用的表面图案化微流体系统用于在单细胞水平调查空泡（S） - 细胞的相互作用及产生的生物效应

Summary

制造了微流控芯片，以产生用于串联气泡的金点对，以及用于附近单细胞图案化的纤连蛋白涂层岛。通过粒子图像测速法对所得流场进行表征，并用于研究各种生物效应，包括细胞膜穿孔、膜变形和细胞内钙反应。

Abstract

在这个手稿，我们首先描述的微流体芯片的制造协议与金点和纤连蛋白涂布的区域中的相同的玻璃基板上，能精确控制串列式泡沫和具有良好定义的位置和形状的附近形成图案的单个细胞的产生上。然后，我们通过使用两个脉冲激光照射一对金点的有几微秒的时间延迟表明汇接气泡的产生。我们通过可视化的高速成像泡沫泡沫交互和射流形成，并使用粒子图像测速（PIV）描述所生成的流场。最后，我们提出这种技术单细胞分析，包括细胞膜上穿孔用高分子吸收，通过附加整联蛋白结合珠的位移确定的局部膜变形，并从比例成像细胞内钙离子反应的一些应用。我们的结果表明，一个快速和定向喷射流是亲由串联气泡相互作用，其可在接近生长的细胞的表面上施加一个高的局部剪切应力duced。此外，不同的生物效应可通过调节到汇接气泡从细胞相隔距离改变喷射流的强度来诱导。

Introduction

人们越来越认识到细胞的异质性，从基因，蛋白质和代谢物的随机产生的表达，存在较大的细胞群中，并在生物学作为一个基本原则，使细胞适应和进化^1。因此，它常常是不精确和不可靠使用基于人口的散装测量理解各个细胞和它们之间的相互作用的功能。因此在生物和药理研究高息的单细胞分析开发新技术是，并且可以使用，例如，以更好地理解在干细胞生物学和癌症治疗^2-4键信号通路和过程。在近年来，微流体平台的出现，极大地促进单细胞分析，其中将已与新颖的分析策略⁵进行定位，处理，并从单个细胞的反应的观察。

气穴起着各种范围的生物医学应用，包括高强度的癌症的治疗中具有重要作用聚焦超声^{（HIFU）6，}由冲击波碎石肾结石的非侵入性碎片^{（SWL）7，}药物或基因递送由sonoporation ^8，并且通过水动力空化气泡^9,10细胞或组织的最近报告破坏。尽管这样，空化气泡（多个）与生物组织和细胞相互作用的动态过程还没有被很好地理解。这是由于在通过超声，冲击波，和局部液压产生空化起始和气泡动力学的随机性;此外，还有一个缺有利的技术来解决的生物细胞本身固有的复杂和快的反应，特别是在单细胞水平的。

由于这些挑战，这并不奇怪，很少研究有蜂N报调查良好控制的实验条件下，泡沫细胞的相互作用。例如，单个细胞的膜穿孔被困在悬浮液¹¹和人红细胞¹²的脉冲大变形已在微流体通道使用激光产生的单一气泡证明。后者的技术，但是，可以只在因核¹³的存在的真核细胞中产生非常小的变形。此外，很难在悬浮处理细胞时监视下游生物效应。在其它研究中，细胞结合的微泡（或超声造影剂）的超声激发用于生产单贴壁细胞的膜穿孔和/或细胞内钙离子的反应已经报道^8。单贴壁细胞的膜穿孔，也可以通过使用在薄液层含有光吸收锥虫蓝溶液¹⁴激光产生的串联的气泡产生，或通过微秒激光脉冲通过在微容器¹⁵的光学吸收基板照射所产生的振荡气体气泡。时相比，光学吸收基底具有的优点在激光吸收台盼蓝溶液，因为后者是细胞毒性。更重要的是，激光产生的气泡是在比声学激发的气泡的气泡尺寸和位置方面更加可控。然而，在所有这些先前的研究中，细胞形状，取向，和粘附条件不加以控制，其可以基本上影响细胞响应和机械应力¹⁶产生生物效应。

