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可植入大脑中闭塞小鼠模型中，本文提出的。脑梗塞的程度进行评估，神经行为学评分和甲酚紫染色，染色，TTC替代，提供了巨大的优势，以测试在并行的兴趣标记。
中风是第三大死亡原因和在世界上的残疾的首要原因。缺血性中风占所有中风的约80％。然而，溶栓组织型纤溶酶原激活剂（tPA）治疗急性缺血性中风的存在是唯一的。这使研究人员开发了几个缺血性中风模型，在不同的物种。两种主要类型的啮齿类动物模型已经开发全脑缺血或局灶性脑缺血模型。为了模拟缺血性中风的患者中，约80％的人在血栓形成或栓塞性中风发生在大脑中动脉（MCA），管腔内的大脑中动脉闭塞（MCAO）模型是非常相关的中风研究的领土。此模型的大鼠Koizumi 等人首先开发于1986年1。由于在小鼠体内的遗传操作的容易性，这些模型也被开发在这一物种2-3。
内容“>在这里，我们提出在C57/BL6小鼠大脑中动脉闭塞的瞬态过程。以前的研究报告的封堵器的物理特性，如齿顶圆直径，长度，形状和灵活性是至关重要的重现性梗死体积的4。这里，一个商业硅涂覆的单丝（Doccol公司）已被使用。另一个很大的优点是，这种单丝诱导蛛网膜下腔出血的风险降低。使用蔡司立体显微镜STEMI 2000，硅涂布的单丝导入颈内动脉（ICA）的外颈动脉（ECA），直到单丝通过一个切割阻塞MCA的基础上恢复血流量，1小时后除去的单丝，以模仿裂解后的血栓栓塞血块中的血流恢复人类。脑梗塞的程度，可以首先计算由神经系统的得分和所测量的梗死体积。因此，分析他们的神经行为学评分在再灌注后不同时间缺血小鼠。为了评估梗死体积，2,3,5 - 氯化三苯基四氮唑（TTC）染色，通常执行。在此，我们用甲酚紫染色，因为它提供了一个机会来测试许多重要的标志物免疫组化。在这段视频中，我们报道了MCAO程序;神经甲酚紫染色的梗死体积分数和评价。短暂性大脑中动脉闭塞（MCAO）
1。外科手术（ 图1）
短暂性大脑中动脉的阻塞（tMCAO）上进行2 - 3个月大的雄性C57BL / 6小鼠（22-28G）。 IRCM生物伦理委员会动物护理批准该协议。外科工具被灭菌，高压灭菌（121℃60分钟，在15 psi）。每只动物之间，他们使用热珠灭菌器（15秒）消毒。用70％的乙醇消毒的外科手术和其他设备。
手术前两小时，的小鼠，analgesized与丁丙诺啡（0.03毫克/公斤BWIP的）。
图1A中。
图1B。
2。大脑中动脉血流的恢复
在reanesthesia之前，neuroscore可以进行检查，以评估成功的手术。
3。假手术
假手术，所有的程序都是相同的，只是，封堵器未插入。
4。 Neuroscore
神经功能缺损允许再灌注后不同程度的伤害程度后，估计成功的tMCAO的评价。神经功能缺损评分如前所述5 </ SUP> 1，24，48和72小时再灌注后执行。扩大的六分：
5。甲酚紫染色（ 图2）
的PBS溶液灌注之后，大脑快速冷冻在异戊烷中，并贮存于-80℃C.小鼠大脑也可以灌注，用4％多聚甲醛（PFA）取决于计划的免疫组化研究。冠状脑切片（17微米）的低温恒温器的快捷方式进行。一节收集了每30同一张幻灯片上有代表性的脑损伤。量量化，2张幻灯片被染成甲酚紫染色和图像分析系统（Scion的公司，冯检基，MD）是用来评估病变。以任意单位（像素）计算损伤体积，并作为每个区段对侧非损伤的面积的百分比表示。其他的幻灯片保持在-80°C免疫组化研究。另外，PFA固定的大脑可以减少在30-50微米，，使用vibratome和脑梗死体积测量的建议，Han 等人（2009）6。
的neuroscore评价证实的tMCAO脑卒中后的成功，并且确定的tMCAO再灌注后的效率。在我们的手中，所有的老鼠至少有一个温和的一致卷曲（neuroscore 2）和神经功能缺损一般是稳定的72小时腔内的过程。大多数小鼠表现出轻度一致的卷曲（neuroscore 2）。没有卷曲的小鼠被排除在研究之外。然而，neuroscore评估不允许我们能够区分小鼠海马受伤的，一个完整的海马。
没有观察到的死亡率在手术当天，表明蛛网膜下腔出血没有发生。当确定在小鼠蛛网膜下腔出血，这个系统从分析中排除。从Doccol公司，这是比家庭自制的单丝光滑，增加了使用的硅涂层单丝成功tMCAO，并降低蛛网膜下腔出血。在这个模型中，24小时和72小时后的死亡率是14％，一般报道为60分钟的阻塞。可能是由于一个大梗死体积的这个小鼠品系的死亡率。还观察到一个强大的病变可重复性（标准偏差为15％），这是非常有趣的研究神经保护作用的分子，可以隐藏他们的影响（S）的模型的变化。
的程度脑损伤tMCAO的评估，我们选择使用甲酚紫染色（ 图2），而不是TTC有大量的材料测试相关的标记6。病变的程度是相对一致的。然而，我们注意到，在一些小鼠，海马受伤（约30％的小鼠）。有趣的是，要注意，甲酚紫染色法可以应用至1周以后。在文献中，脑梗死的百分比从一个不同的研究的。这取决于选择的小鼠品系，麻醉，脑切片的厚度，所用的单丝，或使用6，7的染色。
图1。计划使用硅涂层的管腔内的单丝中脑动脉的闭塞。 A。简化方案的小鼠大脑和脑动脉连续缝合和剪辑的硅涂层，以准备采用单丝。B.通过Willis环的位置，单丝表示。单丝通过 ECA引入ICA，MCA，ACA，大脑前动脉闭塞的基础上，BA，基底动脉，颈总动脉CCA C.威利斯，Willis环; ECA，颈外ARTERY ICA，颈内动脉，MCA，大脑中动脉; PCA，后交通动脉; PPA，翼腭动脉。
图2。甲酚紫染色后72小时再灌注后梗死面积（主要是纹状体，大脑皮层相邻的脑区） 的小鼠脑组织的代表冠状面显示白色（不染甲酚紫）。的损伤体积（白色部分，大脑右半球）分隔和对侧非损伤区域（左侧大脑半球）的百分比表示。
作者有没有利益冲突披露。
生产和免费使用这篇文章是由蔡司公司
可植入大脑中闭塞小鼠模型中，本文提出的。脑梗塞的程度进行评估，神经行为学评分和甲酚紫染色，染色，TTC替代，提供了巨大的优势，以测试在并行的兴趣标记。
这项研究是由82946一个CIHR队授予＃CTP，CIHR授予的＃MOP 102741，以及一个加拿大的椅子＃216684和施特劳斯基金会的支持。 ER得到了从加拿大心脏及中风基金会的奖学金。
