一个鸡蛋在蠕虫(EIW)法是一种有用的方法来量化产蛋行为。产蛋的改变可以是一个模型有机体的行为反应<em>线虫</em到潜在的有害环境的物质,例如由致病细菌产生的。
线虫产卵行为是受环境因素如渗透压和振动2。在完全没有食物C.线虫也停止产蛋,并保留受精卵在子宫3。然而,不同来源的食品,特别是病原细菌,特别是粪肠球菌 ,对产卵行为的影响没有得到很好的特征。蛋在蜗杆(EIW)法是一种有用的工具,不同类型的细菌的影响量化,在这种情况下, 大肠杆菌粪,产蛋行为。
EIW检测涉及计数鸡蛋的数量保留在子宫C.线虫 4。 EIW检测涉及漂白上演,妊娠成人C.线虫去除角质层,从动物中分离保留的鸡蛋。在漂白之前,蠕虫暴露于细菌(或任何不同的环境线索)一段固定的时间。漂白后,一个是很容易能够指望鸡蛋保留子宫内蠕虫的数量。在这个实验中,一个量化的增长后,在鸡蛋保留E.粪曝光可以很容易地测量。的的EIW测定试验,可用于筛选潜在致病细菌或环境毒素的存在是一种行为。此外,EIW检测可能是一个工具,屏幕药物,影响神经递质的信号,因为产卵的行为是由神经递质,如5 -羟色胺和乙酰胆碱的5-9调制。
一个微小的,自由生活的蛔虫, 线虫 ,是一种模式生物,传统上用来研究人类发育和细胞的信令流程,因为透明解剖特征的发展,全基因组测序,短代时,基因的同源性。最近,C.线虫已经成为一种模式生物在该领域的环境毒理学和先天免疫10,11。
这些自我施肥雌雄同体蠕虫从卵孵化后的两到三天内性成熟。在它的生命周期,C.线虫通过四个幼虫阶段(L1-L4),达到成年之前。可以产生一个孤立的雌雄同体,平均300个后代在三天之内的峰值繁殖力。在生殖成熟C.线虫雌雄同体,受精卵在子宫内保留几个小时前被解雇。该存储在子宫中的蛋在任何一个时间的正常数量的(在繁忙繁殖力)是在10和15之间12。鸡蛋在子宫产蛋率和产蛋率的函数。受精卵从子宫排出,外阴13日开幕的周围布置的16个外阴部肌肉的收缩。的雌雄同体特定运动神经元(HSN)和VC影响肌肉收缩阴部肌肉的运动神经元突触上,从而鸡蛋产蛋行为5,7,13,14。驱逐鸡蛋从子宫的发生是由于神经元和肌肉的协调活动。
C.实验室培养线虫通常提出非致病性大肠杆菌 OP50的饮食。在自然环境中,C。线虫接触到的各种食物来源,如致病性细菌,也可以有潜在危害。当暴露于有害物质的的环境中,C。线虫保留鸡蛋,直到环境变得更加有利。据推测,这鸡蛋保留是为了保护他们的后代。
在这个蛋虫(EIW)测定,C.线虫暴露于潜在的致病细菌, 粪肠球菌 ,这是存在于环境中。 大肠杆菌致病形式曝光粪可引起持续性肠道感染,甚至死亡,在C线虫 15。暴露于其他形式的致病性细菌已被证明影响蛋保留16,17,但是没有量 化的效果。此外,轻度致病性菌株的大肠杆菌的效果肠球菌 ,菌株不会立即致命,产蛋行为还没有被研究。
EIW检测涉及计数鸡蛋的数量保留在子宫C.线虫 4。尽管C。线虫是透明的,积聚在子宫的卵可以是难以量化,在一个完整的动物。 EIW检测涉及漂白妊娠成人C.线虫暴露于细菌一段固定的时间。漂白粉溶液溶解身后留下的鸡蛋外被角质层。鸡蛋是折射的漂白剂,由于存在保护蛋壳的效果。漂白后,能够非常容易地发布从子宫的蠕虫后漂白的鸡蛋的数量来计算。
检测是一种简单,廉价和快速的方法来量化在子宫内一次鸡蛋的数量,从而量化的影响E.粪蛋保留。本试剂盒可用于其他类型的细菌,环境毒素或药物的效果进行量化的蛋性。本试剂盒也有可能被用作细菌致病性的屏幕。
成功地执行这个实验中最关键的步骤是:1)使用精心喂养C.股票线虫 ,2)单一类型的细菌培养测定板,3)准确吞吐量上演L4蠕虫暴露于E。粪 ,4)保持曝光时间E.粪一致的,所有试验和5),漂白时间不应超过10分钟,以防止鸡蛋解体。
这个实验,重要的是要挑选健康,良好的喂养蠕虫。产妇饥饿会影响后代的繁殖力和生长19,20,因此重要的?…
The authors have nothing to disclose.
笔者想感谢6月米德尔顿供给E.粪肠球菌细菌培养和指导。C.线虫提供了CGC,这是由美国国立卫生研究院办公室研究基础设施建设项目(P40 OD010440)。
Agar, ultrapure | Affymetrix | 10906 | |
Bacto Peptone | Becton Dickinson | 211677 | |
Bacto Tryptone | Becton Dickinson | 211705 | |
Brain Heart Infusion dehydrated medium | Carolina Biological Supply | 781781 | |
<em>C. elegans</em>, N2 strain | Caenorhabditis Genetics Center | http://www.cbs.umn.edu/cgc | |
Cholesterol | Alfa Aesar | A11470 | |
Culture plates for <em>C. elegans</em> | Tritech Research Inc. | T3308 | |
Culture plates for <em>E. faecalis</em> | Fisher Scientific-Fisherbrand | 875713 | |
<em>E. coli </em>(OP50) | Caenorhabditis Genetics Center | http://www.cbs.umn.edu/cgc | |
<em>E. faecalis</em> strains | provided by J. Middleton. All isolates were confirmed as enterococci | ||
by observing growth on enterococcosel agar (BBL) and in 6% NaCl broth; | |||
<p>all strains grew at 44.5 ºC and were catalase negative and hydrolyzed esculin. A simplified <span style="line-height: 1.6em;">dichotomous key based on pigmentation and fermentation reactions for six sugars </span><span style="line-height: 1.6em;">(arabinose, mannitol, methyl-α-D-glucopyranoside (MGP), ribose, sorbose and sorbitol) allowed </span><span style="line-height: 1.6em;">presumptive identification of all <em>E</em>. <em>faecalis</em> strains (Efs lacks pigmentation and is arabinose, MGP </span><span style="line-height: 1.6em;">and sorbose negative and sorbitol, mannitol and ribose positive). All presumptive Efs strains </span><span style="line-height: 1.6em;">were confirmed using the API 20 STREP system (Biomerieux).</span></p> | |||
Microscope | Motic | SMZ 168B | any microscope with transmitted illumination and 50X magnification should be sufficient |
Streptomycin sulfate | Fisher BioReagents | BP910-50 | |
Tryptic Soy Agar (Soybean-Casein Digest Agar Medium), Difco | Becton Dickinson | 236950 | |
Trypticase Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium), BBL | Becton Dickinson | 211768 | |
Yeast extract | Acros | 61180-1000 |