为了克服在以前的研究这些缺点，我们最近开发了气泡的产生，细胞图案化，气泡的气泡 - 细胞相互作用，和实时通过使用微加工TECHN的一个独特的组合构成的微流控芯片细胞应答的生物测定法的实验系统iques。从其他外地区分我们的实验系统的三个主要功能有:1）在玻璃基板上的微米级金的点的图案形成，以使气泡生成¹⁷的局部激光吸收; 2）在同一基板上的细胞粘附的细胞外基质（ECM）的微米大小的岛的图案化，以控制这两个位置和各个单元的几何形状;和3）从3D气泡泡沫 - 细胞相互作用域的尺寸与准二维空间压缩，以促进在面内的可视化气泡气泡的相互作用，喷射流场，细胞变形，和生物效应，在所有捕获一个改进的成像序列（ 图1d）。

图1:微流体芯片和不同测定的示意图。 a）在频道的组装微流控芯片充满了蓝墨水可视化。 b）在图案化的细胞和金的点在微流体芯片内的区域（在邻近的两金点之间的距离为40微米）。工作单位的许多对可以被布置在一个通道。 三）特写由一对金点的并粘附于细胞图案化区域中的HeLa细胞的单一工作单元的图像。 d）该设备的操作示意图。单个细胞附着和扩散上涂覆有纤连蛋白的"H"形岛。一对空化气泡（串联气泡）与抗相振荡的被照亮的金点的脉冲激光束（参见图4a），导致了快速和局部的喷射朝向目标小区移动附近的发生而产生。细胞可能会变形，中蕴含大分子摄入，和/或与钙反应的刺激，这取决于细胞的串联气泡的偏离距离（S _D）。F ="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55106/55106fig1large.jpg"目标="_空白">点击此处查看该图的放大版本。

这个平台可以与荧光测定法和附着到细胞表面的气蚀引起的生物效应官能珠被进一步组合。特别是，该平台将打开在单细胞水平可靠和可定量测定的方式。到现在为止，我们已经使用了装置串联气泡诱导细胞膜变形，细胞穿孔和细胞内摄取，生存能力，细胞凋亡和细胞内钙响应的分析。在下面的协议中，我们描述了芯片制造的过程以及用于分析上述的各种生物效应的过程。此外，还描述了芯片的操作。

Protocol

1.微细

注:所有的微细加工过程在洁净室进行。 A镀铬掩模的微加工之前设计的， 见图2。

图2:图示在微流体芯片中的通道的设计和工作单位的尺寸。一个 ）掩模设计对准PDMS微通道（绿色）和玻璃基板（蓝色和红色）上的图案的。 二 ）在工作单元阵列的一个代表部分的掩模设计的放大图像。 c）一种工作单元的示意图示出了单元图案（蓝色）和一对金点的（红）。所有尺度显示在右下角。 请点击这里查看LARGER版本这个数字。

