准备从大鼠脾细胞T细胞生长因子

摘要

我们描述的T细胞生长因子在体外扩增抗原特异性大鼠T淋巴细胞线的准备。

摘要

抗原特异性T细胞株或文化克隆的维修需要轮抗原诱导激活细胞^扩张 1,2阶段分开。白细胞介素2除了在扩张阶段的文化传媒，是必要措施，防止细胞死亡，并足以维持短期的T细胞系，但已被证明能增加^Th1细胞极化3。 T细胞生长因子（TCGF），其中包含混合的细胞因子白细胞介素2的更换是更有效地保持长期的T细胞系在^体外培养3比白细胞介素2。此外，TCGF可以很容易地在实验室中大量的准备和重组白细胞介素2比便宜得多。

在这里，我们展示如何准备从大鼠脾细胞培养上清TCGF。在此过程中，我们收获脾脏从幼稚刘易斯安乐死大鼠胸腺和血液采集。我们准备从脾单细胞悬液，析渗透压冲击的红血细胞，而种子在培养基中的脾。与非选择性地激活所有大鼠T淋巴细胞，诱导细胞因子的产生，有丝分裂原刀豆蛋白A的细胞受到刺激。文化supernantant收集48小时后andexcess伴刀豆球蛋白A是必然的α甲基mannoside，以防止它激活T细胞，TCGF将增加线路。 TCGF是无菌过滤，分装，储存于-20 ° C

方案

1. 以Lewis大鼠脾脏（160 - 200G之间的老鼠是最好的）。在培养皿菜含有PBS +抗生素（PBS - PS），使用细胞过滤器Dilacerate冰。放入50毫升管。填写用PBS - PS。
2. 自旋为10分钟，在4 ° C至沉淀细胞。
3. 清洗细胞两次。
4. 悬浮颗粒在NH ₄氯0.15米（5毫升每脾）。混合3分钟就冰吸管轻轻地，不断溶解红细胞。填充介质管。
5. 自旋为10分钟，在4 ° C至沉淀细胞。
6. 清洗细胞两次。
7. 细胞计数。大鼠脾给出了200-250万个单元格。
8. 种子细胞完全培养基，在每毫升200万:50毫升每⁷⁵厘米2烧瓶。
9. 让我们成长为48小时，在孵化器。
10. 旋在4 ° C 15分钟沉淀细胞。
11. 收集上清液;丢弃的细胞。
12. 添加15毫克/毫升甲基mannoside去上清。调匀。
13. 过滤器（0.2毫米）
14. 分装并储存于-20 ° C 10天，如果必要，可以保持在4 ° C。

讨论

我们准备从Lewis大鼠脾细胞TCGF，因为我们经常从天真这株收获血清和thymi Lewis大鼠T细胞系在体外刺激大鼠安乐死。这TCGF，可以被用来促进从其他的大鼠株T细胞系的生长和生存。 TCGF也可准备从其他菌株的大鼠。

材料