使用 Miltenyi MACS 分离法从小鼠淋巴结中分离 CD4+ T 细胞

摘要

使用 Miltenyi MACs 试剂盒分离淋巴细胞是从全淋巴组织匀浆中纯化细胞的一种可靠方法。利用 Miltenyi 系统纯化的细胞纯度通常 ≥ 96%。本文中，我们演示了分离 CD4+ T 细胞的步骤，这是 Miltenyi 提供的多种试剂盒之一。

摘要

从原始来源分离细胞是许多更复杂实验方案中的必要步骤。Miltenyi 提供了可用于多种生物体（包括人类、非人灵长类动物、大鼠，以及本文所述的小鼠）的细胞分离试剂盒。基于磁珠的细胞分离技术可用于阳性选择（或细胞耗竭）以及阴性选择。本文中，我们演示了对未接触或初始状态的 CD4+ 辅助性 T 细胞进行阴性选择。采用此标准方案，通常可获得纯度 ≥ 96% 的 CD4+/CD3+ 细胞。本方案与 JoVE 第 7 期发表的《小鼠外周淋巴结的解剖与双光子成像》方案联合使用，用于纯化 T 细胞及其他细胞类型，以进行过继性转移并用于成像研究。尽管本视频方案中未展示流式细胞术（FACS）分析，但仍强烈建议通过 FACS 并使用适当的抗体检测所分离细胞的整体纯度。此外，我们演示的是非无菌条件下的 T 细胞分离方法。如果您的具体应用需要无菌细胞，请务必在组织培养超净台内、在标准无菌条件下完成所有操作步骤。感谢观看，祝您实验顺利！

方案

请阅读并遵循 Miltenyi 试剂盒中包含的实验方案，或访问在线网址 http://www.miltenyibiotec.com/。

讨论

从原始来源中分离细胞是许多更复杂实验方案中的必要步骤。Miltenyi 提供了可用于多种生物体（包括人类、非人灵长类动物、大鼠，以及本文所述的小鼠）的细胞分离试剂盒。基于磁珠的细胞分离技术可用于阳性筛选（或细胞耗竭），也可用于阴性筛选。本文中，我们演示了对未接触或初始型 CD4+ 辅助性 T 细胞的阴性筛选。采用此标准方案，通常可获得纯度 ≥ 96% 的 CD4+/CD3+ 细胞。尽管本视频方案中未展示流式细胞术（FACS）分析，但仍强烈建议通过 FACS 并使用适当的抗体检测所分离细胞的整体纯度。此外，我们演示的是非无菌条件下的 T 细胞分离方法。如果您的具体应用需要无菌细胞，请务必在组织培养超净台内、在标准无菌条件下完成所有操作步骤。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
MACS 缓冲液	试剂	无	无	按 Miltenyi 的说明进行配制。
CD4+ T 细胞分离试剂盒：非接触式分离	试剂	Miltenyi Biotec	130-090-860	与 Miltenyi 系统配合使用。
无菌磷酸盐缓冲液（PBS）	试剂			用于 MACS 缓冲液的配制。
Corning 35 mm 未经组织培养处理的培养皿	其他	Corning	430588	用于制备单细胞悬液。
70 微米细胞滤网	工具	BD Biosciences	352350	用于制备单细胞悬液。
6 mL 注射器	工具	Tyco Healthcare, Covidien	8881516051	用于制备单细胞悬液。
10× Dulbecco’s 磷酸盐缓冲液（DPBS）	试剂	Invitrogen	14200-075	用于红细胞裂解。
无菌水	试剂	Sigma-Aldrich	W4502	用于红细胞裂解。