1. 金圆点图案
   注:各金点的面积被设计为内25-30微米^2，因此，它是足够大，以吸收激光能量用于生成气泡，但足够小以避免单个细胞附着到它。为金点制造的示意图示于图3a。
   1. 载玻片清洁（在化学罩）
      1. 冲洗用丙酮随后异丙醇（IPA）的载玻片，然后用N ₂流干燥。
      2. 浸泡在食人鱼溶液滑动（H ₂ SO _4:2 O ₂ = 4 H:1）10分钟。
      3. 取出的幻灯片，用去离子水冲洗，然后用N ₂流干燥。
      4. 烘烤在电炉上的载玻片在120℃下进行10分钟。
      5. 治疗在等离子体灰幻灯片在100瓦90秒。
   2. 旋涂（旋涂罩）
      1. 开启热板，并等待直至温度稳定在95℃。
      2. 按照涂层过程:
         1000转5秒以500转/ s斜坡;
         那么3000转30秒以1000转/ s斜坡。
      3. 通过施加真空固定清洁载玻片上旋涂机。
      4. 覆盖P-20的滑动面，并开始该涂层配方。
      5. 重复NFR-负性光刻胶涂覆过程。
      6. 烘烤在95℃下滑动60秒和等待，直到它冷却到室温。
   3. 光刻
      1. 安装铬掩模到掩模对准，并确保图案面朝下朝幻灯片。
      2. 设置光刻配方​​硬曝光方式与9号紫外曝光的，并迅速对准掩模的玻璃基板。
      3. 进行UV曝光之后，烘烤在95滑动6℃持续1分钟，然后让其冷却至室温。
   4. 发展
      1. 制定对60号显影液幻灯片模式。
      2. 从开发人员删除的幻灯片，它用去离子水冲洗，并用N ₂流干燥。
      3. 检查图案几何形状的显微镜下，并测量和记录特征尺寸。
   5. 金沉积（电子束蒸发）和剥离
      1. 烘烤，在120℃下的滑动5分钟，并让其冷却到室温。
      2. 在500乇和100W。清洁带中的反应性离子蚀刻（RIE）机等离子体滑动为90秒
      3. 钛的存款5纳米和Au的15nm的上使用电子束蒸发器¹⁷的滑动。
      4. 浸泡过夜幻灯片中含光刻胶去除溶剂，以消除对NFR顶部的金色休息抵制玻璃烧杯中。
      5. 检索幻灯片，我平齐吨，丙酮其次是IPA，并用N ₂流干燥。
      6. 在100瓦在清洁中的氧等离子体灰90年代以前干在115℃的热板的幻灯片。
2. 通过剥离分子组装图案（MAPL）
   注:各纤连蛋白涂覆的岛的面积被设定为内700-900微米²以促进适当的HeLa细胞在一个正方形的区域扩展，同时最小化多细胞聚集在岛上的机会。用于细胞图案化岛的制备示意图示于图3b。
   1. 旋涂
      1. 重复步骤1.1.2，而是使用S1813阳性光致抗蚀剂和115℃的温度。
   2. 对准光刻
      1. 装入的铬掩模到掩模对准器，并确保与图案面朝下朝着与所述滑动金色圆点。
      2. 将光刻配方硬曝光模式，第9号的紫外线照射。
      3. 对齐用的对准标记，周围设荫罩的边缘的底部滑动顶端掩模，作为空间参考。
      4. 检查掩模的中心部分，并验证该图案特征正确对齐。
      5. 不完整的烘烤后的紫外线照射。
   3. 发展
      1. 重复步骤1.1.3，但有45秒的发展干燥加热板上，并在N ₂存储保存之前。
3. 化学处理
   1. 制备钝化溶液:0.5毫克/毫升的PLL-G-PEG在10mM HEPES缓冲液。
   2. 检索N ₂储存幻灯片并使用RIE的参数设置清洁:500托的压力，100瓦功率，90-S的持续时间。
   3. 吸管钝化溶液到一张石蜡膜的一滴。
   4. 三明治电影和幻灯片的解决方案，确保与模式的端功能朝下向膜;避免气泡的形成。
   5. 除去膜中的滑动之前等待45分钟。
   6. 连续浸泡滑动在光致抗蚀剂去除剂，光致抗蚀剂去除剂和去离子水（1:1），和去离子水，并搅拌它在超声浴中90秒为每个浸泡。
   7. 干在电炉上滑动在干燥器密封并将其储存在冰箱中之前以除去水分。
4. 芯片组装
   1. 重复步骤1.1.1-1.1.4，但与SU8-2025阴性光刻胶和参数设定所指称为MICROCHEM协议^18，与光掩模制备的硅模具。
   2. 制作出PDMS微通道（40毫米×25 x 5毫米，长×宽×高），并使用软光刻小PDMS板（800微米宽槽结构）。
   3. 冲microchannel对于流体接入端口和清洁它用胶带，然后用IPA。
   4. 屏蔽与PDMS板玻璃基板的图案化区域，并应用RIE（100瓦，500毫托，60秒），从周边区域去除的PLL-G-PEG。
   5. 治疗所述微通道用RIE（25瓦特，500毫托，25秒）的降低的剂量，然后将其对准到所述图案化的玻璃基板（除去了小的PDMS板）;带来的微通道，并在一个立体镜下共形接触的图案化的玻璃基板上。

图3:微细加工和芯片组装的示意图。一 ）在玻璃基板上金色圆点格局。 b）在通过MAPL细胞图案的玻璃基板的制备。 c）与等离子体结合微流体通道的装配。请参阅材料清单的定义ÔF中的缩写。 请点击此处查看该图的放大版本。

5. 细胞附着
   注:HeLa细胞例行维持在DMEM补充有10％FBS和1％抗生素/抗有丝分裂溶液在细胞培养孵化器。为芯片组装和细胞附着的示意图示于图3c。
   1. 素，用PBS芯片在1微升/分钟30分钟，然后注入纤连蛋白溶液（50微克/毫升PBS中，1微升/分钟）45分钟。
   2. 在等待时，trypsinize细胞培养物用0.25％胰蛋白酶-EDTA，把它们洗干净在培养基中，离心单个细胞，并在5×10 ⁶个细胞/ mL重组在预热（37℃）培养液中的细胞悬浮液。
   3. 替换用PBS纤连蛋白溶液和芯片在10微升/分钟5分钟冲洗。
   4. 注入所制备的细胞悬浮液到芯片，停止流动，夹紧插座，并保持在细胞培养孵化器芯片30分钟。
   5. 释放出口和10微升/分钟5分钟用细胞培养基芯片冲洗。降低培养液的灌注流量到0.75微升/分钟和维持细胞培养在培养箱2小时。

