，本文所述的伤害性感受检测方法可快速、可靠地量化大鼠和小鼠的伤害性防御行为。然而，与经典方法不同，渐进式热板法是一种非侵入性且几乎无应激的检测方法。尽管实验过程中需要一定程度的限制（i.e.，动物必须置于观察室内），但大鼠和小鼠通常已适应类似环境（e.g.，饲养笼具）。

在所述条件下，正常的年轻成年大鼠和小鼠在接近 47 °C 的温度下表现出伤害性防御行为。尽管这些阈值略高于其他研究者报道的结果^3,5,13，但我们的结果与在人类¹⁴、猴子¹⁵及其他动物模型¹⁰中观察到的 46–48 °C 的热痛觉阈值一致。本研究与已发表研究^3,5,13之间热痛觉反应阈值（TNTs）的差异可能与所用动物的年龄有关。事实上，年轻成年大鼠的热痛觉阈值高于 4 周龄或更年长大鼠的阈值¹⁶。

综上所述，按照上述步骤操作，渐.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
渐进式热板镇痛仪	IITC Inc. Life Science	部件号 #PE34
Soft Series 8	IITC Inc. Life Science	部件号 # Series8
链脲佐菌素	Calbiochem	572201