2.气泡产生和流量可视化

注:实验装置的示意图示出在串列气泡生成，并与在微流体通道附近的生长的单细胞所得到的流相互作用图4a。

1. 串联的生成与两个激光器和定时控制气泡
   1. 放在倒置显微镜的阶段的微流体芯片和对齐两个脉冲Nd的焦点:在一对图案化的金点分隔的B YAG激光器（λ= 532纳米，5纳秒脉冲持续时间）Ÿ40微米。
   2. 使用数字延迟发生器触发两个激光器大约2.5微秒的时间延迟产生的金色圆点发起的两个气泡。
   3. 调整激光的输出能量（〜10μJ），以在50±2微米的产生气泡的最大直径。
   4. 高速摄像头（200纳秒曝光和每秒200万次帧（fps））同步到激光器和捕捉泡沫膨胀，崩溃，泡沫泡互动，射流形成的动态。
2. 喷射速度的量化
   1. 记录喷射尖端（J _1）的位置在所述第一泡（B _1）和B ₁的远端的近端，开始于第二气泡（B _2）的产生，并为J的触地结束₁朝_B1的远端;参见图5a的示意图。
   2. 线性拟合的位置机器人的时程小时近端（喷射尖端）和远端端部。计算的前端位置与时间曲线的斜率为近端，以确定喷射速度。这两条线的交点表示喷射触地时间。更多的细节可以参考19中找到。
3. 串联气泡诱发的流场的可视化
   1. 制备1微米的聚苯乙烯（PS）珠粒在DI水中的悬浮液（2.6％重量/体积）和注入珠粒进入微流体芯片。
   2. 产生串联气泡作为在步骤2.1.1-2.1.3所述。
   3. 用一个高速摄影机在5M的帧率的用100纳秒的曝光时间组帧速率记录串联气泡动力学。
   4. 载所获取的图像序列划分成一种商业PIV软件。
   5. 将每个图像划分成16×16像素（PX）用75％的重叠较小询问窗口。
   6. 应用多道次的迭代和地区的过滤器，以减少速度场，计算错误，并输出的结果中的速度矢量地图。

图4:图示的实验装置和图像记录。一 ）实验装置为串联气泡产生。 b）用作不同类型的成像采集的时间序列。 FL:荧光显微镜，BF:明场，IFT:帧间的时间。 请点击此处查看该图的放大版本。

3.单细胞分析和生物效应

注:串联气泡产生毗邻靶细胞，将所得的生物效应，研究在对峙距离依赖性的方式。对于不同类型的图像采集的时间序列在图4b中描绘。

1. 膜穿孔和大分子的摄取
   注:细胞外大分子的摄入到靶细胞的特征在于，膜不通透性碘化丙啶通过在细胞膜上的穿孔部位的渐进扩散（PI）。
   1. 以下步骤1.5，取代常规培养基（ 即，DMEM）中以在整个实验过程中的0.5微升/分钟的灌注流量运行PI溶液（100微克/毫升的DMEM）。
   2. 编程显微镜控制软件来自动选择在转台的PI荧光立方体和同步CCD照相机通过PI荧光激发的定时捕获的荧光图像为200毫秒的曝光时间。
   3. 后两个激光焦点对准到一对金点旁边的一个目标小区，记录都亮场（BF）和荧光（FL）图像串联泡处理之前。
   4. 立即使用显微镜控制软件启动目标单元的时间推移的荧光图像记录不久步骤后2.1捕获PI摄取的历史。
2. 膜变形
   1. 制备1微米珠（1％重量/体积，用水溶性碳二亚胺活化的），并与肽2000（100微克/毫升PBS中）官能它们。
   2. 以下步骤1.5，孵育贴壁细胞与官能化珠在1×10 ⁹珠/ mL的密度在37℃下30分钟。
   3. 重复步骤2.1以产生串联气泡旁边的靶细胞，并与超高速摄影机在500万fps的帧速率运行记录细胞变形。
   4. 鉴定的3珠子留在成像平面上整个实验一三元组和编译它们作为位置（X _{1，Y 1）（X 2，Y 2），}和（x _{3，y 3}的）在实验中的坐标。
   5. 之前和AF计算黑社会的面积用公式TER串联泡沫处理:
      
   6. 计算面积应变为:
      
   7. 基于所述三个顶点的前和串列泡处理后的坐标，计算以下建立的协议^20,21本地主应变和面积菌株。
3. 活力和细胞凋亡
   注:FITC Annexin V的标记细胞，包括细胞凋亡的人，通过磷脂酰丝氨酸（绿色荧光）的外化。 PI标签坏死细胞（红色荧光）的细胞核。亮场成像用于记录细胞形态和协助细胞活力和凋亡的识别。
   1. 记录在微流体通道（通过在通道中的地址标签促进每个处理过的细胞的位置，参见图2b
   2. 灌流用FITC膜联蛋白V溶液在芯片15分钟，然后孵育另外2小时细胞培养液的处理过的细胞。阳性细胞显示绿色荧光。
   3. 串联泡处理后24小时，重复步骤3.3.2研究在目标细胞中的长期生物效应。
4. 钙反应
   1. 用3 10微升％混合3微升的呋喃-2 AM原液（1mg / mL的在DMSO中）w / v的尼克F-127在低血清培养基中制备最终标记溶液（6微米）的500微升。
   2. 以下步骤1.5，替换与标记溶液的细胞培养基和室温下孵育在黑暗中进行40分钟（1微升/分钟灌注率）。
   3. 在开始细胞实验之前重新填充减少的血清培养基（0.75微升/分钟灌注率）的信道。
   4. 启动比率成像（波长:三百八分之三百四纳米，50毫秒的曝光）使用商业PTI系统靶细胞。
   5. 经过10秒的静息水平的细胞比例成像，产生气泡串联按照步骤2.1;用0.1秒，1分钟帧间时间（IFT）的第一个记录，然后增加IFT到1秒为另一分钟，2分钟后进一步增加至5秒。
   6. 使用PTI软件计算在感兴趣的区域（ROI），其正比于细胞内钙离子浓度的比率R = F340 / F380。

Results

在这项工作中所描述的微流体平台可用于调查气泡气泡的相互作用，并在单细胞水平分析各种气穴引起的生物效应。在这里，我们介绍几个例子来演示各种实验研究和生物测定可在我们的实验系统中进行的。我们将首先说明与射流形成，将得到的流场的可视化，和喷射速度（ 图5a）的计算串联气泡的瞬时相互作用。我们将串联然后本实施例泡沫诱发局部细胞膜变形（ 图5b），精确定位膜穿孔与PI摄取（ 图5c），和细胞内钙响应（ 图5d）。其他例子，如细胞活力和凋亡测定法，可以在参考22中找到。

图5a示出与射流形成，通过高速成像捕获，并且通过PIV表明所得到的流场的串联气泡相互作用的一个例子。具体来说，按照其极大的扩展，第一泡b ₁分配（在0微秒生产）的崩溃不对称由第二泡B _2（2.5微秒生产）的快速扩张扭曲，导致一个"向上"的形...

Discussion

单细胞分析，在用活细胞成像的组合，大大提高了在单个细胞，如表型的发展和免疫反应²³动态和常变量过程的理解。在对比中菜或瓶的现有的细胞培养，微流体系统使微环境的精确控制，下至单细胞水平，在现实的时间。因此，先进的微流体技术和工艺在很大程度上改善了单细胞分析的吞吐量和重现性。通过整合软光刻和表面图案化，微流体系统可进一步设计成便于单个小区对spatiotemporally可变刺激的复杂模式响应的深入分析。例如，短暂的化学或机械的线索已成功交付到单个细胞，而他们的生物或机械反应被自动记录并分析²4。尽管总的趋势，微流体在细胞水平上分析了空化引起的生物效应的应用已经非常有限。最值得注意的是，它仅被施加到悬浮液中的单个细胞通过micropillars ¹¹捕集的气泡引起的膜穿孔。在大多数的贴壁细胞的研究中，控制细胞的形态保持在动态泡沫 - 细胞相互作用一致性的好处是不可用或在很大程度上被忽视。

我们已经开发出一种微流体系统以精确地控制的启动，后续扩展，和空化气泡塌陷动力学;与射流形成泡沫，泡沫的相互作用;和细胞形状，取向，粘合...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
试剂/材料
75 mm x 38 mm 普通显微镜载玻片	康宁	2947-75X38
丙酮	Sigma Aldrich， Co.	320110	ACS 试剂，≥99.5%
异丙醇	Sigma Aldrich， Co.	W292907	≥99.7%，FCC，FG
硫酸	Sigma Aldrich， Co.	320501	ACS 试剂，95.0-98.0%
过氧化氢	Sigma Aldrich， Co.	216763	30 wt.% 在 H2O
引物 P-20	Microchem	MCC 引物 80/20
NFR 光刻胶	JSR	NFR016D2
光掩模	Photoplotstore	N/A	4x4 直写掩模
MF-319 显影	Shipley （Rohm and Haas）	Microposit MF-319
1165 光刻胶去除剂	Dow Chemical， Co.	DEM-10018073	基于 1-甲基-2-吡咯烷酮的
S1813 光刻胶	Shipley（Rohm and Haas）	S1813
PLL-g-PEG	SuSoS	PLL（20）-g[3.5]-PEG（2）
HEPES	ThermoFisher Scientific	15630080
石蜡膜	HACH	251764
SU-2025 光刻胶	Microchem	SU-2025
PDMS	道康宁	184 SIL ELAST KIT 0.5KG
微孔管	Saint-Gobain PPL Corp.	S-54-HL
金属针	New England 小管	NE-1300-01	切割管（直），0.025"外径 x 0.017 英寸内径 x 0.50 英寸长
HeLa 细胞	Duke 细胞培养设施	（307-CCL-2） HeLa，p.148
DPBS （1x） 缓冲液	ThermoFisher Scientific	14190144
DMEM 培养基	ThermoFisher Scientific	11995065
纤连蛋白牛蛋白，血浆	ThermoFisher Scientific	33010018
0.25% 胰蛋白酶-EDTA （1x）	ThermoFisher科学	25200056
化丙	ThermoFisher Scientific	P21493
羧酸盐微球 1.00 μm	Polysciences， Inc	08226-15
羧酸盐微球 2.00 μm	Polysciences， Inc	18327-10
EDC（1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐）	ThermoFisher Scientific	22980
Sulfo-NHS	Sulfo-NHS（N-羟基磺基琥珀酰亚胺）	24510
Peptite-2000	Advanced BioMatrix	5020-5MG
FITC Annexin V	ThermoFisher Scientific	A13199
Fura-2，AM	ThermoFisher Scientific	F1221
DMSO	Sigma Aldrich， Co.	D2650
F-127	invitrogen	P6866	0.2 µm 过滤（10% 水溶液）
还原血清培养基	赛默飞世尔科技	11058021
名称	Company	目录号	评论
<>设备
等离子体灰化器	Emitech	K-1050X	O2 / Ar 等离子体灰化光刻胶和其他有机材料
掩模对准器	SUSS MicroTec	Karl Suss MA6/BA6
电子束蒸发器	CHA 工业	CHA 工业解决方案 电子束
RIE	Trion 技术	Trion Technology Phantom II	（氧化物/氮化物/聚合物）蚀刻
立体镜	AmScope	美国瞄准镜 SM-4TZ-FRL	立体显微镜
注射泵	Chemyx Inc	NanoJet
细胞培养箱	NuAire	AutoFlow NU-8500 水套 CO2 培养箱
生物安全柜	NuAire	NU-425-400
水浴	式 VWR	1122s
离心机	IEC	Centra CL2
显微镜	蔡司	Axio Observer Z1
Nd：YAG 激光器 （激光 1）	New Wave Research	Tempest
Nd：YAG 激光器 （激光 2）	New Wave Research	猎户座
延迟发生器	Berkeley Nucleonics	BNC 565-8c
闪光灯	Dyna-Lite	ML1000 光纤耦合闪光灯管
高速摄像机	DRS Hadland	Imacon 200
高速相机	岛津	HPV-X
高速相机	Vision Research	Phantom V7.3
PIV 软件	LaVision	DaVis 7.2
相机	蔡司	AxioCam MRc 5
软件	蔡司	AxioVision
PTI 系统	Horiba	S/N：1705 RAM-X
EasyRatio 软件	Horiba	Easy Ratio Pro 2	版本 2.3.125.86
63× 客观	蔡司	LD Plan Neofluar